DNA重组的基本工具.ppt

定向基因改造设想,设想一,能否让禾本科的植物也能够固定空气中的氮？,能否让细菌“吐出”蚕丝？,设想二,能否让微生物产生出人的胰岛素、干扰素等珍贵的药物？,设想三,基因拼接技术或DNA重组技术,生物体外,基因,DNA分子水平,什么叫基因工程？P,定向改造生物性状,基因重组,【大胆设想】 利用转基因技术如何让细菌“吐出”蚕丝？,识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。,1、来源：,2、种类：,3、作用：,4、结果：,形成两种末端,一、 “分子手术刀” 限制性核酸内切酶,1、来源：,2、种类：,限制酶切割DNA后形成的末端黏性末端、平末端是如何形成的？,什么叫黏性末端？,判断：图中形成黏性末端的过程形成_个切口，断裂了_个磷酸二酯键,1,2,Sma,平末端 平末端,什么叫平末端？P5图1-3,1.要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性(平)末端？,_个切口，产生_个黏性(平)末端。,2.如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？,会产生 _ 的黏性(平)末端，然后让两者的黏性(平)末端黏合起来，就似乎可以合成重组的DNA分子了。,思考,2,4,相同,P7 思考与探究1，P4寻根问底,二、连接酶“分子缝合针”,.作用：,.DNA连接酶的种类,3.与DNA聚合酶作用相同吗？,可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，,Ecoli DNA连接酶 或T4DNA连接酶,即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键,T4 DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低,T4DNA连接酶,只能将单个核苷酸连接到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯键,形成磷酸二酯键,在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键,以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键连接成一条互补的DNA链,将DNA双链上的两个缺口同时连接起来，不需要模板,DNA分子复制的过程,1.载体的作用是什么？ 2.作为载体需要具备什么条件？ 可以从以下几个方面思考： 作为载体没有切割位点将怎样？ 假如目的基因导入受体细胞后不能复制将怎样？目的基因是否进入受体细胞，你如何察觉？ 如果载体对受体细胞有害将怎样？ 3.质粒是什么？,三、载体 “分子运输车”（阅读P6）,【作业】,P6重组DNA分子的模拟制作（材料自备，立意自选）-交成品 没买课本的下周买来 可以买一本教辅资料（新课）,【例】根据基因工程的有关知识，回答下列问题： (1)限制性内切酶切割DNA分子后产生的片段， 其末端类型有 _和_。 (2)质粒运载体用EcoR切割后产生的片段如下： 为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoR切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是 _。 (3)按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即_DNA连接酶和_DNA连接酶。,黏性末端,平末端,切割产生的DNA片段末端与EcoR产生的相同,(4)基因工程除质粒外，_和_ 也可做载体。 (5)请画出质粒被切割形成黏性末端的过程 -GGATCC-,噬菌体,动植物病毒,2. 载体的条件,能自我复制，或能进入受体生物细胞并在受体生物细胞内复制并表达； 有切割位点 有遗传标记基因 对受体细胞无害、容易分离 比较容易得到,3. 常见的载体,1. 作用,1.在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的DNA片段，需使用（ ） 同种限制酶 B. 两种限制酶 同种连接酶 D. 两种连接酶,A,练习,2.不属于质粒被选为基因运载体的理由是 A、能复制 （ ） B、有多个限制酶切点 C、具有标记基因 D、它是环状DNA,D,能复制并带着插入的目的基因一起复制,有切割位点,有标记基因的存在，可用含青霉素的培养基鉴别。,3. 基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操