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肺积方抗小鼠肺癌转移 作者：田建辉, 施志明，周之毅, 黄云胜, 王琳【摘要】 目的：观察肺积方对小鼠肺癌转移的疗效。方法：采用小鼠转移瘤模型，24只C57BL/6小鼠分为模型组、顺铂组和肺积方组，每组8只。模型组以生理盐水0.3 ml灌胃，肺积方组予肺积方煎剂（4 g/ml）0.3 ml灌胃，1次/d，顺铂组予顺铂（0.5 mg/ml）0.52 ml腹腔注射，1次/3 d。干预20 d后，称取小鼠体质量、瘤质量和肺质量，玻片计数法计数肺部转移灶的数目。结果：顺铂组小鼠的体质量低于模型组和肺积方组（P0.01），而肺积方组体质量最大；顺铂组和肺积方组的瘤质量低于模型组（P0.01）；顺铂组和肺积方组小鼠肺部转移灶数目比模型组少（P0.01）。结论：肺积方可以抑制肿瘤生长，减少肺部转移瘤的个数，并具有保持小鼠体质量的作用。 【关键词】 肺癌 转移 中医药 肺积方 小鼠Methods: The lung cancer metastasis model of mice was established in this experiment study. Twentyfour mice were randomly divided into three groups: untreated group, cisplatin group and Feiji Formula group. Mice in the Feiji Formula group were treated with Feiji Formula decoction; in cisplatin group, with cisplatin by intraperitoneal injection; and in the untreated group, with normal saline (NS). After twentyday treatment, the body and tumor weights as well as the number of metastatic tumors in both lungs of each mouse were measured.Results: The body weight of mice in cisplatin group was significantly less than that of Feiji Formula group and untreated group (P0.01); the tumor weight of mice in cisplatin group and Feiji Formula group was markedly lower than that of untreated group (P0.01); and the number of metastatic tumors in cisplatin group and Feiji Formula group was markedly lower than that of the untreated group (P0.01), no significant difference between the Feiji Formula group and cisplatin group in terms of the weights and the numbers of metastatic tumors in bilateral lungs.Conclusion: Feiji Formula can suppress tumor growth and decrease the number of lung metastatic tnmors in the mice, and maintain the body weight of the mice.Keywords: lung cancer; metastasis; traditional Chinese medicine; Feiji Formula; mice肺积方是上海中医药大学龙华医院施志明教授的经验方，多年来在临床用于治疗肺癌，取得良好的效果。临床研究证实，肺积方可稳定瘤体，改善中晚期非小细胞肺癌患者的临床症状，提高生存质量；机制研究表明肺积方可以通过多途径干预肺癌免疫逃逸,恢复机体的免疫监视作用，提高临床疗效13。为进一步明确肺积方的作用，本研究采用小鼠转移瘤模型，观察肺积方的抑瘤作用和抗肺癌转移的作用。1 材料和方法1.1 实验材料1.1.1 实验动物及瘤株 24只C57BL/6小鼠，雌雄各半，体质量（162）g，中国科学院实验动物中心提供，按清洁级标准饲养。小鼠Lewis肺癌细胞株和瘤块种鼠1只，由上海市肿瘤研究所姚明研究员惠赠。1.1.2 实验药物 肺积方由生黄芪30 g、北沙参12 g、麦冬12 g、天门冬12 g、茯苓15 g、石上柏30 g、石见穿30 g、鱼腥草15 g、七叶一枝花24 g和山慈菇30 g组成。浓煎成4 g/ml浓度，于4 冰箱中贮存备用；顺铂由山东齐鲁制药厂生产，20 mg/支，批号为990711。1.2 实验方法1.2.1 造模及分组 在无菌台上剥离瘤种的瘤块，在含有抗生素的生理盐水中将瘤块剪成1 mm1 mm1 mm的瘤块。取24只实验小鼠，将上述组织块采用20号套管针植入右侧腋后皮下。将小鼠随机分为模型组、顺铂组和肺积方组，每组8只，各组间小鼠体质量差异无统计学意义。接种后第2天开始灌胃干预治疗，共计20 d，治疗结束时处死取材。模型成功率100%，所有小鼠存活并纳入统计分析。1.2.2 给药方法 肺积方组：肺积方汤0.3 ml灌胃，1次/d，连续20 d。顺铂组：生理盐水配制成0.5 mg/L的顺铂溶液，根据人的常规用量换算4，每只0.52 ml/3 d，腹腔注射。模型组：生理盐水0.3 ml灌胃，1次/d，连续20 d。1.2.3 观察指标 20 d后，称取小鼠体质量后脱颈椎处死；剥取新鲜皮下实体瘤肿瘤组织和双侧肺组织称取质量。采用玻片计数法计算双肺表面转移瘤结节数5。1.3 统计学方法 用SPSS 10.0 统计软件进行统计分析。计量资料数据用xs表示，采用方差分析比较组间差异。2 结果2.1 治疗后各组小鼠体质量、实体瘤质量、肺质量和肺部转移灶个数 顺铂组小鼠的体质量明显小于模型组和肺积方组（P0.01），肺积方组小鼠体质量最大。顺铂组和肺积方组小鼠实体瘤质量均低于模型组（P0.01），而顺铂组瘤质量最低，与肺积方组无显著差别（P>0.05）；3组小鼠肺质量比较，差异无统计学意义(P>0.05)；顺铂组和肺积方组的肺部转移灶数目低于模型组（P0.01），顺铂组效果最佳，但与肺积方组比较差异无统计学意义（P>0.05）。见表1和图1、2。表1 治疗后各组小鼠体质量、实体瘤质量、肺质量和肺转移瘤个数（略）Table 1 Weights of body, solid tumor and lung and number of lung metastatic tumors in three groups*P0.01, vs untreated group; P0.01, vs cisplatin group.图1 肺积方对小鼠实体肿瘤的影响（略）Figure 1 Solid tumor size after Feiji Formula treatmentA: Cisplatin group; B: Untreaed group; C: Feiji Formula group.图2 小鼠肺脏转移瘤（略）Figure 2 Metastatic tumor located at periphery part of the lung2.2 压片法观察肺部转移灶 采用压片法可以清晰地看到肺部转移灶，多在周边，表现为灰白色的凸起，周边与肺组织连接的部分为暗红色。见图2。3 讨论 肺癌中70%80%为非小细胞肺癌（nonsmallcell lung cancer, NSCLC），早期无明显症状，约80%患者确诊时已处于晚期，无手术根治机会；传统的放化疗对肿瘤局部病灶的控制有一定近期疗效，但常受到毒副反应、敏感性、耐药性和全身状况等因素的限制，疗效无突破性进展，1年生存率仅为35%左右6。肺癌的病机特点为正气亏虚为本，正虚以气、阴为多，日久伤阳，病变脏腑以肺、脾为主，日久及肾7, 8。肺积方由生黄芪、北沙参、麦冬、天门冬、茯苓、石上柏、石见穿、鱼腥草、七叶一枝花和山慈菇组成。方中黄芪既补养肺脾之气，又可托毒生肌，为君药。北沙参、天门冬、麦冬、女贞子合用，共奏滋养肺、胃、肾阴的作用，相须为用，共为臣药。方中石上柏、石见穿、鱼腥草、七叶一枝花、山慈菇可化痰解毒，对肺癌细胞具有抑制作用，可抑制肺癌细胞增殖和扩散。临床以此方灵活加减应用取得良好效果9。 本研究发现，经过治疗后，顺铂组小鼠的体质量明显小于模型组和肺积方组（P0.01），而肺积方组体质量最大，说明肺积方可以保持荷瘤小鼠的体质量；在抑制肿瘤方面，顺铂组和肺积方组的瘤体质量明显低于对照组，说明化疗和肺积方均可以抑制肿瘤的增长（P0.01），而顺铂组效果最佳；3组在肺质量指标方面无差异；在肺部转移灶的控制方面，从图2可见，转移灶较多位于肺的周围，顺铂组和肺积方组的转移灶数目均明显低于模型组，说明顺铂和肺积方均可以显著控制肺部转移，而顺铂组效果最佳。本文的研究结果证实肺积方可以维持小鼠体质量，抑制肿瘤生长，减少肺部转移瘤的个数。其具体的作用机制，有待深入研究。【参考文献】 1 You J, Shi ZM. 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Chinese. 陈奇. 中药药理研究方法学. 北京: 人民卫生出版社. 1997: 11031104.5 Gao J, Zhang JB. Preclinical and clinical cancer invasion and metastasis. Beijing: Science Press. 2003: 78. Chinese.高进, 章静波. 癌的侵袭与转移基础医学与临床. 北京: 科学出版社. 2003: 78.6 Li LY. Lung cancer. Ai Zheng Jin Zhan. 2005; 3(2): 114. Chinese.李龙芸. 肺癌. 癌症进展. 2005; 3(2): 114.7 Liu JX. Analysis of therapeutic effect of syndrome differentiation treatment of 31