女金丸检验操作规程.doc

太原大宁堂药业有限公司GMP管理文件题 目女金丸检验操作规程共6页第1页编 码JS-CJ-013版 本 号01制 定 人审 核 人批 准 人制定日期审核日期批准日期制定部门质量管理部颁发部门GMP办实施日期分发部门质量管理部、质量检验科。变更记录变更原因及目的：修订后的药品生产质量管理规范2010年版目的：本标准规定了女金丸成品的检验方法和操作要点，使其检验规范化、标准化。范围：适用于本公司女金丸成品的质量检验。责任人：质量检验员、微生物检测员、质量检验科科长。内容：1. 引用标准：中华人民共和国药典2010年版一部P4742. 试剂：甘油、水合氯醛、甲苯、硅藻土、乙醚、丙酮、硅胶G、环己烷、醋酸乙酯、盐酸、三氯化铁、乙醇、冰醋酸、二硝基苯肼、甲醇、苯、正丁醇、石油醚（6090）、氢氧化钠、乙酸乙酯、稀碘化铋钾、氨、三氯甲烷、三氯化铝。3. 对照品：丹皮酚对照品、黄芩苷对照品、桂皮醛对照品、盐酸水苏碱对照品、芍药苷对照品、延胡索对照药材、黄芩对照药材、陈皮对照药材、橙皮苷对照品。4. 仪器与用具：显微镜、甲苯水分测定器、水浴锅、微量进样器、薄层析、层析缸、超声波仪、电子天平、架盘天平、恒温培养箱、高效液相色谱仪、挥发油测定器。5. 操作步骤：5.1性状 通过目测、嗅觉、味觉等方法直观检验，本品为棕褐色至黑棕色的大蜜丸；气芳香，味甜、微苦。5.2外观 通过目测、手拭等方法直观检验，本品应圆整均匀，色泽一致，细腻滋润，软硬适中。5.3鉴别： 5.3.1显微鉴别，照药材及成方制剂显微鉴别操作规程（JS-TJ-001）试验。5.3.1.1糊化淀粉团块淡黄色（延胡索）。太原大宁堂药业有限公司 JS-CJ-013 共6页第2页5.3.1.2不规则分枝状团块无色，遇水合氯醛试液溶化；菌丝无色或淡棕色，直径46m（茯芩）。5.3.1.3非腺毛13细胞，稍弯曲，壁有疣状突起（益母草）。5.3.1.4草酸钙方晶成片存在于薄壁组织中(陈皮)。5.3.1.5纤维单个散在，长梭行，直径2450m，壁厚，木化（肉桂） 5.3.1.6内种皮厚壁细胞黄棕色或棕红色，表面观类多角形，壁厚，胞腔含硅质块（砂仁）。5.3.1.7纤维束周围薄壁细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维（甘草）。5.3.1.8韧皮纤维淡黄色，梭形，壁厚，孔沟细（黄芩）。5.3.1.9纤维成束，红棕色或黄棕色，壁甚厚（香附）。5.3.1.10薄壁组织灰棕色至黑棕色，细胞多皱缩，内含棕色核状物（熟地黄）。5.3.1.11薄壁细胞纺锤形，壁略厚，有极微细的斜向交错纹理（当归）。5.3.1.12不规则块片半透明，边缘折光较强，表面有纤细短纹理和小孔及细裂隙（鹿角霜）。5.3.2丹皮酚对照鉴别，照薄层色谱操作规程（JS-TJ-005）试验。5.3.2.1取大蜜丸18g，研碎，置500ml圆底烧瓶中，加水200ml，连接挥发油测定器，自测定器上端加水至刻度并溢流入烧瓶时为止，再加石油醚（6090）1ml,连接回流冷凝管，加热并保持微沸1小时，放冷，取食油醚液作为供试品溶液。5.3.2.2另取丹皮酚对照品，加石油醚（6090）制成每lml含1mg的溶液，作为对照品溶液。5.3.2.3照薄层色谱（附录VI B）试验，吸取上述量种溶液各2l，分别点于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯(3:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铁乙醇-盐酸（50：1）的混合溶液,5.3.2.4供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。5.3.3桂皮醛对照鉴别，照薄层色谱操作规程（JS-TJ-005）试验。5.3.3.1取桂皮醛对照品，加石油醚（6090）制成每lml含0.5l的溶液，作为对照品溶液。5.3.3.2照薄层色谱（附录VI B）试验，吸取5.3.2.1项下的供试品溶液5l及上述对照品溶液2l，分别点于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以石油醚（6090）-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼乙醇试液。太原大宁堂药业有限公司 JS-CJ-013 共6页第3页5.3.3.3供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。5.3.4照薄层色谱操作规程（JS-TJ-005）试验。5.3.4.1取大蜜丸9g,剪碎，加水60ml，搅拌使溶解，加热回流30分钟，放冷，离心，取上清液，用稀盐酸调pH值至12，离心，取上清液，滤过，滤液通过732清型阳离子交换树脂柱（内径为10mm,柱高为15cm），流速为每分钟1.01.5ml以水洗至洗脱液近无色，弃去洗脱液，再以氨溶液（15-100）30ml洗脱，收集洗脱液，水浴蒸干，残渣用80%乙醇10ml分次溶解，加再2活性炭-中性氧化铝柱（活性炭100目以上，0.3g；中性氧化铝100200目，2g;混匀，装柱，内径为15mm,）上，用80%乙醇 20ml洗脱，收集流出液与洗脱液，蒸干，残渣加甲醇0.5ml,使溶解，作为供试品溶液。5.3.4.2另取盐酸水水苏碱对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。5.3.4.3照薄层色谱法（附录VI B）试验，吸取上述两种溶液各25l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-乙酸乙酯-盐酸（8：1：3）为展开剂，展开，取出，晾干12小时以上，喷以稀碘化铋钾试液，放置2.5小时，在次喷稀碘化铋钾试液。5.3.4.4供试品色谱中，在于对照色谱相应的位置上，相同颜色的斑点。5.3.5照薄层色谱操作规程（JS-TJ-005）试验。5.3.5.1取大蜜丸18g,剪碎，加硅藻土10g，研匀，加浓氨试液10ml，密塞，振摇，放置10分钟，加三氯甲烷60ml，加热回流30分钟，滤过，滤液浓缩至约10ml,用0.5mol/L盐酸溶液振摇提取2次，每次10ml，合并提取液，加浓氨试液5ml，（使pH值至11以上），用三氯甲烷振摇提取2次，每次10ml,合并三氯甲烷液，水浴蒸干，残渣用三氯甲烷溶解使成0.5ml，作为供试品溶液。5.3.5.2另取延胡索对照药材0.5g，加浓氨试液0.5ml，振摇，放置10分钟，加三氯甲烷20ml，同法制成对照药材溶液。5.3.5.3照薄层色谱法（附录VI B）试验，吸取供试品溶液1020l ，对照药材溶液10l，分别点于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮（9：2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，太原大宁堂药业有限公司 JS-CJ-013 共6页第4页5.3.5.4供试品色谱中，再与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。5.3.6照薄层色谱操作规程（JS-TJ-005）试验。5.3.6.1取大蜜丸9g,剪碎，加硅藻土5g,研匀，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水5ml使溶解，用脱脂棉滤过，滤液通过D101型打孔吸附树脂柱（1660目，内就能够为1.5cm，柱高为15cm）,流速为每分钟1.01.5cm，一次以水，30%乙醇各50ml洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用50%乙醇5ml溶解，通过聚酰胺柱（100200目，1g，内径为1cm，湿法装柱），用50%乙醇10ml洗脱，收集流出液及洗脱液，备用；继用乙醇10ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。5.3.6.2另取黄芩对照药材，0.1g,加甲醇5ml，超声处理10分钟，摇匀，静置，取上清液作为对照药材溶液。5.3.6.3照薄层色谱法（附录VI B）试验，吸取上述三种溶液各4l ，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液。5.3.6.4供试品色谱中，在于对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。5.3.7照薄层色谱操作规程（JS-TJ-005）试验。5.3.7.1取5.3.6.1项下的备用溶液，水浴蒸去乙醇，加水至约5ml，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次5ml，水溶液备用；合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。5.3.7.2另取陈皮对照药材0.1g，加甲醇5ml，超声处理10分钟，静置，取上清液作为对照药材溶液。5.3.7.3照薄层色谱法（附录VI B）试验，吸取上述三种溶液各2l ，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（28：10：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，再105加热约5分钟，置紫外光灯（365nm）下检视。5.3.7.4供试品色谱中，在于对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。5.3.8照薄层色谱操作规程（JS-TJ-005）试验。5.3.8.1取5.3.7.1项下的备用水溶液，用水饱和的正丁醇真要提取2次，每次8ml，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣用甲醇5ml分次溶解，加在中性氧化铝柱（100200目，2g，内径为1cm，）上，用80%甲醇20ml洗脱，收集流出液及洗脱液，蒸太原大宁堂药业有限公司 JS-CJ-013 共6页第5页干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。5.3.8.2另取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液 ，作为对照品溶液。5.3.8.3照薄层色谱法（附录VI B）试验，吸取上述三种溶液各2l ，分别点于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（15：40：18：10）10以下放置分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%香草醛硫酸溶液，在105加热至斑点显色清晰。5.3.8.4供试品色谱中，在对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。5.4检查：5.4.1重量差异：见重量、装量差异检查操作规程（JS-TJ-037）。5.4.2水分：见水分测定操作规程（JS-TJ-025）第2法。5.4.3微生物限度检查：5.4.3.1细菌、霉菌检查：见细菌、霉菌（酵母菌）计数检查操作规程（JS-TJ-041）。5.4.3.2大肠埃希菌检查：见大肠埃希菌检查操作规程（JS-TJ-043）。5.4.3.3大肠菌群检查：见大肠菌群检查操作规程（JS-TJ-053）。5.4.3.3活螨检查：见活螨检查操作规程（JS-TJ-046）。5.5含量测定：照高效液相色谱法操作规程（JS-TJ-008）测定。5.5.1色谱条件与系统适应性试验 以十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-0.1%磷酸溶液（12：13：75）为流动相（必要时，每次进样测定后增加乙腈的比例，尽快冲出杂质成分）；检测波长为284nm。理论板数按橙皮苷峰计算应不低于7000。5.5.2对照品溶液的制备 取橙皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含30l 的溶液，即得。5.5.3供试品溶液的制备 取重量差异项下的大蜜丸，剪碎，混匀，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇补足检视的重量，称定重量，超声处理（功率400W，频率40kHz）15分钟使溶散，加