丹参三七不同配比对急性心肌缺血犬心外膜心电及心肌组.doc

蚅肂蒄薅羄肁膄莈袀肀芆薃螆腿莈莆蚂腿肈薂薈膈膀莄羆膇莃薀袂膆蒅蒃螈膅膅蚈蚄膄芇蒁羃膃荿蚆衿芃蒂葿螅节膁蚅蚁袈芄蒈薇袇蒆蚃羅袇膅薆袁袆芈螁螇袅莀薄蚃袄蒂莇羂羃膂薂袈羂芄莅螄羁莇薁蚀羁膆莄蚆羀艿虿羅罿莁蒂袁羈蒃蚇螇羇膃蒀蚃肆芅蚆薈肅莈蒈袇肅肇蚄螃肄芀蒇蝿肃莂螂蚅肂蒄薅羄肁膄莈袀肀芆薃螆腿莈莆蚂腿肈薂薈膈膀莄羆膇莃薀袂膆蒅蒃螈膅膅蚈蚄膄芇蒁羃膃荿蚆衿芃蒂葿螅节膁蚅蚁袈芄蒈薇袇蒆蚃羅袇膅薆袁袆芈螁螇袅莀薄蚃袄蒂莇羂羃膂薂袈羂芄莅螄羁莇薁蚀羁膆莄蚆羀艿虿羅罿莁蒂袁羈蒃蚇螇羇膃蒀蚃肆芅蚆薈肅莈蒈袇肅肇蚄螃肄芀蒇蝿肃莂螂蚅肂蒄薅羄肁膄莈袀肀芆薃螆腿莈莆蚂腿肈薂薈膈膀莄羆膇莃薀袂膆蒅蒃螈膅膅蚈蚄膄芇蒁羃膃荿蚆衿芃蒂葿螅节膁蚅蚁袈芄蒈薇袇蒆蚃羅袇膅薆袁袆芈螁螇袅莀薄蚃袄蒂莇羂羃膂薂袈羂芄莅螄羁莇薁蚀羁膆莄蚆羀艿虿羅罿莁蒂袁羈蒃蚇螇羇膃蒀蚃肆芅蚆薈肅莈蒈袇肅肇蚄螃肄芀蒇蝿肃莂螂蚅肂蒄薅羄肁膄莈袀肀芆薃螆腿莈莆蚂腿肈薂薈膈膀莄羆膇莃薀袂膆蒅蒃螈膅膅 丹参/三七不同配比对急性心肌缺血犬心外膜心电及心肌组织染色的影响商洪才 张伯礼 高秀梅 王怡 李玉红 康立源 杜嵘 江海涛 摘要：目的：观察丹参/三七不同配比对实验性犬急性心肌缺血的影响。方法：采用冠脉左前降支结扎法造成急性心肌缺血模型。结果：以丹参为主的四个药对比例组，即10/6、10/3、10/1、10/0，有明显改善犬心肌缺血的作用，减轻由心外膜心电图所标测的心肌缺血程度，减少通过TTC染色所显示的缺血区。其中尤以10/6、10/3组作用突出。结论：1、在主药效范围内，丹参、三七配伍后药效作用强于单味药物，且配伍存在最佳比例阈（范围）。2、丹参在直接对抗上强于三七，三七的优势药效可能在其他靶点上。3、同一配伍的不同配比与效应的关系是非线性的。关键词：丹参 三七 药对 配伍 配比 急性心肌缺血复方丹参方是经过多年临床实践验证过的有效方剂。其中丹参/三七这一药对发挥了主要药效作用。而丹参和三七是否有一最佳配比，最佳配比是否即为药典所述，尚有疑问。为进一步探讨这一药对的药理作用机制，发现最佳比例，进而引申到方剂的配伍研究，我们利用冠脉结扎犬模型进行了实验研究，现将结果报告如下：材料与方法：1 实验材料：1.1 实验动物：健康成年杂种犬，雌雄不限，体重（11.171.83）kg，由天津市中医学院实验动物中心提供。1.2 药品工艺：实验药物提取由北京中医药大学药学院完成。工艺如下：选丹参道地药材（陕西商洛）3500g，用10倍量90%乙醇回流提取2次，再用60%乙醇回流提取一次，挥干乙醇，得丹参总醇提物干燥品计787.4g；同时选三七道地药材（云南文山）3500g，用10倍量95%乙醇回流提取3次，挥干乙醇，得浓缩物，加水溶解，用乙醚脱脂后加正丁醇萃取，减压回收正丁醇的总皂苷粗提物403.6g。将以上两种粗提物分别研钵研细，过200目筛，按照7种比例（10/0、10/1、10/3、10/6、10/10、1/10、0/10）将二者混匀充分，经换算配制成生药浓度为1.53g/ml的药液。1.3 实验仪器与试剂：BIOPAC SYSTEM16道生理系统（美国），电切刀（波兰），SC-电动呼吸机（上海），37。C恒温水浴箱。TTC（2,3,5-triphenyltetrazolium chloride）Sigma产品；消心痛（天津海光制药厂，批号：010901）市售。2 动物分组给药方法：选健康成年犬50只，计算机随机数字法随机分为10组，每组5只。如下：假手术组（开胸后仅穿线，不做结扎；生理盐水2ml/kg）；模型组（既穿线又结扎；生理盐水2ml/kg）；丹参/三七10/0组： 简称1/1 （模型给药；1.31g/kg，丹参1.31，三七0 g/kg）；丹参/三七10/1组： 简称10/1 （模型给药；1.31g/kg，丹参1.19，三七0.12 g/kg）；丹参/三七10/3组： 简称10/3 （模型给药；1.31g/kg，丹参1.01，三七0.30 g/kg）；丹参/三七10/6组： 简称10/6 （模型给药；1.31g/kg，丹参0.82，三七0.49 g/kg）；丹参/三七10/10组：简称10/10 （模型给药；1.31g/kg，丹参0.655，三七0.655 g/kg）；丹参/三七1/10组： 简称1/10 （模型给药；1.31g/kg，丹参0.12，三七1.19 g/kg）；丹参/三七0/10组： 简称0/10 （模型给药；1.31g/kg，丹参0，三七1.31 g/kg）；阳性对照消心痛组：简称消心痛 （模型给药；0.34mg/kg）3 模型制作与指标观察1：以戊巴比妥钠30mg/kg于犬左前肢静脉注射麻醉；右侧卧位固定于手术台上，剪去颈部、胸部、腹部的毛，；分离气管并插入插管，连接并开通呼吸机行正压人工呼吸（频率1828次/分）。在腹部正中线右侧开口，分离出十二指肠以备给药。左侧第四、五肋间开胸，暴露心脏（避免伤及其它脏器），剪开心包，做心包摇床，小心分离冠状动脉左前降支中段，于第一、二分支间穿线以备结扎使用，进而造成急性实验性心肌缺血模型。在穿线点以下缝制30点固定式心外膜电极，连接16道生理记录仪，描记正常心外膜心电图。结扎冠脉30分后，记录心外膜心电图，作为给药前对照值。经十二指肠注入实验药物或生理盐水，于给药后30、60、90、120、180分钟记录30个标测点心外膜心电图，以此计算心肌缺血程度（-ST ）及心肌缺血范围（N-ST ）。 药后180分钟记录完毕，立即取下心脏，生理盐水冲洗，在-20。C冷冻3060分钟后，取出称量全心重量；在心脏结扎点以下，沿平行于冠状沟方向均匀地将左心室部分横断切成均匀的4片，然后置于TTC染液中，37。C恒温水浴箱染色510分钟，称量每片心肌缺血区（TTC未染色区）与非缺血区（TTC染色区）的重量，计算缺血区占左心室及占全心的重量百分比。4 统计学方法：以不同时间点的实测值进行给药前后自身比较，t检验判断其显著性；以其变化百分率进行组间比较，组间比较以F（q）检验判断其显著性。采用Stata4.0软件包进行数据处理。结果：1 对急性心肌缺血犬心肌缺血（心外膜心电图标测）的影响1. 1 对犬心肌缺血程度（-ST）的影响 见表1除假手术外，各组结扎后（给药前）-ST由结扎前4.656.43mv抬高到275.1925.54mv，两者比较，有统计学意义（p0.05；说明各组药前值具有可比性。10/6、10/3、10/1、10/0及消心痛组均有明显减轻犬心肌缺血程度（-ST）的作用。10/3、10/6两组自给药后30分钟起效，作用持续到观察终点；10/0、10/1两组为给药后120分钟起效，效果持续到终点；消心痛组从给药后60分钟生效，持续到终点。与药前及模型组比较，有统计学意义（p0.01、p0.05）。同时可以看到，随着时间的延长，作用愈加显著，心肌缺血程度明显减轻。而0/10、1/10、10/10三组却没有减轻心肌缺血程度的作用表现。组别n剂量（/kg）药前值（100%）30min60min药后90min120min180min模型组52ml277.3517.06278.8117.5(100.520.70)281.215.85（101.431.03）283.921.25（102.331.99）286.120.78(103.111.69)281.5515.82(101.572.68)10/051.31g276.4434.68276.4828.12(100.313.19)264.3526.03（95.984.23）240.2437.89(86.664.68)210.829.12(76.233.81) *191.2218.23(69.443.08) *10/151.31g269.7140.02278.2134.76(103.554.97)266.2132.32（99.175.04）244.5327.87(91.266.49)234.5729.48(87.598.35)*199.6325.65(74.283.03)*10/351.31g285.5818.65245.416.65(85.962.69) *248.3413.85（87.032.39）*221.099.42(77.573.87)*199.3821.13(69.936.99) *165.923.13(58.319.35) *10/651.31g268.6030.94240.367.4(90.238.31)*240.8813.18（90.246.62）229.38.50（86.3210.96）197.695.19(74.419.10) * 167.2824.84(63.7816.67) *10/1051.31g271.8314.7277.5911.68(102.192.39)286.1511.83（105.342.28）288.6514.84(106.294.81)280.8311.95(103.434.25)269.0811.19(99.083.12)1/1051.31g272.2518.49272.5817.11（100.158.52）272.7718.04（100.195.15）272.0917.86(99.950.36)271.317.46(99.670.99)267.3518.55(98.190.59)0/1051.31g255.9424.83260.5524.23（101.841.36）259.0323.91（101.261.78）254.9927.05(99.561.32)251.6732.46(98.093.99)252.228.97(98.392.44)消心痛50.34mg299.0212.97279.3018.49(93.352.91)254.9723.76（85.348.04）*235.1132.88（78.6510.77）*185.5315.17(62.196.34)*145.7423.42(48.656.88) *表1 各给药组对犬急性心肌缺血程度（-ST）的影响（心外膜心电图标测） （%） S注：与药前自身比较： p0.05 p0.01 与模型组比较：* p0.05 * p0.01 1. 2 对犬心肌缺血范围（N-ST）的影响 见表2除假手术外，各组结扎后（给药前）N-ST由结扎前1.111.48增加到29.40.69，两者比较，有统计学意义（p0.05；说明各组药前值具有可比性。丹参/三七各组给药前后心肌缺血范围（N-ST）无明显变化；消心痛组减小心肌缺血范围（N-ST）的作用明显（p0.01）。表2 各给药组对犬急性心肌缺血范围（N-ST）的影响（心外膜心电图标测） （%） S组别n剂量（/kg）药前值（100%）30min60min药后90min120min180min模型组52ml29.40.8929.40.89(1000.00)29.40.89(1000.00)29.40.89(1000.00)29.40.89(1000.00)29.40.89(1000.00)10/051.31g29.40.5529.40.55(1000.00)29.20.45(99.331.49)29.20.45(99.331.49)29.00.00(98.671.83)28.80.45(97.981.84) 10/151.31g29.21.0929.21.09(1000.00)29.21.09(1000.00)29.21.09(1000.00)28.81.30(98.621.89)28.61.14(97.951.87) 10/351.31g29.40.8929.01.00(98.641.86)29.01.00(98.641.86)28.80.84(97.971.85)28.40.55(96.642.36) 28.40.55(96.642.36) 10/652.31g29.40.5529.40.55(1000.00)29.40.55(1000.00)29.20.84(99.311.54)28.80.84(97.951.87) 28.60.55(97.291.52) 10/1051.31g29.20.4529.20.45(1000.00)29.20.45(1000.00)29.00.00(99.331.49)28.80.45(98.641.86)28.80.45(98.641.86)1/1051.31g29.40.5529.20.45(99.331.49)29.00.71(98.641.86)29.00.71(98.641.86)29.00.71(98.641.86)29.00.71(98.641.86)0/1051.31g29.40.8929.40.89(1000.00)29.01.00(98.641.86)29.01.00(98.641.86)29.01.00(98.641.86)29.01.00(98.641.86)消心痛50.34mg29.80.4528.40.55(95.311.81) *27.80.45(93.312.32) *27.60.55(92.642.75) *27.20.45(91.312.93) *26.20.84(87.953.72) *注：与药前自身比较： p0.05 p0.01 与模型组比较：* p0.05 * p0.01 2 对犬心肌缺血范围（TTC染色法测定）的影响 见表3由表3可见，模型组的缺血区/左室、缺血区/全心两项指标与假手术组比较，明显增加（p0.01），可以证明模型的成功。10/6组及消心痛组具有缩小心肌缺血范围的作用，与模型组比较，有统计学意义（p0.05）。其他各组，尤以10/3组为例，虽有缩小缺血范围的趋势，但无统计学意义。表3 各给药组对急性心肌缺血犬TTC染色缺血范围的影响 （S）组别n剂量( /kg)缺血区/左室（%）缺血区/全心（%）假手术52ml0.632 1.413*0.442 0.988*模型组52ml29.026 5.32418.994 3.09510/051.31g18.188 7.14911.03 4.52910/151.31g18.246 5.11810.604 1.87110/351.31g14.166 5.4468.692 3.27110/651.31g14.082 6.297*8.046 4.61310/1051.31g17.604 11.77811.058 6.4351/1051.31g16.944 5.4449.759 2.7470/1051.31g21.706 5.58811.714 2.265消心痛50.34mg11.882 6.135*7.884 4.490注：与模型组比较：* p0.05 * p0.01讨论：冠状动脉粥样硬化性疾病是从少量脂肪条纹沉积在血管壁表面开始的，随时间的增长脂肪条纹逐渐变大进而形成脂肪斑，动脉血管随之会变得狭窄。脂肪斑的破裂最终会导致血栓的形成，从而使血流量进一步减少，其结果是周围的心肌组织没有充分的氧气供应，这将会造成日后急性心肌梗死的出现。血流被完全阻塞20分钟会使心肌受影响的部位坏死，6小时即可发生不可逆的损伤。 有资料表明，急性心肌梗死后，各项心功能改变及其恢复程度和速度均与心肌梗死面积呈负相关。因而，现已把缩小心肌梗死面积作为抗心肌缺血药物的主要疗效指标3。本实验采用冠状动脉结扎犬模型，通过对心外膜心电图及定量组织形态学观察，测定了急性心肌缺血范围及程度，研究了丹参/三七药对不同配比口服（十二指肠）给药对实验性犬急性心肌缺血的不同影响。实验结果表明：以丹参为主的四个药对比例组，即10/6、10/3、10/1、10/0，有明显改善犬心肌缺血的作用，减轻由心外膜心电图所标侧的心肌缺血程度，减少通过TTC染色所显示的缺血区。其中尤以10/6、10/3两组作用突出。基本可说明在主药效范围内，丹参、三七配伍后效用强于单味药物，且配伍存在最佳比例阈（