舒气和胃丸中大黄酚含量的高效液相色谱测定.doc

舒气和胃丸中大黄酚含量的高效液相色谱测定【摘要】 目的建立测定舒气和胃丸中大黄酚的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法（HPLC）用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，Kromasil C18柱（4.6 mm200 mm）； 甲醇水磷酸(85150.02)为流动相,流速1.0 mlmin -1；检测波长254 nm。结果HPLC法测定大黄酚可达基线分离，进样量在0.017 00.544 8g时线性良好,回归方程为Y=74 651.99X-186.40 （r=0.999 97）。5次测定平均加样回收率为98.36%,RSD为0.51%。结论该方法简便、准确、重复性好，可用于舒气和胃丸中大黄酚的含量测定。 【关键词】 舒气和胃丸； 高效液相色谱法 ； 大黄酚舒气和胃丸是由白术、大黄、陈皮、木香等十余味药材组成的复方制剂。具有舒气开胃、化瘀止痛、宽胸和胃等功效，临床用于治疗胸脘胀闷，胃寒腹痛等症，疗效满意。为了有效地控制该产品的的质量，我们参照文献1采用高效液相色谱法对处方中的主要药味大黄中的有效成分大黄酚进行了定量研究。现报道如下。1 仪器与试剂 LC-10A高效液相色谱仪（日本Shimadzu公司）；甲醇为色谱纯；磷酸、氯仿、盐酸等试剂均为分析纯。大黄酚对照品（批号：796200003 中国药品生物制品检定所）。舒气和胃丸（批号：071101，071212，080403 沈阳军区某部制剂中心提供）。2 方法与结果2.1 色谱条件及系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，Kromasil C18柱（4.6 mm200 mm）；甲醇水磷酸(85150.02)为流动相；流速1.0 mlmin -1,检测波长为254 nm。理论板数按大黄酚峰计算应不低于3 000。2.2 溶液的制备2.2.1 对照品溶液精密称取大黄酚对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.017mg的溶液，即得。2.2.2 供试品溶液取本品，切碎，混匀，取约5 g，精密称定，加硅藻土3 g，研细，置锥形瓶中，精密加甲醇50 ml，称定重量，加热回流2 h，放冷，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液20 ml，蒸干，残渣加水20 ml使溶解，加盐酸1 ml，加热回流40 min，加氯仿30 ml，加热回流1 h，分取氯仿层。酸水层用氯仿提4次(20，15，15，10 ml)，合并氯仿液，蒸干。残渣用甲醇溶解并转移至25 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。2.2.3 阴性样品溶液处方条件制备不含大黄的样品，同法制成阴性样品溶液，备用。2.3 高效液相分离图谱及保留时间的确定取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液，在上述色谱条件下测定，得色谱图（见图1）。结果显示阴性液色谱图在与大黄酚对照品相同保留时间处未显色谱峰，表明无干扰。2.4 线性关系实验分别精密吸取大黄酚对照品溶液(0.034 048 mg/ml)0.5，1，2，4，8，16 l，注入液相色谱仪，测定结果见表1。以对照品进样量(g)为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为Y=74 651.99X-186.40，r=0.999 97。结果表明大黄酚进样量在0.017 00.544 8 g范围内呈良好的线性关系。2.5 精密度实验精密吸取对照品溶液(0.034 mg/ml)，按上述色谱条件，重复进样5次，峰面积平均值l5193.74，RSD为0.91%。测定结果表明，仪器精密度良好。2.6 重复性实验取同一批样品(批号071101)，精密称取5份，平行测定，测定含大黄酚（mg）分别为0.130 2，0.129 6，0.129 8，0.129 6，0.129 8。RSD为0.19%。测定结果表明，本方法重复性良好。2.7 稳定性实验取样品(批号071101)的供试品溶液，分别于0，2，4，6，8 h进样，测得峰面积分别为 7 758.49，7 835.94，7 745.98，7 769.96，7 840.20，平均为7 790.09 ，RSD为0.57%。结果表明，供试品溶液制备后8h内测定，色谱峰面积无明显变化，在此时间内待测组分的化学性质稳定。2.8 回收率实验采用加样回收法。取已知含量的样品(批号071101，O.129 8 mg/g)约2.5 g，精密称定，精密加入大黄酚对照品溶液3.5 ml (0.106 4 mg/ml)，按“2.2.2”项下的方法处理、测定，计算回收率，平均回收率为98.36%，RSD为0.51%。结果见表1。表1 加样回收率测定结果（略）2.9 样品测定分别精密吸取“2.2.1”项下的对照品溶液6 l，“2.2.2” 项下供试品溶液10 l，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，以外标法计算样品中大黄酚的含量。同法测定3批样品。结果见表2。表2 3批样品含量测定结果（略）3 讨论 本实验分别选用甲醇、乙醇为提取溶剂,由于乙醇所得的溶液黏度很大，过滤困难,而采用甲醇作溶剂时提取效率高，因此选择甲醇为提取溶剂，经实验，超声法、回流法以及索氏提取法3种不同的提取方法中以回流法提取的效率最高，且回流2 h已