巴比妥及苯并二氮杂卓类镇静催眠药物的分析

,1,第十章 巴比妥及苯并二氮杂卓类镇静催眠药物的分析,2,主要内容：,药物结构、理化性质 鉴别试验 杂质检查 含量测定 体内药物分析,3,一、巴比妥类药物的结构分析,基本结构：,1.环状丙二酰脲类 2. R1=R2=H时， 为巴比妥酸。 3.多为巴比妥酸的 5,5-二取代物， 少数为1,5,5- 三取代物或C2为 硫取代。,第一节 巴比妥类药物的分析,4,代表药物：,5,5-二取代,R1 R2,巴比妥,苯巴比妥,戊巴比妥,异戊巴比妥,司可巴比妥 (速可眠),5,1,5,5-三取代,甲苯巴比妥,6,己琐巴比妥,1,5,5-三取代,7,硫喷妥钠,C2上S取代,8,二、理化性质,9,（一）弱酸性,10,二级电离：,#19. （五）紫外吸收光谱,11,（二）水解反应,红色石蕊试纸变蓝,应用：鉴别巴比妥类药物 JP（15）采用此反应鉴别异戊巴比妥和巴比妥,1、巴比妥类药物,2、巴比妥类药物钠盐,12,（三）与重金属离子的反应,1.与银盐的反应,白色沉淀,应用：鉴别、含量测定（Ch.P）,巴比妥及苯并二氮杂卓类镇静催眠药物的分析.ppt#23. 幻灯片 23,13,2.与铜盐的反应(Zwikker试验),14,注意：,a.巴比妥类药物呈紫堇色或生成紫色沉淀 鉴别试验（Ch.P）,b. 含S巴比妥类药物显绿色 硫喷妥特征反应,d. 吡啶作用： 1) 吸收H+使巴比妥类易解离 2) 孤对电子生成配位体,c.可区别巴比妥类与硫代巴比妥类药物； 5，5-二取代基不同的巴比妥类药物生成 的化合物在氯仿中的溶解度不同，可用 于本类药物的鉴别。,15,3.与钴盐反应(Parri试验),紫堇色,应用：鉴别、含量测定,16,注意：,反应在无水条件下； 溶剂：无水乙(甲)醇,b. 钴盐：醋酸钴、硝酸钴或氧化钴,c.碱：以有机碱为好异丙胺,17,4.与汞盐反应,18,（四）与香草醛反应,丙二酰脲基团中的H,19,（五）紫外吸收光谱,#10. 幻灯片 10,20,21,（六）色谱行为,1.TLC 2.HPLC,（七）显微结晶,生物样品中微量巴比妥类药物的检验,巴比妥：长方形 苯巴比妥：球形 花瓣状 巴比妥铜吡啶：十字形紫色 苯巴比妥铜吡啶：浅紫色细小不规则或类菱形,22,三、鉴别试验,母核的反应本类药物共有的反应,取代基的反应类内区别,23,（一）丙二酰脲类鉴别反应母核反应（ChP）,1.银盐反应,取供试品约0.1g，加碳酸钠试液1ml与水10ml， 振摇2min，滤过，滤液中逐滴加入硝酸银试液， 即生成白色沉淀，振摇，沉淀即溶解；继续滴加 过量的硝酸银试液，沉淀不再溶解。,取供试品约50mg，加吡啶溶液（1 10）5ml，溶解后加铜吡啶试液1ml，即显紫色或生成紫色沉淀。,2.铜盐反应,巴比妥及苯并二氮杂卓类镇静催眠药物的分析.ppt#12. 幻灯片 12,24,（二）特殊取代基或元素的鉴别反应,1.芳环反应苯巴比妥及钠盐,（1）硝化反应,黄色,（2）硫酸亚硝酸钠反应（苯巴比妥及钠盐Ch.P）,苯巴比妥H2SO4-NaNO2 橙黄色 橙红色,25,（3）与甲醛硫酸反应（苯巴比妥及钠盐ChP）,2.不饱和取代基的鉴别反应司可巴比妥钠,加成,加成,氧化,26,3.硫元素的反应硫喷妥钠（Ch.P）,应用：区别硫代巴比妥与巴比妥类,（四）IR,巴比妥及苯并二氮杂卓类镇静催眠药物的分析.ppt#43. 幻灯片 43,（三）测定熔点,27,四、特殊杂质检查,（一）苯巴比妥的特殊杂质检查 1.酸度副产物苯基丙二酰脲 2.溶液澄清度乙醇不溶性杂质 3.中性或碱性物质副产物、分解产物 4.有关物质-HPLC 主成分自身对照 （二）司可巴比妥钠的特殊杂质检查 1.溶液澄清度水不溶性杂质 2.中性或碱性物质副产物、分解产物,28,五、含量测定,（一）银量法,1.原理,白色,29,2.测定方法 取供试品用甲醇溶解，加入碳酸钠，照 电位法，用硝酸银滴定液滴定。,3.终点指示,稍过量的Ag+与巴比妥类药物生成白色浑浊 银玻璃电极电位法,30,4.举例 异戊巴比妥的测定方法（ChP） 取本品约0.2g，精密称定，加甲醇40ml 使溶解，再加新鲜配制的3%无水碳酸钠溶液 15ml，照电位滴定法，用硝酸银滴定液 （0.1mol/L）滴定，即得。每1ml硝酸银滴定液 （0.1mol/L）相当于22.63mg的C11H18N2O3。,31,5.讨论,（1）化学计量关系：1:1,（2）优点: 操作简便、专属性强,（4） Na2CO3的作用,32,(二)溴量法,1.原理, Br2 (定量过量),1C12H17N2NaO31Br2,33,司可巴比妥钠（ChP） 取本品约0.1g，精密称定，置250ml碘瓶中，加水l0ml，振摇使溶解，精密加溴滴定液(0.05mol/L)25m1，再加盐酸5m1，立即密塞并振摇1min，在暗处静置15min后，注意微开瓶塞，加碘化钾试液l0ml，立即密塞，摇匀后用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正。每lml溴滴定液(0.05mol/L)相当于13.01mg的C12H17N2NaO3。,2.测定方法,34,3.讨论,（1）化学计量关系：1:1 （2）密塞目的 （3）为何在近终点时加指示剂 （4）空白试验校正,35,（三）酸碱滴定法,1.原理,2.测定方法,（1）水乙醇混合溶剂,滴定剂：氢氧化钠,指示剂：麝香草酚酞,终点颜色：淡蓝色,电位法指示终点,36,（2）胶束水溶液 表面活性剂使巴比妥类药物的酸性增强,滴定剂：氢氧化钠,溶剂：有机表面活性剂：溴化十六烷基三甲基苄铵,指示剂：麝香草酚酞,电位法指示终点,（3）非水溶液 巴比妥类药物的酸性增强,有机溶剂：二甲基甲酰铵、甲醇、丙酮等,滴定剂：甲醇钾（钠）、氢氧化四丁基铵,指示剂：麝香草酚蓝,电位法指示终点,37,（四）紫外分光光度法,1.原理,巴比妥类药物在碱性介质中电离为具有紫外吸收的结构,2. 特点,（1）专属性强，灵敏度高 （2）用于巴比妥类药物原料及制剂的含量测定 （3）体内药物的检测,38,3.测定方法,（1）直接紫外分光光度法,a.根据样品溶液的pH值，选用对应的max b.采用对照品法，计算药物含量,39,取装量差异项下的内容物，混合均匀，精密称取 适量（约相当于硫喷妥钠0.25g），置500ml量瓶 中，加水稀释至刻度，摇匀，量取此溶液用0.4%氢 氧化钠溶液定量稀释制成每1ml中约含5g的溶液； 另取硫喷妥对照品，加0.4%氢氧化钠溶液溶解并定 量稀释制成每1ml中约含5g的溶液。照分光光度法， 在304nm波长处测定吸收度，根据每支的平均装量 计算。每1mg硫喷妥相当于1.091mg的 C11H17N2NaS。,c.举例：,40,(2)提取分离后紫外分光光度法 苯巴比妥钠【USP(24)】,可消除干扰物质对测定的影响,41,（五）HPLC,RP-HPLC HPLC测定苯巴比妥片的含量（ChP）,42,六、体内药物分析,RP-HPLC同时测定血清中巴比妥类的浓度 GC-MS同时测定人体液中巴比妥药物 HPCE法测定体内尿液中巴比妥和苯巴比妥两种药物 LC-MS联用技术监测巴比妥类药物,43,巴比妥及苯并二氮杂卓类镇静催眠药物的分析.ppt#26. 幻灯片 26,苯巴比妥,44,第二节 苯并二氮卓类药物的分析 一、基本结构与主要化学性质 1.结构与典型药物： 苯并二氮杂卓类药物为含氮杂原子、六元和七元环双并合而成的有机化合物。 其中1,4-苯并二氮杂卓类药物是目前临床应用最广泛的镇静剂。,45,地西泮（1959年合成） 氯氮卓（1955年合成）,46,奥沙西泮,47,2.主要化学性质 （1）二氮杂卓环为七元环，环上氮原子具有碱性，苯基的取代使碱性降低，可进行非水滴定法测定； （2）环一般比较稳定，可在强酸性下水解，形成相应的二苯甲酮衍生物，可用于鉴别和比色测定。（地西泮水解生成芳仲胺基和甘氨酸） （3）UV吸收，用于含量测定； （4）本品多为游离碱，不溶于水，而溶于甲醇、乙醇和氯仿中。,48,二、鉴别试验 （一）化学鉴别 1.沉淀反应生物碱性质 a.氯氮卓和阿普唑仑的盐酸液 (91000)，遇碘化铋钾试液，生成橙红色沉淀。 b.盐酸氟西泮的水溶液和氯硝西泮的稀盐酸溶液遇碘化铋钾试液，也生成橙红色沉淀。 c.阿普唑仑的盐酸溶液(91000)，遇硅钨酸试液，生成白色沉淀。,49,2.硫酸荧光反应 苯并二氯杂卓类药物溶于硫酸后，在紫外光(365nm)下，呈现不同颜色的荧光。,地西泮 黄绿色 黄色 氯氮卓 黄色 紫色 艾司唑仑 + H2SO4 亮绿色 + 稀硫酸 天蓝色 硝西泮 淡蓝色 蓝绿色 奥沙西泮 淡黄绿色,50,3.水解后呈芳伯胺反应 氯氮卓、艾司唑仑和奥沙西泮的盐酸溶液(12)，缓缓加热煮沸，放冷，加亚硝酸钠和碱性-萘酚试液，生成橙红色沉淀，而后者放置色渐变暗。,51,4.分解产物的反应 有机氯化合物，用氧瓶燃烧法破坏，生成氯化氢，以5氢氧化钠溶液吸收，加硝酸酸化，显氯化物反应。 5.氯化铜焰色反应 含氯的药物，在铜网上燃烧发出氯化铜的绿色火焰。此反应药典未用于本类药物鉴别。,52,（二）紫外特征吸收和红外吸收光谱,53,（三）色谱法 TLC HPLC,54,三、特殊杂质的检查 （一）有关物质检查 1.氯氮卓中有关物质的检查 USP(24):薄层色谱法（杂质对照品法） BP（2003）:薄层色谱法（高低浓度对比法、杂质对照品法） ChP：HPLC法（杂质对照品法、主成分自身对照法） 溶液的澄清度控制中间体等水不溶性杂质 2.三唑仑中有关物质的GC法（USP）,55,（一）非水溶液滴定法 是国内外药典采用较多的含量测定方法。 对于： a.在水溶液中不能滴定的化合物，一些很弱的酸、碱以及某些盐类，在水溶液中进行滴定时，没有明显的滴定突跃，终点难于掌握； b.在水溶液中不溶的化合物，有些有机化合物在水中溶解度很小，以水作为滴定介质受到一定的限制。,四、含量测定,56,1.定义 非水滴定：在水以外的溶剂中进行的酸碱滴 定分析方法。,（1）酸性溶剂：有机弱碱在酸性溶剂中可显著地增强相对碱度。 （2）碱性溶剂：有机弱酸在碱性溶剂中可显著地增强相对酸度。 （3）两性溶剂：具有酸、碱性能，如methanol。 （4）惰性溶剂：没有酸、碱性的溶剂，丙酮、氯仿。,57,2.应用讨论 （1）适用范围 pKb为813的弱碱性药物可用本法滴定。 一般来说， 当Kb为1081010时，宜选冰醋酸作溶剂； Kb为10101012时，宜选用冰醋酸与醋酐的混合溶剂作溶剂； Kb1012时，应用醋酐作溶剂。 另外，在冰醋酸中加入不同量的甲酸，也能使滴定突跃显著增大，使一些碱性极弱的杂环类药物获得满意测定结果。,58,（2）终点指示方法 常用电位法和指示剂法。 指示剂：橙黄、萘酚苯甲醇、喹哪啶红、孔雀绿 电位法：玻璃电极-饱和甘汞电极 常用指示剂为结晶紫 结晶紫酸式色为黄色，碱式色为紫色。 由碱区到酸区的颜色变化为： 紫、蓝、蓝绿、绿、黄绿、黄。 指示剂的终点颜色变化，需要电位法来确定。,59,3.应用实例 尼可刹米、地西泮及氯氮卓 药物的碱性强弱不同，测定时所采用溶剂、指示剂及其指示终点的方法也不尽相同。 药物名称 取样量(g) 溶 剂 指示剂 终点颜色 尼可刹米 0.15 冰醋酸10ml 结晶紫 蓝绿色 地西泮 0.2 冰醋酸、酸酐10ml 结晶紫 绿色 氯氮卓 0.3 冰醋酸10ml 结晶紫