PCR检测输血传播病毒DNA的临床应用.doc

PCR检测输血传播病毒DNA的临床应用【关键词】 输血传播病毒【摘要】 目的 检测临床病人输血传播病毒（TTV）的感染情况。方法 应用PCR法对613例急慢性肝炎临床标本和100例健康体检者检测TTV DNA，同时检测HBV DNA和HCV RNA。结果 TTV DNA阳性率为3.1%（19/613），HBV DNA阳性率为38.5%（236/613），HCV RNA阳性率为11.9%（73/613）。19例TTV DNA（+）中有4例合并HBV DNA（+），3例合并HCV RNA（+）。健康体检者检出2例TTV DNA（+）。HBV DNA（+）、HCV RNA（+）和HBV DNA（-）HCV RNA（-）人群TTV DNA的检出与健康体检者进行比较，差异无显著性（P>0.05）。结论 TTV DNA与HBV DNA（+）人群、HCV RNA（+）人群无明显相关性。【关键词】 输血传播病毒；肝炎病毒，乙型；肝炎病毒，丙型；聚合酶链反应【Abstract】 Objective To detect the infection state of TTV of clinical patients.Methods The 613 clinical specimens of acute and chronic hepatitis and 100 healthy volumteers were detected for TTV DNA by PCR.Meanwhile,HBV DNA and HCV RNA were detected.Results The positive rate of the detection of TTV DNA was 3.1%（19/613）.The positive rate of the detection of HBV DNA and HCV RNA was respective 38.5%（236/613） and 11.9%（73/613） in all specimens.4 HBV DNA and 3 HCV RNA were also detected in 19 TTV DNA positivity.2 TTV DNA were detected in healthy volumteers.There was no significant difference between HBV DNA positivity,HCV RNA positivity,HBV DNA negativity,HCV RNA negetivity and healthy volumteers.Conclusion The TTV DNA is not correlated to HBV DNA positivity or HCV RNA positivity.【Key words】 transfusiontransmitted virus;hepatitis B virus;hepatitis C virus;polymerase chain reaction在急慢性输血后肝炎、散发性肝炎、急性重型肝炎及肝硬化病例中，有部分病例无法用已建立的甲、乙、丙、丁、戊型肝炎的实验室诊断方法进行病原学分型。继1995年发现庚型肝炎病毒（HGV）后，1997年日本学者Nishizawa等1报道了应用代表性分析法发现了一种可能与输血后肝炎相关的病毒，暂时称为输血传播病毒（TTV）。1998年，Okamoto等2报道了TTV全序列。为了解临床病人TTV的感染状况，本文用PCR法对急慢性肝炎临床标本进行了TTV DNA的检测，同时检测HBV DNA和HCV RNA。现将结果报告如下。1 材料与方法1.1 标本来源 613例肝炎患者血清标本均来自肝炎门诊及传染科住院病人，其中男379例，女234例，年龄1965岁。另选择100例健康体检者作为对照组，HBsAg（-），抗HCV（-），肝功能血清指标正常，B超影像学检查正常。分离血清0.5ml置-20保存备用。1.2 HBsAg、抗-HCV的检测 HBsAg试剂盒由上海科华公司提供，抗-HCV IgG试剂盒由河南华美生物工程有限公司提供，采用ELISA法，严格按试剂盒说明书进行操作。酶标仪为美国宝特Bio-TekELX800。1.3 TTV DNA、HBV DNA、HCV RNA的检测 TTV DNA、HBV DNA、HCV RNA PCR试剂盒均由河南华美生物工程有限公司提供。每次PCR扩增设置阴性、阳性对照。PCR扩增仪为PE9600型。2 结果613例肝炎患者中TTV DNA阳性率为3.1%（19/613），HBV DNA阳性率为38.5%（236/613），HCV RNA阳性率为11.9%（73/613）。19例TTV DNA（+）中有4例合并HBV DNA（+），3例合并HCV RNA（+），没有发现三者同时阳性的病例。健康体检者检出2例TTV DNA（+），未检出HBV DNA（+）和HCV RNA（+）。HBV DNA（+）人群、HCV RNA（+）人群和HBV DNA（-）、HCV RNA（-）人群TTV DNA的检出与健康体检者进行比较，差异无显著性（P>0.05）。详见表1。表1 不同人群TTV DNA阳性检出情况略3 讨论由于TTV为单链DNA病毒，目前多采用传统PCR或套式PCR方法来检测TTV DNA。本文采用半套式PCR方法对急慢性肝炎临床标本和健康体检者进行TTV感染的检测，结果显示236例HBV DNA（+）者中有4例发现TTV DNA（+），73例HCV RNA（+）者中有3例发现TTV DNA（+），未发现TTV DNA、HBV DNA和HCV RNA三者同时（+），提示TTV与HBV和HCV不存在相关性。本文613例临床标本TTV DNA阳性率为3.1%，10例健康体检者TTV DNA阳性率为2.0%，远低于国内、外的报道35。Naoumov等3在72例慢性肝炎患者中检出了18例TTV DNA阳性（25.0%）。蔡澍等4的资料显示，TTV DNA在正常献血人群、HBsAg阳性人群和抗-HCV阳性人群中其检出率都在10%17%。杨建荣等5的资料显示，TTV DNA阳性检出率在健康体检者、乙肝患者和丙肝患者分别为28.3%、31.7%和25.0%。从表1表明，HBV DNA（+）人群、HCV RNA（+）人群和HBV DNA（-）HCV RNA（-）人群TTV DNA的检出与健康体检者进行比较，差异无显著性（P>0.05），结果提示，TTV的感染与HBV、HCV无明显的联系，其致病性与肝炎的关系可能与其他因素有关，是否在一定条件下转化成致病因素有待进一步探索。TTV在本地区是否存在变异，还有待进一步探索。这也可能与采用不同序列的PCR系统有关。Okamoto等6对报道的众多TTV DNA序列进行同源性比较，不同TTV基因型的某些片段序列存在很大的差异性，TTV至少可分为16个基因型，因此，采用不同序列的PCR系统可影响TTV的检出率。有关TTV的流行病学、生物学特征还有待于进一步的研究。【参考文献】1 Nishizawa T,Okamoto H,Konishi K,et al.A novel DNA virus（TTV） associated with elevated transaminase levels in posttransfusion hepatitis of unknown etiology.Biochem Biophys Res Commun,1997,241:92-97.2 Okamoto H,Nishizawa T,Kato N,et al.Molecular cloning and characterization of a novel DNA virus（TTV） associated with posttransfusion hepatitis of unknown etiology.Hepatol Res,1998,10:1-16.3 Naoumov N,Petrova E,Thomas M,et al.Presence of a newly described human DNA virus （TTV）in patients with liver disease.Lancet,1998,352:191-195.4 蔡澍,李国明,罗均,等.PCR和ELISA 检测不同人群TTV的感染状况.河北医药,2004,26:135-136.5 杨建荣,陈晓东,陶志华.荧光定量PCR检测TTV方法学建立及临床应用.华中医学杂志,2004,28:17-18.6 Okamoto H,