CEA作业指导书作业指导书2.0.doc

癌胚抗原癌胚抗原检测作业指导书检测作业指导书 1.检验目的：检验目的： CEA属癌胚胎性抗原，只在胚胎期产生，主要来源于胎儿的胃、肠道和血液。 在正常成人的肠道、胰腺和肝组织中也有少量存在。出生后，CEA的形成被抑 制，因此，在正常成人的血液中CEA很难测出。 患有结肠腺癌的病人，CEA含量通常很高。而在2050%的良性消化系统及肺部 疾患中，CEA含量通常不超过10ng/ml。吸烟者也常见CEA升高。 CEA测定主要用于指导结肠癌治疗及随访。 CEA测定不适用于普通人群的癌症筛查。因为CEA正常不能排除恶性疾病的存在。 2.检验原理检验原理: 采用双抗体夹心法原理，整个过程18分钟完成。 第1步：30l标本、生物素化抗CEA单克隆抗体和钌（Ru）标记的抗CEA单克 隆抗体和钌（Ru）标记的抗CEA单克隆抗体混匀，形成夹心复合物。 第2步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链 霉亲和素间的反应结合到微粒上。 第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的 物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。 检测结果由机器自动从标准曲线上查出。此曲线由仪器通过2点定标校正， 由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。 3.性能参数：性能参数： 3.1 线性范围：线性检测结果见 CEA 方法学验证记录。 3.2 精密度:批内 n=20,批间 n=20。 批 内 批 间 均值 ng/ml SDng/mlCV% 均值 ng/ml SD ng/mlCV% 0.62310.02173.485.1670.1673.23 3.3 准确度: 检测结果见临检中心/江苏省室间质评结果回报记录。 3.4 可报告范围: 0.20050000ng/ml，最大稀释倍数为 50 倍。 3.5 测量区间：血清/血浆: 0.2001000ng/ml。 高于检测范围的标本可用通用稀释液稀释。稀释后的标本CEA含量必须高于 20ng/ml。如用手工稀释，结果应乘上稀释倍数。如果是机器自动稀释，机器会自动 计算结果。 3.6 灵敏度：0.200ng/ml 3.7 特异性：无 4. 样本要求样本要求 4.1血清：按标准常规方法采集。 4.2血浆：肝素、EDTA-K3、枸橼酸钠或氟化钠/草酸钾抗凝均可。 4.3标本在28 度可稳定2天，-20 度可稳定6个月。只能冻融一次。 4.4含沉淀的标本使用前需离心。 4.5标本和质控品禁用叠氮钠防腐。 5.试剂和设备：试剂和设备： 5.1 设备设备：COBAS6000 组合模块 E601 （1）检查供水系统是否正常。 （2）检查试剂盖是否松开。 （3）接通仪器左侧上方电源按钮,仪器自检。 （4）登录：输入用户名及密码，仪器初始化，进行自动维护，然后进入 Stand by 状态。 5.2 试剂厂商试剂厂商：罗氏诊断产品公司 5.3试剂及使用前准备试剂及使用前准备 （1）试剂成分： M：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，6.5ml。粒子浓度0.72mg/ml， 生物素结合能力： 470ng生物素/mg粒子。含防腐剂。 R1：生物素化的抗CEA单克隆抗体（灰盖），1瓶，8ml。浓度7.5mg/l，磷 酸缓冲液0.1mol/l，pH6.0。含防腐剂。 R2：Ru(bpy)3 2+标记的抗CEA单克隆抗体（黑盖），1瓶，8ml。浓度4.0mg/l， 磷酸缓冲液 0.1mol/l，pH6.5。含防腐剂。 （2）试剂准备： 检查各种试剂所需使用的试剂量 （3）试剂贮藏要求： 存放在28 度，切莫倒置。 未开封，可稳定至标明的保质期。 开封后，28 度 12周； 放在COBAS6000上，8周； 注意：仅供体外诊断使用；避免皮肤直接接触液体试剂；废弃物按生物危害垃圾处 理。 6.6.校准程序：校准程序： 6.1 校准品：罗氏 COBAS6000 原装校准品。要求在有效期内使用，过期的校准液应 停止使用，保存于 2-8可稳定到有效期。 复溶：用复溶专用加样枪准确吸取 1mL 去离子水于瓶中，溶解静置 1 小时，混匀并 用有盖小子弹头分装 200L/个，标明配制日期，校准品批号，配制人以及有效日期， 于20冻存备用。 复溶后校准品成分的稳定性：2-8C 储存。稳定性：未打开，2-8C有效期内均可 打开后，2-8C 下： 12 周 上机，20-25C： 只可使用一次（不可反复冻融） 。 6.2 当下列任何一种情况出现时，请重新校准： 试剂批号改变 根据质控需要进行校准 6.3 校准步骤： 631 校准品的准备：从-20冰箱中取出一个分装的校准品，室温放置使其完全 溶解，并颠倒混匀备用。 632 起始定标：进入 Calibration，点击 Status，选择该项目的定标方式 （FULL） ，点击 Save，按在 Calibration 画面下的 Installation 界面设置好的标准 物放置位置装载好相应的定标液，再点 Start 按键，仪器开始定标； 6. 3. 3 重复定标：进入 Calibration，点击 Status，选择该项目的定标方式（FULL） ， 点击 Save，按在 Calibration 画面下的 Installation 界面设置好的标准物放置位置 装载好相应的定标液，再点 Start 按键，仪器开始定标； 6. 3. 4看定标结果：进入 Calibration，点击 Status，点击相应的项目，点 Calibration result，查看反应曲线。 6. 3. 5 校准原始结果的记录：每天校准过的项目原始光子数的值保存在中。 6. 3. 6 每次做校准后，测定罗氏正常值或病理值质控，如质控在控则校准通过，可 开始临床样品检测，如果质控失控，则参照室内质量控制管理程序处理。 7.7.操作步骤：操作步骤： 7.1 输入样本，进入 Workplace，点 Test Selection 7.1.1 输入常规样本，选 Routine，选择样本类型、输入序列号或样本号，可选择稀 释倍数，选择项目，只编辑一个样本则点击 Save 键即可；如批量输入做相同项目的 样本，则点 Repeat，输入需要检测的样本总数，点 Save，在 Start 的当前界面 （start samper no.）输入该批样本起始号，回车，再点 Start； 7.1.2 输入急诊样本，选 Stat，输入急诊样本架、样本编号，选择项目，Save，将标 本放入急诊进样位（急诊架条形码面朝向外侧） ，点 Start；如果仪器此时在 Operation 状态则不需要执行 Start 操作。 7.2 结果查询及传输： 7.2.1 结果查询：进入 Workplace，点 Data Review，选择要看的样本号，可看到该 样本所做的项目和结果，点 Reaction Monitor 可看到相应项目的反应曲线。 7.2.2 结果传输：进入 Workplace，点 Data Review，选择要传输的实验号，按 Sent to host,再按 sent,结果即可传输。 7.3 结果打印：进入 Workplace，点 Data Review，选择要打印的实验号，按 Print,再 选择要打印的数据类型,再按 Print,结果即可打印。打印结果作为原始记录保留，并 且操作者要签上名字及操作日期。 74 分析参数： 吸液参数 Diluent(罗氏通用稀释液) 样本量 30l 方法 电化学发光法 反应时间 18 分钟 反应温度 常温 8.质量控制质量控制： 8. 1 Precicontrol Tumor Marker1 罗氏正常值质控 Precicontrol Tumor Marker2 罗氏病理值质控，按说明书要求保存于冰箱中。 复溶: 用移液管准确吸取 3ml 去离子水于瓶中，静置，然后倒置小瓶，放置 1 小时 后按要量(约 400ul)分装作好标识保存于-20,在复溶后稳定期内使用。 82 将质控品从冰箱取出放置室温平衡 15 分钟,摇匀后按未知血清标本进行测定， 在做临床标本 3-5 个以后检测，每个工作日测定一次，若当日无此检测项目则不需 要做质控。测定后将结果录入室内质控软件中。 83 质控规则：13s，22s。 （参照室内质量控制程序 ） 。当质控失控时，应按照 室内质量控制程序处理。 9.干扰和交叉反应：干扰和交叉反应： 该方法不受黄疸（胆红素5mg/天）治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8小 时后才能采血。 不受类风湿因子干扰（1500U/ml）。 26种常用药物经试验对本测定无干扰。 CEA浓度高达200000ng/ml也不出现钩状效应。 接受过小鼠单抗治疗或体内诊断的病人会出现假阳性反应。 ElecsysCEA测定结果应结合病人病史、临床其他检查结果综合起来进行诊断。 10.计算：计算：对每一个标本，仪器会自动计算CEA含量，单位是ng/ml。 1ng/mlCEA相当于16.9mIU/ml。 11.11.生物参考区间：生物参考区间： 0.0-3.40 ng/ml 12.警告警告/危机值：危机值：无 13. 结果解释结果解释： 12.1 确认患有癌症的患者，通常具有与健康个体相同范围值的预处理 CEA 水平。对 吸烟者所进行的循环 CEA 水平炮评估可能与患有非恶性疾病的患者的相同。由于这 些原因，血清或血浆中的 CEA 水平不具有任何价值，不能作为有无恶性疾病的绝对 证据。CEA 水平必须与从临床评估和其他诊断程序中得出的信息联用。AxSYM CEA 检验不能用作癌症筛查检测。 12.2 已经接受了小鼠单克隆抗体制剂用于诊断或治疗的患者，其样本中可能含有人 抗鼠抗体（HAMA） 。由于一些试剂盒采用小鼠单克隆抗体，用这些试剂盒检测上述 样本时，就会得到错误的升高或降低的值。这些样本不应该使用 AxSYMCEA 检验 进行检测。 14.生物安全防护：生物安全防护： 操作时必须穿戴手套和工作服；工作后的台面应消毒擦洗；用过的加样枪头等 耗材应作为医用垃圾处理；为了避免形成气溶胶，所有样品尽可能不要在空