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文档简介
流式细胞术特点,在保持细胞及细胞器或微粒的结构及功能不被破坏的状态下，通过荧光探针的协助，从分子水平上获取多种信号对细胞进行定量分析或纯化分选,流式应用常见范围,细胞大小 颗粒度 细胞表面分子：CD 系列 细胞浆内分子：胞内细胞因子 细胞核内分子：P53 细胞功能检测：细胞周期、凋亡 细胞分选： CSC分选,周期检测,样品制备 细胞： 六孔板 八成满足够 组织： 胰酶消化 300目筛网 约1X106 PBS漂洗两次 70%酒精4固定过夜（次日上机检测） -20固定 一月内检测、样品多、 不能同时收集,PBS 漂洗两次,周期试剂盒-染色步骤,1000rpm 离心5 min,50L PI（0.1mg/ml）,0.5ml PBS 悬浮细胞,混匀，室温 静止5分钟,上机检测,2.5L RNase A( 10g/L),37消化1hr,凋亡检测,样品制备 细胞 六孔板 八成满足够 注意：培养液中的悬浮细胞一起收集 组织 胰酶消化+300目筛网,样品处理步骤,冰盒中 运送,Annexin V-FITC 5L混匀,Binding Buffer 500L 悬浮细胞,PBS洗两遍,培养液 悬浮细胞,Propidium Iodide 5L混匀,上机检测,避光反应 515min,对照组设置,实验分组 同型对照 免疫荧光标记中的阴性对照 未标记单抗 用来设定十字门的位置（R3区98%-99%）,未设置同型对照出现的问题,补偿不足导致 分群不佳,周期图分析,凋亡图分析,Annexin- PI双染法 Annexin 磷脂酰丝氨酸 PI DNA 左上为细胞碎片 右上为晚期凋亡细胞 左下为活细胞 右下为早期凋亡细胞,CD分子标记图,R1 CD24+/CD44- R2 CD24+/
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