《基本技术》PPT课件.ppt

第二章 食品微生物检验技术,在实验室中配制的适合微生物生长繁殖或累积代谢产物的任何营养基质，都叫做培养基(Media)。,第一节 培养基,一、培养基中的主要成分及其作用,（一）营养物质 N源、C源、无机盐、生长因子、水。,1、常用的N源物质,蛋白胨 牛肉膏 肉浸汁 酵母膏,2、糖、醇类物质,单糖：葡萄糖、果糖、半乳糖、甘露糖 双糖：蔗糖、麦芽糖、乳糖 多糖：淀粉、纤维素、菊糖 醇类：甘露醇、卫茅醇、甘油,（二）水,用蒸馏水，不能用自来水。,（三）凝固剂,琼脂、明胶、血清等。 要求：清一色、杂质少。,（四）抑制剂,1、作用：鉴定细菌、抑制杂菌的生长繁殖，增加待 检菌的检出率。 2、种类： 盐类：氯化钠、氯化锂、氰化钾、亚碲酸钾（钠）、亚硒酸钠等。 染色剂类：煌绿、蔷薇酸、结晶紫、孔雀绿、孟加拉红、玫瑰红。 胆盐类：猪（牛、羊）胆盐、混合胆盐、三号胆盐、去氧胆酸盐、胆石酸盐。 抗菌素：青霉素、链霉素、杆菌肽、多粘菌素。,（五）指示剂,1、作用：用于指示鉴别细菌可否利用分解糖醇类物质 和含氮化合物，产酸产碱的能力。 2、常用的指示剂： 酚红、溴甲酚紫、中性红、中国蓝、甲基红、复红、伊红、美蓝、孔雀绿等。,二、培养基的类型,由于各类微生物对营养的要求不同，培养目的和检测需要不同，因而培养基的种类很多。我们可根据某种标准，将种类繁多的培养基划分为若干类型。,（一）根据培养基的物理状态来区分,固体培养基 液体培养基 半固体培养基 脱水培养基,1、液体培养基,主要用于增菌培养、鉴别性培养，大型生产、科研等。,2、固体培养基,用作微生物的分离、鉴定、检验杂菌、计数、保藏、生物测定等。,观察微生物的动力，菌种鉴定等。,3、半固体培养基,含有除水分外的一切成分的商品培养基。 使用时加水灭菌。,4、脱水培养基,（二）根据培养基的用途来区分,增殖培养基 选择培养基 鉴别培养基,1、增殖培养基,在普通培养基中加入一些某种微生物特别喜欢的营养物质，以增加这种微生物的繁殖速度，逐渐淘汰其它微生物，这种培养基称为增殖培养基。,增菌、运送用培养基,2、选择培养基,在培养基中加入某种物质以杀死或抑制不需要的菌种生长的培养基，称之为选择培养基。,分离培养用的培养基,3、鉴别培养基,在培养基中加入某种试剂或化学药品，使难以区分的微生物经培养后呈现出明显差别，因而有助于快速鉴别某种微生物。这样的培养基称之为鉴别培养基。,鉴别用培养基,三、培养基制备的基本方法和注意事项,培养基的制备记录 培养基成分的称取 培养基各成份的混合和溶化 培养基pH的初步调正 培养基的过滤澄清 培养基的分装 培养基的灭菌 培养基的质量测试 培养基的保存,1、培养基的制备记录,每次制备培养基均应有记录，包括培养基名称，配方及其来源，和各种成份的牌号，最终pH值、消毒的温度和时间，制备的日期和制备者等。,2、培养基成分的称取,培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱，最好一次完成，不要中断。可将配方置于旁侧，每称完一种成分即在配方上面做出记号，并将所需称取的药品一次取齐，置于左侧，每种称取完毕后，即移放于右侧。完全称取完毕后，还应进行一次检查。,3、培养基各成份的混合和溶化,指示剂应在调节好pH值后再加入； 煮溶后要补加足水份； 不能把培养基煮焦，焦化的不能使用。,4、培养基pH的校正,灭菌后pH值会下降0.10.2，在做培养基校正pH值时，应比实际值高0.10.2； pH调整后，还应将培养基煮沸。,5、培养基的过滤澄清,液体培养基可用滤纸过滤法。 琼脂培养基,可用中间夹有薄层吸水棉 的双层纱布过滤。,、培养基的分装,斜面： 1/管 半固体培养基：1/3管 高层斜面：1/41/3管 平板：1315mL,7、培养基的灭菌,（1）含糖类或明胶的培养基： 113灭菌15分钟 或115灭菌10分钟。 （2）无糖培养基： 121灭菌1520分钟。 （3）血液、体液和抗生素等以无菌操作技术抽取 后再加入冷却至约50左右的培养基中。 （4）琼脂斜面培养基应在灭菌后冷至55-60 时取出，再摆置成适当斜面。,8、培养基的质量测试,（）如发现破裂、水分浸入、色泽异常、棉塞被培 养基沾染等,均应挑出弃去。并测定其最终pH。 （）将全部培养基放入361C恒温箱培养过夜， 如发现有菌生长，即弃去。 （）用有关的标准菌株接种12管或瓶培养基，培 养2448小时，如无菌生长或生长不好,应追 查原因并重复接种一次，如结果仍同前，则该 批培养基即应弃去，不能使用。,9、培养基的保存,（1）基础培养基不能超过两周。 （2）生化试验培养基不宜超过一周。 （3）选择性或鉴别性培养最好当天使用，倾注 的平板培养基不宜超过3天。,培养基配制 器材,培养基、玻璃器皿、天平、药匙,培养基配制 仪器,灭菌锅 (Autoclave),无菌操作台 (Laminar flow),培养基的配制 装水,以量桶装取适量蒸馏水于玻璃容器中。 于玻璃容器上标示培养基名称。,培养基的配制 称药,放上秤药纸并归零 以秤药匙舀出适当量培养基,培养基的配制 溶解培养基,倾倒培养基时小心不要沾到玻璃壁上,注意事项 配药结束,清理配药桌面与天平。 清洗秤药匙，擦干放回。 药品放回药品柜。,培养基的配制 分装,调整分注器刻度 分装试管 盖上试管盖,放入灭菌锅 灭菌,培养基的配制 灭菌,注意事项,拿灭菌后物品记得带耐热手套,培养基的配制 平板培养基,灭过菌的固态培养基于无菌操作台 內倒制平板培养基,第二节 微生物检验的基本操作技术,主要内容,无菌技术 接种与分离技术 微生物的培养方法,（一）什么是无菌技术,指在微生物实验工作中，控制或防止各类微生物的污染及其干扰的一系列操作方法和有关措施。,一、无菌技术,（二）无菌环境,无菌室 无菌柜 超净工作台,1、无菌室,（1）无菌室的结构：更衣间、缓冲间、操作间。 （2）无菌室的消毒和防污染 每日（使用前）紫外线照射（12小时）。 每周用甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸（2小时）