《放免wang》PPT课件.ppt

第六章 放射免疫分析和其他免疫分析,竞争放射分析,概述,竞争放射分析,竞争放射分析,放射免疫分析,Ag* Ab,(定量),（限量）,基本原理,放射免疫分析,基本假设,放射免疫分析,根据质量作用定理得到平衡结合常数,P ,12,PQP,PPqP,放射免疫分析,因此,放射免疫分析,放射免疫分析,F与p的函数关系,放射免疫分析,R与p的函数关系,R2 + R(1+KAp - KAq) - KAq = 0,放射免疫分析,放免的基本试剂,标准品,特异抗体,标记物,放射免疫分析,标准品,一级标准品 二级标准品,定量依据,按每次用量分装保存,放射免疫分析,标记抗原,0.1 Ci/mg ( 3.7 GBq/mg ),95%,标记物鉴定方法,放射免疫分析,放射免疫分析,放射免疫分析,抗原,半抗原,(Hapten),人工抗原,抗血清,放射免疫分析,2制备,（HSA、BSA、牛甲状腺球蛋白、卵清蛋白等）,放射免疫分析,表示血清中Ab的浓度或含量,KA,交叉反应%,滴度,放射免疫分析,50%,抗血清B,抗血清A,放射免疫分析,亲和力, 108 L/mol,放射免疫分析,放射免疫分析,特异性,单克隆抗体： 特异性,多克隆抗体：,放射免疫分析,来自杂交瘤细胞的无性繁殖,免疫动物法,放射免疫分析,对分离方法的要求：,放射免疫分析,分离技术,5. 非特异性沉淀法,Ag-Ab + 盐类、有机溶剂,共沉淀分离,常用: 聚乙二醇(PEG)、硫酸铵,放射免疫分析,放射免疫分析,6. 双抗体沉淀法,第一,第二,放射免疫分析,7. 双抗体-PEG法 PR试剂法,8. 可磁化分离法,磁化活性颗粒,磁化固相抗体分离法,引入磁化材料, 不用离心,活性炭+氧化铁磁化活性炭颗粒,抗体+固相材料+氧化铁磁化固相-抗体,放射免疫分析,RIA 的建立及有关问题,（一）三个基本试剂的用量,（二）反应介质,缓冲液 pH=7.5 PB,（三）温育温度与时间,放射免疫分析,0.5%BSA,正常兔血清,放射免疫分析,（四）反应方式,1. 平衡法,Ag* + Ag + Ab,反应几率相同,2. 非平衡法,Ag + Ab,+ Ag*,Ag*反应几率 Ag,放射免疫分析,（五）标准曲线类型,放射免疫分析,Logit-Log模型,放射免疫分析,放射免疫分析,放射免疫分析,放射免疫分析,10,( P-P ),放射免疫分析,(1) 外加标准品的回收率,放射免疫分析,(2) 高含量样品, 用缓冲液等倍数稀释, 则测定值与样品量, 呈:,免疫放射分析(IRMA),过量*Ab+Ag，测定复合物放射性（多余Ab通过一定手段除去） ，其活度与待测Ag量呈正相关。,基本原理,免疫放射分析(IRMA),免疫放射分析(IRMA),IRMA分离游离Ab和复合物，采用单克隆Ab作分离剂,免疫放射分析(IRMA),分类,免疫放射分析(IRMA),免疫放射分析(IRMA),IRMA与RIA的区别,非放射标记免疫分析,非放射标记免疫分析,光谱法,酶,非放射标记免疫分析,非放射标记免疫分析,化学发光物质,直接化学发光物质标记法,吖啶酯