抗肿瘤药长春新碱pegpe聚合物胶束的课件

北京师范大学资源学院,抗肿瘤药长春新碱PEG-PE聚合物胶束的 制备和理化性质及体外细胞毒性的研究,PREPARATION, PHYSICOCHEMICAL CHARACTERISTICS AND IN VITRO CYTOTOXICITY OF VINCRISTINE ENCAPSULATED IN PEG-PE MICELLES,主要内容,一、研究背景、目的和意义 二、研究内容 三、总结 四、讨论,1. 癌症正在严重地威胁着人类的生命与健康 2. 抗肿瘤药存在的问题 （1）缺乏选择性 （2）毒副作用大 （3）存在耐药性等 3. 聚合物胶束的特点 （1）相对粒径较小（100nm） （2）长循环作用 （3）在肿瘤、梗塞、炎症部位易蓄积等,一、研究背景、目的和意义,研究背景,一、研究背景、目的和意义,研究背景,4. 聚乙二醇衍生化磷脂酰乙醇胺（PEG-PE） （1）与PEG修饰的脂质体相比，PEG-PE胶束能更有效 地使药物在截留尺寸小的肿瘤部位释放。 （2）能装载多种水溶性差的抗肿瘤药物，粒径为560 nm，显示了较高的肿瘤组织分布率和良好的抗肿 瘤效果。 5. 模型药长春新碱（Vincristine，VCR） （1）临床上常用的抗肿瘤药物（急性淋巴细胞白血病、 何杰金及非何杰金淋巴瘤 ） （2）较大的神经系统毒性和局部组织刺激性,本课题首次用PEG-PE包载水溶性较强的抗肿瘤药VCR，制备包载VCR 的PEG-PE胶束（VCR/PEG-PE胶束），以期提高VCR的抗肿瘤活性，降低其毒副作用。,一、研究背景、目的和意义,研究目的和意义,VCR/PEG-PE 胶束的制备,VCR/PEG-PE胶束 体外细胞毒性研究,VCR/PEG-PE胶束 理化性质的研究,二、研究内容,研究内容,含量测定分析方法研究 评价指标建立(包封率） 处方工艺筛选(药/脂）,外观形态 粒径与粒度分布 耐稀释性 稳定性 体外释放,人乳腺癌细胞MCF-7 （以游离VCR 作对比）,2.1 VCR/PEG-PE胶束的制备,VCR溶液配制 （无水乙醇/三乙胺） 10mgmL-1,PEG-PE溶液 配制（三氯甲烷） 20mgmL-1,旋转蒸干 形成一层薄膜,减压真空 干燥过夜,HBS水化，滤过(0.2m),+,图1 VCR/PEG-PE胶束制备工艺流程图,5mmol L-1 HEPES 0.9%NaCl, pH 7.0,遮光，4保存 VCR终浓度：2mgmL-1,VCR的含量测定方法学的研究,色谱柱：Discovery C18色谱柱（250mm4.6mm，5m） 流动相：甲醇-0.01molL-1磷酸二氢钠水溶液（70:40，pH 7.0） 流速：1.0mLmin-1 进样量：20L 检测波长：298nm VCR保留时间 ：约13min,色谱条件,2.1 VCR/PEG-PE胶束的制备,A,图2 VCR对照品（A）和VCR/PEG-PE胶束样品（B）HPLC色谱图,B,VCR的含量测定方法学的研究,色谱图,图3 空白载体HPLC色谱图,VCR的含量测定方法学的研究,方法专属性试验,Y=390587X + 1451.5 r=0.9997,图4 VCR标准曲线,VCR的含量测定方法学的研究,线性关系考察,包封率的测定,VCR的总量（F总） 游离VCR的量（F游离） 取样量：200L 离心过滤管：MWCO 30K Da 离心滤过：10,000 r.min-1，15min 包封率计算公式,2.1 VCR/PEG-PE胶束的制备,载体用量的考察,表1 不同载体用量对包封率的影响,2.1 VCR/PEG-PE胶束的制备,VCR/PEG-PE胶束的含量测定,表2 三批样品含量测定结果,2.1 VCR/PEG-PE胶束的制备,2.2 VCR/PEG-PE胶束的理化性质的研究,外观形态,图5 VCR/PEG-PE胶束的透射电镜照片,粒径和粒度分布,图6 VCR/PEG-PE胶束的粒度分布图 （平均粒径：11.1nm ）,2.2 VCR/PEG-PE胶束的理化性质的研究,耐稀释实验,表3 VCR/PEG-PE胶束耐稀释实验结果,2.2 VCR/PEG-PE胶束的理化性质的研究,稳定性考察,表4 稳定性试验结果,2.2 VCR/PEG-PE胶束的理化性质的研究,体外释药实验,样品：VCR 1mgmL-1 HBS溶液 含50%胎牛血清（FBS）的HBS溶液 透析袋： MWCO 1200014000Da 转速：50rmin-1,体外释放方法,2.2 VCR/PEG-PE胶束的理化性质的研究,释放介质：150mL HBS 取样时间：0.5、1、2、4、6、12、24h 检测方法：HPLC法 计算公式：,体外释药实验,体外释放方法,2.2 VCR/PEG-PE胶束的理化性质的研究,VCR/PEG-PE胶束在HBS和含50%FBS的HBS （pH 7.0）中的释放结果,体外释药实验,结果,体外释药实验,释放模型拟合,表5 释放模型方程,表6 VCR/PEG-PE胶束在HBS（pH 7.0）中的体外释放拟合结果,体外释药实验,释放模型拟合结果,表7 VCR/PEG-PE胶束在50%FBS的HBS中的体外释放拟合结果,体外释药实验,释放模型拟合结果,2.3 VCR/PEG-PE胶束的体外细胞毒性研究,细胞： MCF-7细胞 接种细胞数 3103/孔，96孔培养板，培养24h 药物处理 浓度：0.1、 0.4、1.6、3.2、6.4、12.8nmolL-1 100L/孔，培养72 h,四唑盐比色法（MTT法）,VCR和VCR/PEG-PE胶束对MCF-7细胞的存活率的影响,MTT法,测定结果,三、总 结,本课题首次用PEG-PE 聚合物制备了包载水溶性较 强的VCR胶束，并对其制备工艺、理化性质和体外 细胞毒性进行了研究。 VCR/PEG-PE胶束为透明的乳浊状悬液，粒度分布 窄而均一，平均粒径为11.1nm；包封率为94.67%。 VCR/PEG-PE胶束具有较强的耐稀释性，稀释1000 倍，于37孵育6h，仍有70%以上的药物以胶束的 形式存在。,VCR/PEG-PE胶束遮光，于4保存，考察30天，外 观性状、药物含量和包封率都很稳定。 VCR/PEG-PE胶束在HBS和含50%FBS的HBS（pH 7.0）中释药缓慢，且无突释现象，并均符合一级动力 学释药模型。 VCR/PEG-PE胶束可提高VCR的细胞毒性，其IC50值 为2.160.25nmolL-1，比游离VCR的IC50值（2.730.44nmolL-1） 低。,三、总 结,一般都认为PEG-PE适合用于包载难溶于水的药物， 不适合于包载水溶性药物。本实验中，以不同摩尔 比制得的VCR/PEG-PE胶束均具有较高的包封率 （94% 以上），表明PEG-PE胶束可以较好地包载水 溶性较强的VCR，结合其它的实验结果，提示PEG- PE胶束在包载水溶性药物方面具有较好的应用前景。,四、讨 论,VCR从PEG-PE胶束中释放缓慢、稳定，经PEG-PE 包载后能提高体外细胞毒性，提示该载药系统在肿 瘤治疗中具有很大的潜力，因此，对VCR/PEG-PE 胶束的体内抗肿瘤活性值得进一步研究。,四、讨 论,衷心感谢我的导师王永炎教授和吴建梅副教授这三年来对我学业和科研等多方面的精心指导和鼓励！ 衷心感谢资源药物与中药资源研究所的张文生副教