生豆浆灌胃对急性胰腺炎小鼠胰腺外分泌功能的影响.doc

生豆浆灌胃对急性胰腺炎小鼠胰腺外分泌功能的影响 作者：梁卓，马腾，赵保民，王占明，黄博，顾炳权，张惠中，黄裕新【摘要】 目的： 观察生豆浆对小鼠试验性急性胰腺炎的治疗效果. 方法： 采用腹腔注射左旋精氨酸法诱导小鼠急性胰腺炎（AP）模型，将造模后的小鼠随机分为4组，即单纯模型组38只，生豆浆组48只，熟豆浆组48只，白开水组48只. 分别测定各组血清淀粉酶活性，并计算各组在各个时间点的累积死亡率. 结果： 生豆浆组的血清淀粉酶明显低于熟豆浆组和白开水组（P0.05）. 在72 h和7 d的治疗时间内，生豆浆组的小鼠各个时间点的累积死亡率大部分都明显低于其他各组. 结论： 生豆浆能够明显降低AP小鼠的血清淀粉酶活性及小鼠死亡率. 生豆浆对AP有一定的治疗作用，可能与其含有胰蛋白酶抑制物和大豆异黄酮等抗炎因子有关. 【关键词】 生豆浆；急性病；胰腺炎；小鼠；大豆；胰蛋白酶抑制剂 0引言 急性胰腺炎（AP）是严重危害人类健康的急腹症，病死率高. 目前国内外对AP的发病机制仍未完全阐明，临床治疗仍存在许多难点. 对于AP的治疗，原则上要求患者禁食禁水，但可能由此而加重胃肠道功能紊乱. 利用抑肽酶和生长抑素治疗在临床上得到广泛应用. 生豆浆内含有胰蛋白酶抑制物和抗炎因子1，但生豆浆能否经胃肠道作用起到抑制胰腺分泌的作用尚少见报道. 我们观察生豆浆对小鼠实验性AP的治疗效果并探讨其可能机制，以期为临床治疗并缓解AP患者的胃肠功能紊乱提供理论依据. 1材料和方法 1.1材料健康雄性昆明小鼠200只，体质量（202）g(第四军医大学实验动物中心提供),编号SCXK（军）2002005 ；L精氨酸（Sigma公司）；新鲜美国M40黄豆（杨凌金山农业技术有限责任公司）；淀粉酶测定试剂盒（上海复兴长征医学科学有限公司）；多功能食品料理机（天津达康电器公司）. 1.2方法 1.2.1动物分组将小鼠随机分为实验一，共5组，即正常对照组8只，模型对照组（AP 模型）40只，生豆浆组( AP生豆浆治疗)40只，熟豆浆组（AP熟豆浆治疗）40只，白开水组（AP白开水治疗）40只. 实验二：共4组，模型对照组（AP 模型）8只，生豆浆组( AP生豆浆治疗)8只，熟豆浆组（AP熟豆浆治疗）8只，白开水组（AP白开水治疗）8只，用于观察治疗7d的效果. 灌胃给药，1.0 mL/次，1次/6 h. 1.2.2大豆浆制作将新鲜黄豆100 g，35 g/L干豆奶，加蒸馏水500 mL,浸泡24 h后用机械打磨粉碎成浆（额定频率50 Hz，最大输出功率300 W，离心力0.67 g, 10 min）. 1600目筛过滤，弃渣留浆，加蒸馏水制成豆浆浓度为23.9 g/L. 生物保鲜冰箱保存备用. 熟豆浆为保鲜豆浆经100煮沸10 min. 1.2.3AP模型制作参照左旋精氨酸法2. 实验小鼠注射L精氨酸前全部禁食12 h，自由饮水. 腹腔注射200 g/L L精氨酸，2 g/kg，共2次，间隔1 h. 1.2.4观察指标 血清淀粉酶： 应用EPNPG7比色法（亚乙基对硝基酚葡萄糖比色法）检测. 分别在模型制作后的6，12，24，48，72 h分批处死各组小鼠，每批6只. 摘眼球取血，离心分离血清，检测血清淀粉酶活性. 对7 d治疗组的30只小鼠在第7 d处死，方法同上，检测各组血清淀粉酶活性. 死亡率观察: 记录在整个实验过程中各组小鼠的死亡数，并分别计算72 h内各个时间点的累积死亡率和7 d治疗组的死亡率. 一般情况： 观察处死前小鼠的精神状态、活动度、大便性质等；观察处死后小鼠的腹水量和性质及各脏器的大致情况等. 统计学处理： 所有数据均以xs表示，结果采用SPSS 10.0统计软件进行LSDT检验及2检验. 2结果 2.1小鼠血清淀粉酶生豆浆组的血清淀粉酶与熟豆浆组、白开水组比较有显著差异（P<0.05，表1）；生豆浆组在6，12，24，48 h的血清淀粉酶活性也显著低于单纯模型组（P<0.05）；在第72 h单纯模型组血清淀粉酶活性趋于正常，而熟豆浆组和白开水组的活性出现反弹升高，生豆浆组升高并不明显；7 d组所有小鼠的血清淀粉酶活性均降低且低于正常值.表1小鼠血清淀粉酶活性的变化 2.2死亡率的观察比较除外实验处死小鼠数（非正常死亡数统计中已除外），72 h治疗时间内生豆浆组的小鼠累计死亡率明显低于其它各组（表2）. 7 d治疗时间内，模型对照组、生豆浆组、熟豆浆组及白开水组的小鼠死亡数分别为5，2，4，4只. 生豆浆组的小鼠死亡数明显低于其他各组. 表272 h内各时间点小鼠累计死亡数及累计死亡率 2.3一般情况实验期间，各组小鼠均精神萎靡，活动较差，除单纯模型组外，各组小鼠均有腹泻、呕吐现象. 对死亡小鼠进行解剖发现部分小鼠有血性腹水，其中单纯模型组4只、生豆浆组2只、熟豆浆组3只、白开水组2只. 其中，熟豆浆组2只、生豆浆组1只小鼠发生肠坏死、发黑，并有恶臭. 3讨论 由于病因和病期的不同致AP的治疗方法亦不完全相同. 传统的治疗措施包括禁食水、持续胃肠减压、抑制胃酸分泌和抑制胰腺分泌. 尽管有报道3发现蛋白酶抑制剂甲磺酸加贝酯、抗胰腺分泌药物奥曲肽和抗炎药物血小板活化因子拮抗剂Lexipafant有一定疗效，但在大规模的随机研究中其疗效并不满意. 因此，目前尚无治疗AP的公认的特效药物. 传统认为对AP应给以全胃肠外营养，但导致肠道黏膜屏障结构和功能的下降，并发肠道细菌移位和肠源性感染. 近期有研究4-5报道对80%的AP采用早期鼻胃管营养治疗有效，并不增加对胰酶分泌的刺激. 采用中药大黄及承气汤胃管灌注，可减轻胰腺分泌和全身炎症反应，保护肠道黏膜屏障功能. 进食生豆浆会发生呕吐、腹泻等胃肠道反应，可能与其含有胰蛋白酶抑制物有关6，煮沸5 min后胰蛋白酶抑制物被破坏，不会对人体有害. 我们用生豆浆灌胃治疗小鼠AP的实验研究结果发现，未钝化大豆乳清（生豆浆）可抑制小鼠胰淀粉酶的分泌，减少小鼠死亡率. 推测可能与大豆含有抗炎因子，胰蛋白酶抑制物等有关. 结果提示，生豆浆可经胃肠道给药，并能抑制胰腺分泌和减少小鼠死亡率，可能还具有抑制全身炎症反应和保护肠道黏膜屏障功能的作用.【参考文献】 1 刘欣，冯杰. 大豆胰蛋白酶抑制因子的研究进展. 广东饲料J. 2005,06:10-12.2 Tani S, Itoh H, Okabayashi Y, et al. New model of acute necrotizing pancreatitis induced by excessive doses of arginine in rats J. Dig Dis Sci, 1990,35:367-374.3 Raraty MG, Connor S, Criddle DN, et al. Acute pancreatitis and organ failure: pathophysiology, natural histoy, and management strategiesJ.Curr Gastroenterol Rep, 2004,6:99-103.4 樊宏伟，丁小琳. 生长抑素联合元