HSP27和HSP70mRNA在大肠癌中表达的临床意义.doc

HSP27和HSP70mRNA在大肠癌中表达的临床意义 作者：杨淼 张晓丽 薄爱华 马利红【摘要】 目的：探讨HSP27和HSP70mRNA在大肠癌中表达的临床意义。方法：取大肠癌标本77例，采用免疫组织化学方法检测HSP27的表达状况，从中选取36例手术标本，采用核酸原位杂交技术（ISH）检测HSP70mRNA的表达。结果：HSP27和HSP70mRNA在大肠癌中的阳性率分别为40.3%和66.9%，HSP27和HSP70mRNA均与大肠癌的分化程度相关，与发生部位、浸润深度及淋巴结转移无明显相关性。结论：检测HSP27和HSP70mRNA可作为大肠癌患者预后的一个重要指标。 【关键词】 肠肿瘤 HSP70热休克蛋白质类 热休克蛋白质类 免疫组织化学 【ABSTRACT】 Objective: To investigate the clinical significance of HSP27 and HSP70mRNA expression in large intestine cancer. Methods: The expression of HSP27 was examined by immunochemistry in 77 cases with large intestine cancer. The expression of HSP70mRNA in 36 cases with large intestine cancer was examined by in situ hybridization. Results: The positive rates of HSP27, HSP70 mRNA in large intestine cancer were 40.3% and 66.7% respectively. They had relationship with tumor differentiation degree, but had nothing to do with the region ，invasion depth and lymph node metastasis. Conclusion: HSP27 and HSP70mRNA can serve as markers for prognosis judgment for large intestine cancer. 【KEY WORDS】 Intestinal Neoplasms,HSP70 HeatShock Proteins,HeatShock Proteins,Immunochemistry 热休克蛋白是细胞应激原特别是环境高温诱导下所生成的一组蛋白质，具有多种生物学功能，它与肿瘤的发生、发展及肿瘤耐药性的产生等都有密切关系13。我们采用免疫组织化学及核酸原位杂交两种技术方法，检测HSP27和HSP70mRNA在大肠癌中的表达，为大肠癌的发病机制提供分子生物学依据。 1 材料和方法 1.1 一般资料 收集河北北方学院附属第一医院20022004年肠癌标本77例，其中肠道内窥镜活检确诊肠癌标本18例；男性56例，女性21例；年龄分布3574岁，平均年龄58.12岁。从中选取手术标本36例，男性21例，女性15例;年龄分布3865岁，平均年龄57.51岁。标本均经10%福尔马林液固定，石蜡包埋，切片厚度7m，常规HE染色，另贴于表面涂有多聚赖氨酸的载玻片上，37温箱保存。 1.2 试剂 HSP27单克隆抗体及DNA显色剂购自北京中山生物公司，HSP70寡核苷酸探针对人的HSP70靶基因的mRNA序列为（1）5GCCGC AAGTT CGGCG ACCCG GTGGT GCAGT CGGAC3（2）5ACAGG CTGGT GAACC ACTTC GTGGA GGAGT TCAAG3，此探针及ISH试剂盒均购自武汉博士德生物工程公司。 1.3 方法 采用免疫组织化学SABC法，切片经常规脱蜡、水化后，用3%过氧化氢去除内源性酶，微波炉抗原修复，滴加第一抗体单克隆抗体HSP27，DAB显色苏木素复染，光镜观察。原位杂交操作程序严格按照试剂盒规定，其中消化时间为5min，38水浴，预杂交3h（38），杂交时间约16h（38），DAB显色。 1.4 统计学处理 采用2检验，P0.05为有显著性差异。 2 结果 HSP27和HSP70mRNA阳性物质位于细胞质内，呈棕黄色，核不着色。HSP27在大肠癌中的阳性率为40.3%，其在高分化腺癌和中低分化腺癌中阳性率分别为48.1%和21.7%，二者比较有显著性差异（P0.05)，但与浸润深度、发生部位及有无淋巴结转移无明显相关性（P0.05)，见表1。表1 HSP27在大肠癌中的表达情况注：与高分化腺癌组相比*P<0.05 2008年10月杨 淼等：HSP27和HSP70mRNA在大肠癌中表达的临床意义第5期2008年10月河北北方学院学报（医学版）第5期表2 HSP70mRNA在大肠癌中的表达情况 注：与高分化腺癌组相比*P<0.05 HSP70mRNA在大肠癌中的阳性率为66.9%，在高分化腺癌中为70.8%，在中低分化腺癌中为33.3%，二者比较有显著相关性（P0.05)，与浸润深度、发生部位及有无淋巴结转移无明显差异（P0.05)，见表2。 3 讨论 肿瘤的发生是一个多因素、多步骤的发展过程，涉及多种基因突变的积累，HSP作为“分子伴侣”在此过程中起调节和稳定的作用。肿瘤的形成与细胞的过度增殖和凋亡有密切相关，HSP通过调控细胞周期所必需的蛋白构象与细胞的增殖、死亡过程。以HSP为家族的基因家族，广泛分布在细胞的亚细胞结构中，可与突变型P53蛋白形成复合体，将突变型P53作为一种特异性抗原，提呈给宿主免疫系统，协助P53跨膜，延长其半衰期，提高P53的水平，从而增强P53抑制细胞凋亡的能力，促使肿瘤形成1。HSP70还可通过调节Cfos、Cmyc、Rb等抑癌基因、癌基因的产物相互作用，参与细胞的增殖调控，HSP27可以促进细胞生长、分化及定向转移，并与热耐受和多药耐药有关2。 近年来研究发现，HSP27在胃癌、食管癌、膀胱癌35等肿瘤中有较高表达，在本研究中HSP27在高分化腺癌中阳性率明显高于中低分化腺癌，说明HSP27与大肠癌的分化程度相关，可作为大肠癌患者预后的一个重要指标，本研究结果与蔡永清等6的一致。另外，HSP27在肿瘤耐药中具有一定作用，在对HSP27结构和功能的分子机制研究中发现HSP27可形成大量分子聚合体并具有抗凋亡活性，这可能是参与肿瘤细胞耐药的内在机制。 HSP70家族是细胞内含量最多的HSPs，它在多肽的折叠、解离、转运和在蛋白复合物的装配和分解过程中起着重要作用。近年来研究表明HSP70也参与了细胞凋亡的过程，它通过抑制细胞色素C的释放阻止一氧化氮诱导的巨噬细胞凋亡，也可通过增加多形核白细胞的氧化活性抑制细胞凋亡，因此HSP70作为一种重要的基因产物参与了恶性肿瘤细胞增殖的转录调控过程，在多种肿瘤中有异常表达79。本研究结果显示随肿瘤分化程度的降低HSP70mRNA的阳性表达率明显下降，说明HSP70mRNA与大肠癌的分化程度相关，与部位、侵犯深度及有无淋巴结转移无明显相关性。 综上所述，HSP27和HSP70mRNA与大肠癌的发生、发展密切相关，检测它们在大肠癌的表达有助于其恶性程度和预后的判定。【参考文献】 1 Chan Yc，Lin SY，Liu JK.Involuencut of heatshock protein 70 and P53 proteins in a attenuation of UVCinduced apoptosis by thermal stress in hepatocellular careinoma J. Photochem Photobiol,1999，70（1）：78862 罗亚莉，刘会珍，高云荷.热休克蛋白与宫颈癌J.医学综述，2002，8（3）：1361373 薄爱华，左东升，张晓丽,等.HSP27和Topo在胃癌中的表达J.癌症，2003，22（8）：8848854 薛军，支学军，张振忠,等. 胃癌、食管癌肿瘤耐药标志物Pgp、HSP表达的研究J.中国肿瘤临床与康复，2002，9（1）：42435 李向东，薄爱华，张晓丽,等. 膀胱移行细胞癌HSP27和ToPo表达的研究J.山东医药，2004，44（5）：17186 蔡永清，张跃伟，赵鲁笳,等.HSP在大肠癌及癌旁组织中的表达及其意义J.临床肿瘤学杂志，2004，9（5）：4864897 Elpek GO, Karaveli S, Simsek T, et al. Expression of heatshock proteins hsp27, hsp70 and hsp90 in malignant epithelial tumour of the ovariesJ.APMIS, 2003,111(4):5235308 Thanner F, Sutterlin