脑梗死早期应用黄连素对缺血性脑组织的保护作用及对pAkt,.ppt

脑梗死早期应用黄连素对缺血性脑组织的保护作用及对pAkt, pGSK, pCREB和NF-B调节作用的研究,河北医科大学第二医院神经内科 张祥建 教授 张晓林 董立朋,研究背景,我国现存脑卒中病人700多万 每年新发病例250万 存活下来的患者2/3留有残疾 每年死于脑血管病的患者约达150万 脑卒中的发病率每年上升8.7%,研究背景,寻求有效的脑卒中治疗药物刻不容缓！,有效的脑卒中治疗药物却非常少！,现代医学对各种中药单体进行了提取和深入研究，其中黄连素的作用越来越受到研究者的关注。,研究背景,黄连素具有抗炎、抗肿瘤、调节糖脂代谢、免疫调节等多种药理作用。 多项体内外研究表明黄连素具有脑保护作用，且作用靶点是炎症和凋亡通路。,研究背景,黄连素能否降低缺血脑组织的继发性损伤 机制如何,研究背景,脑缺血后形成脑梗死中央区和边缘半暗带，临床用药可以降低继发性脑损伤，挽救缺血半暗带细胞死亡。 Murphy TH, Corbett D. Plasticity during stroke recovery: from synapse to behaviour. Nat Rev Neurosci, 2009, 10(12):861-872,研究背景,细胞凋亡,细胞毒性,氧化应激,研究背景,Akt/GSK/CREB通路在炎症反应和细胞凋亡方面发挥重要作用。 细胞应激如脑缺血时Akt通过PI(3)K被激活，活化后的Akt能够磷酸化多个下游靶点，包括GSK和CREB，从而降低促炎因子和细胞凋亡因子的转录和翻译。,研究背景,蛋白激酶B,磷脂酰肌醇-3羟基激酶,cAMP反应原件结合蛋白,研究背景,糖原合成酶激酶3 ,研究背景,实验方法,实验方法,实验方法,Text,24小时取材,神经功能测定 pAkt,pGSK,pCREB 和NF-B测定,实验方法,采用大脑中动脉闭塞 (middlecerebral occlusion, MCAO)模型,实验方法,术后立即腹腔注射; 小剂量治疗组（BBR-L）给予10 mg/kg黄连素; 大剂量治疗组（BBR-H）给予40 mg/kg黄连素; 单梗组、假手术组给予等量生理盐水。,实验方法,采用改良Longa评分法: 0分：无缺陷； 1分：不能伸展对侧前肢； 2分：对侧前肢屈曲； 3分：轻度向对侧转圈； 4分：严重向对侧转圈； 5分：向对侧倾倒。,实验方法,采用干湿重法： 含水量=(脑组织湿重-脑组织干重)/脑组织湿重,实验方法,水肿修正后脑梗死体积百分比（%）= 总梗死体积(梗死侧半球体积梗死对侧半 球体积) / 梗死对侧半球体积100%。,实验方法,免疫组化方法测定pAkt、pGSK、pCREB 和NF-B的表达。,实验方法,Western Blot法测定pAkt、pGSK、pCREB和NF-B的表达。,实验方法,RT-PCR法测定Akt、GSK、CREB和NF-B的表达。,实验方法,采用SPSS 13.0统计软件。 神经功能评分采用MannWhitney U检验，其余结果均采用均数标准差表示，多组数据比较采用方差分析（ANOVA），以= 0.05 为检验标准。,结果,与单梗组相比，黄连素治疗组脑梗死体积减小，具有统计学意义。,结果,与单梗组相比，黄连素治疗组神经功能评分降低，具有统计学意义。,结果,与单梗组相比，黄连素治疗组脑梗死侧脑组织含水量降低，具有统计学意义。,结果,免疫组化结果表明：与单梗组相比，黄连素治疗组脑梗死组织中的pAkt、pGSK和pCREB的表达水平升高 NF-B的表达水平下降，具有统计学意义。,结果,免疫组化结果表明：与单梗组相比，黄连素治疗组脑梗死组织中的pAkt、pGSK和pCREB的表达水平升高 NF-B的表达水平下降，具有统计学意义。,结果,Western Blot结果表明：与单梗组相比，黄连素治疗组脑梗死组织中的pAkt 、pGSK 和 pCREB的表达水平升高，具有统计学意义。,结果,Western Blot结果表明：与单梗组相比，黄连素治疗组脑梗死组织中的NF-B核积累的水平下降，具有统计学意义。,结果,RT-PCR结果表明：与单梗组相比，黄连素治疗组脑梗死组织中的Akt、GSK和CREB mRNA的表达水平无差异，NF-B mRNA的表达水平下降，具有统计学意义。,讨论,讨论,讨论,讨论,结论,结论,结论,发表论文,