血型血清学与分子生物学技术对新生儿溶血病的产前诊断价值.doc

血型血清学与分子生物学技术对新生儿溶血病的产前诊断价值【关键词】 新生儿溶血病 新生儿溶血病（heamolytic disease of the fetus and the newborn, HDN）是发生在胎儿和早期新生儿的一种自限性免疫溶血性疾病，该病由母婴血型不合引起，常导致胎儿早期流产或新生儿出现贫血、水肿、肝脾肿大甚至造成新生儿死亡等严重后果。由于我国RhD（-）人群仅占0.24%，大大低于白种人的15%，因而在我国Rh血型不合引起的HDN较ABO为少见，而Rh血型D抗原却又是引起中度和重度HDN的最常见原因1。目前，血型血清学与分子生物学技术是临床进行新生儿产前诊断最简便常见、实用有效的方法，正确运用血清学与分子生物学技术，可以为HDN预防及诊断提供有价值的依据，从而指导临床采取相应措施，防止HDN的发生。 1 血型血清学方法 为预防及避免HDN的发生，妊娠妇女除行常规的产前检查外，还应包括妊娠史、流产史、HDN史及夫妻双方的ABO和Rh血型的鉴定、不规则抗体筛选。如RhD为阴性时，应做弱D检测，以避免漏检。一般应在孕16周、28周、36周时各进行1次抗体筛选，当检测到有临床意义的同种抗体时，应测定IAT（indirect antibody test）滴度，以评估抗体水平并动态监控其变化。尽管有研究表明，HDN的发病率随母体内抗-A/B或抗-RhD水平的升高而递增，但仍有一些高抗体水平的个体并没有发生HDN而一些低抗体水平的个体发生了中至重度的HDN2，3。对那些有过流产史、HDN史的孕妇，应该密切注意其体内的血清抗体水平。 如免疫性ABO抗体效价64，且无流产史及HDN史时，可每4周检查一次抗体浓度；如ABO抗体效价256，为可疑HDN；ABO抗体效价512者，为高度可疑；如既往有HDN史且本次ABO抗体效价512时，建议换血治疗。 如Rh抗体效价8时，为可疑HDN，建议复查，16时可行羊膜穿刺术进一步检测其羊水胆红素含量，因为此时胎儿可能已经发生中度贫血4，5，必要时换血。 血清学方法可用于孕妇在怀孕早期的弱抗体检测，具有较好的灵敏度，但其局限性在于实验须在标准化条件下进行，且检测出来的抗体滴度与HDN疾病严重程度之间的相关关系仍然欠缺。 2 分子生物学方法 运用PCR-序列特异性引物（sequence specific primer,SSP）、PCR-限制片段长度多态性（restriction fragment length polymorphisms, RFLP）等分子生物学技术可从怀孕16周的孕妇羊水细胞中检测出胎儿的血型基因，此技术已常规运用于临床检测胎儿RhD、RhCE、KEL、Fy等基因6，7。对于有HDN史或流产史的妇女，且其丈夫基因为杂合型者，该技术可以更早、更准确地预测胎儿的血型基因型，可选择性地终止RhD阳性胎儿的妊娠，避免对RhD阴性胎儿的一些侵入性损害检查。在ABO溶血病的预测中，如母为O型，父为AO/BO型的夫妇，检测其胎儿ABO血型基因型，如胎儿为O型，则完全可以排除HDN发生的可能，避免其他不必要的检测；如胎儿为AO/BO基因型，则提示有发生HDN的可能，从而指导临床在必要时进行其他检测。 3 综合诊断及评价 评估HDN的发生，如结合妊娠史及HDN史、孕妇同种抗体动态水平、胎儿血型基因型预测、抗体功能活性测定等进行综合判断，可将HDN预测准确性提高到95%8。综合诊断及评价方法为（1）流产史、HDN史；（2）母血型为O/RhD（-），父为A或B或AB/RhD（+）；（3）孕妇妊娠期抗-A/B或抗-D水平的变化：ABO抗体效价64时，建议复查；256时，可疑HDN；512时，高度怀疑HDN；既往HDN史且本次512时，建议换血。RhD抗体效价8时，会有中度HDN风险；16时，很危险，可考虑换血；高危病例可采集羊水用PCR方法进行早期基因定型。 参考文献 1 李勇，杨贵贞.人类红细胞血型学理论与实验技术.北京:中国科学技术出版社,1999,173-181. 2 Voak D, Mitchell R, Scott M, et al. Guidelines for blood grouping and red cell antibody testing during pregnancy. Transfusion Med,1996,6:71. 3 Hadley AG.A comparision of in vitro tests for predicting the severity of heamolytic disease of the fetus and the newborn. Vox Sang，1998,74（Suppl 2）:375. 4 Clark AC. Red cell antibodies in pregnancy evidence overturned. Lancet,1996,347:485. 5 Anderson KC，Ness PM. Scientific Basis of Transfusion Medicine. Implication for Clinical Practice. Philadelphia:Saunders,2000,102. 6 Bowman J. The management of heamolytic disease of the fetus and newborn. Semin Perinatol,1997,21（1）:39. 7 hessner MJ, McFarland JC, Eindeen DJ. Genotyping of KEL1and KEL2 of the human Kell blood group system by PCR-SSP.Transfusion,1996,36（6）:495. 8 Cotreras M, Garn