性病实验室检测与质量管理.pptx

1,3,性病实验室检测与质量管理,性病实验室检测,1,性病实验室质量管理,3,2,梅毒,梅毒,由梅毒螺旋体（TP）感染人体引起的具有复杂临床表现的慢性感染性疾病，性接触是最主要的传播途径，其次是母婴传播，少数也可通过输血或间接方式传播。 梅毒螺旋体又称苍白螺旋体，密螺旋体属，螺旋状的单细胞微生物，介于细菌与原虫之间。,梅毒临床分期,一期梅毒 硬下疳和（或）腹股沟淋巴结肿大。 二期梅毒 病期在2年内有多形性皮疹、扁平湿疣等。 三期（晚期）梅毒 病期在2年以上，可有皮肤粘膜损害和神经梅毒、心血管梅毒。 隐性（潜伏）梅毒 早期：病期在2年以内；晚期：病期在2年以上。无任何梅毒的症状和体征。 胎传（先天）梅毒 早期：在2岁前发病；晚期：在2岁以后发病。,梅毒实验室检测,病原学检测 暗视野显微镜检查 镀银染色 梅毒螺旋体核酸检测 血清学检测 非梅毒螺旋体抗原血清试验（非特异性抗体检测） 梅毒螺旋体抗原血清试验（特异性抗体检测）,病原学检测,暗视野显微镜检查,镀银染色检查,世界卫生组织推荐作为性病实验室必备项目之一。 用于一、二期梅毒的皮肤黏膜损害（硬下疳、扁平湿疣、鳞屑性皮损）及淋巴结病变的检测。 硬下疳出现1-2周后血清学试验才出现阳性，病原学检测可提高早期现症梅毒的检出率。 为避免非致病性螺旋体干扰，谨慎用于口腔（齿垢密螺旋体）和直肠（屈折密螺旋体、蚀疮溃疡密螺旋体）部位的检查。 试验敏感性不高，未检出螺旋体不能排除梅毒，应同时进行血清学试验。,病原学检测,可用于早期梅毒、现症梅毒、胎传梅毒的诊断及流行病学、复发与再感染、基因亚型与临床等研究。 一期、二期梅毒溃疡组织有较高检出率，特别是一期梅毒患者生殖器溃疡分泌物，血液、脑脊液标本由于其中梅毒螺旋体含量极低，检测阳性率很低。,梅毒螺旋体核酸检测,目前不作临床常规项目开展,梅毒血清学检测,梅毒血清学检测,非梅毒螺旋体抗原血清试验（梅毒非特异性抗体检测） 性病研究实验室试验（VDRL） 快速血浆反应素环状卡片试验（RPR） 甲苯胺红不加热血清试验（TRUST） 梅毒螺旋体抗原血清试验（梅毒特异性抗体检测） 荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS） 梅毒螺旋体抗体免疫印迹试验(TP-WB) 梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA） 梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA） 梅毒螺旋体抗体酶联免疫试验（TP-ELISA） 梅毒螺旋体快速诊断试验（TP-RT） 梅毒螺旋体化学发光免疫分析法（TP-CLIA）,梅毒非特异性抗体检测操作指南（WS/T 491-2016） 2016-07-07发布 2016-12-15实施,非梅毒螺旋体抗原血清试验,非梅毒螺旋体抗原血清试验,VDRL Venereal Disease Research Laboratory Test 抗原（心磷脂、卵磷脂、胆固醇的无水乙醇溶液）、磷酸盐缓冲液。 RPR Rapid Plasma Reagent Circle Card Test 抗原（同上）、EDTA、氯化胆碱、磷酸盐缓冲液、碳颗粒。 TRUST Tolulized Red Unheated Serum Test 抗原（同上）、EDTA、氯化胆碱、磷酸盐缓冲液、甲苯胺红染色粒子。,非梅毒螺旋体抗原血清试验,VDRL（肉眼）,非梅毒螺旋体抗原血清试验,VDRL（低倍镜）,1:1阳性,1:2阳性,1:4阳性,1:32阴性,1:16阳性,1:8阳性,非梅毒螺旋体抗原血清试验,RPR与TRUST,临床应用,辅助诊断 梅毒螺旋体感染后，人体会产生抗类脂质物质的抗体。梅毒非特异性抗体检测呈阳性反应，与活动性梅毒有关，是判断“现症感染”的指标，结合梅毒特异性抗体检测结果可确诊梅毒。 超过10 %的静脉药瘾者的滴度1:8，部分早期梅毒和潜伏梅毒的滴度1:8，低滴度值不可用于排除假阳性反应。 VDRL 是唯一诊断神经梅毒的标准方法，对CSF有较高的特异性，呈阳性反应的患者，可结合流行病资料和临床表现诊断神经梅毒。 VDRL/RPR/TRUST有如下结果，可作为判断先天梅毒的依据之一。新生儿的血清、CSF 中梅毒非特异性抗体水平高于同期母亲2个滴度；新生儿CSF-VDRL呈阳性反应；出生后3个月内，与初期的血清、CSF 中梅毒非特异性抗体水平增加 2 个滴度。,临床应用,疗效监测 在连续的疗效监测过程中，抗体滴度水平和变化趋势有着不同的临床意义： 抗体下降2 个滴度判断治疗有效； 抗体下降2个滴度，并且连续 2 个监测周期的定性试验呈阴性反应，判断治愈； 抗体滴度下降2个滴度，或上升2个稀释度，在排除重新感染和实验室技术性误差的情况下，继续随访监测； 抗体上升2个滴度或定性试验从阴性反应转变成阳性反应，应结合流行病学史和临床体征，可判断复发、再感染或治疗失败。 监测疗效时应采用与初次检测相同的方法和试剂。,临床应用,假阳性反应 个别品牌真空采血管中含有的添加剂成分，可干扰检测结果引起假阳性反应。 与梅毒感染无关的其它因素，如急性和慢性疾病、自然组织损伤等，梅毒非特异性抗体试验也可呈阳性反应。 常见的疾病因素有系统性红斑狼疮、麻风病、疟疾、传染性单核细胞增多症、病毒性肝炎、 肿瘤、其它螺旋体疾病等可引起假阳性反应。 常见的生理性因素有孕妇、老年人群可发生假阳性反应。 假阴性反应 感染梅毒螺旋体后，机体免疫应答需要一定过程，抗类脂质的抗体浓度尚处于实验方法的检测限之下，称为窗口期。可发生假阴性反应。 少数早期梅毒和神经梅毒以及部分晚期梅毒，可发生定性试验假阴性反应。 前带现象 部分早期梅毒（1%2% 二期梅毒、0.5%1%一期梅毒）的样品可出现前带现象。 血清固定 部分晚期潜伏梅毒、少数其它病程的样品可发生血清固定现象。,57%孕妇会出现一过性的RPR阳性。,血清固定,部分患者经过足量驱梅治疗，梅毒非特异性抗体维持在相对恒定的低滴度状态。 判断血清固定，应具备3个要素： 流行病学病史和临床表现排除复发、重新感染； 连续2个随访周期（6月），血清抗体维持在1滴度范围之内的低滴度水平（一般1:8），既变化趋势方向不明； 无实验室的技术性和方法学误差。 少数患者可终生存在血清固定现象。,梅毒螺旋体抗原血清试验,梅毒螺旋体抗原血清试验,FTAABS,完整的梅毒螺旋体包被“金标准”。,梅毒螺旋体抗原血清试验,TPWB（IgG/IgM）,梅毒螺旋体转印或基因重组抗原包被确证试验/胎传梅毒,梅毒螺旋体抗原血清试验,TPPA,抗原为超声裂解的梅毒螺旋体，常用于实验室内部复核。,梅毒螺旋体抗原血清试验,TPELISA,基因重组抗原，最常用筛查方法，敏感性、特异性有待评估。,梅毒螺旋体抗原血清试验,基因重组抗原，发展快、品牌多，性能有待评估。,TPCLIA,梅毒螺旋体抗原血清试验,TPRT试验,基因重组抗原，发展快、品牌多，性能有待评估。,方法选择,皮肤性病门诊 /样本量少的实验室 TPRT TRUST/RPR TPPA 入院检查 /术前筛查/样本量大的实验室 TPELISA/TPCLIA TRUST/RPR TPPA,流程选择,皮肤性病门诊 /样本量少的实验室 特异性试验与非特异性试验同时做，异常结果时用另一种特异性试验复核（TPPA）； 入院检查 /术前筛查/样本量大的实验室 特异性试验阳性做非特异性试验和滴度，异常结果时用另一种特异性试验复核（TPPA）；,梅毒螺旋体抗原血清试验,注明检测方法，如实报告； 让医生结合流行病学史、临床表现综合判断； 随访,TPELISA、CLIA、RT出现异常结果时需要复核，常用TPPA。,TPPA存在1%假阳性，FTAABS/TPWB试验仍不可或缺,采用梅毒螺旋体作抗原，是特异性的抗原抗体反应。 非特异性试验阳性的前提下，此试验阳性可确诊现症梅毒。 绝大部分梅毒患者经过抗梅治疗后，特异性试验仍可阳性，故不能作为疗效观察的指标，也不能用于区分现症感染和既往感染。 试验特异性较强，较少出现假阳性。,梅毒螺旋体抗原血清试验,梅毒血清学试验的生物学假阳性反应,梅毒血清学试验的结果解释,早期梅毒实验室检查流程,皮肤损害,病原学检查,血清学检查,非特异性抗体+特异性抗体 +,有,无,非特异性抗体-特异性抗体 ,非特异性抗体-特异性抗体 +,诊断梅毒,非特异性抗体+特异性抗体 ,排除梅毒,如非既往感染2周复检,+,淋病,是由淋病奈瑟菌(简称淋球菌)引起的各种化脓性感染，是一种经典的常见的性传播疾病。 革兰阴性双球菌、呈肾型、凹面相对、成双排列。 营养要求高。 对外界抵抗力极弱。,淋病奈瑟菌,直接显微镜检查淋球菌 分离培养淋球菌 非培养技术检测淋球菌（核酸检测）,淋病的实验室诊断方法,女性淋病涂片（宫颈）,男性淋病涂片（尿道）,直接显微镜检查,男性淋菌性尿道炎的尿道标本敏感性及特异性可高达95%99%，具诊断价值。 宫颈标本、无症状男性尿拭子及取自直肠的涂片时敏感性仅4070%。 不推荐直接显微镜检查诊断直肠和咽部，以及女性宫颈淋球菌感染。 不能用于疗后判愈。 如果在多形核细胞外见到形态典型的革兰阴性双球菌，需做培养进行确认。,淋球菌涂片只做描述性报告，需注明“胞内/胞外”。,直接显微镜检查,淋球菌涂片只能确诊男性淋菌性尿道炎,特异性极高（100%）； 可发现无症状淋球菌感染患者； 可用于进一步做药敏试验； 可用于治疗后的判愈试验。, 对女性淋病、直肠、咽部淋球菌感染的确诊应做培养。,淋球菌培养,有极高的敏感性和特异性； 下列情况有明显优势： 慢性淋病 非典型感染，女性隐性感染 使用抗生素之后 某些直肠、咽拭子样本,淋球菌核酸检测,数据不包括疾控机构。,淋病实验室检测项目开展情况调查,生殖道沙眼衣原体感染,沙眼衣原体,原核细胞型微生物，比病毒大但比细菌小； 具有DNA和RNA两种遗传物质； 不能产生ATP，严格细胞内寄生； 有独特发育周期：原体（有感染性），始体/网状体（无感染性）；,女性 盆腔炎、输卵管炎、不孕、流产和死胎。 男性 附睾炎、前列腺炎和不育。 新生儿 结膜炎、肺炎。 约70%女性和50%男性为无症状感染,生殖道沙眼衣原体感染,直接涂片法 抗原检测法（酶免法、快速法、免疫荧光法） 细胞培养法 核酸检测法,生殖道沙眼衣原体感染的实验室诊断方法,直接涂片法,眼部感染：敏感性95 男性尿道：敏感性15 宫颈感染：敏感性41,主要用于新生儿眼结膜炎的诊断。,抗原检测法,敏感性普遍不高，易造成漏检。,细胞培养法,敏感性：5292 特异性: 99100 实验室条件和实验技术要求高、费时、敏感性低。,“金标准”方法 用于沙眼衣原体感染的确证、方法学评价和科研。,核酸检测法,敏感性：7597 特异性: 98100 实验室条件和技术要求高。,应用于临床沙眼衣原体感染检查和健康体检筛查， 被誉为“扩大的金标准”。,不同国家/地区性病报告病例构成比,2015年医疗机构性病诊疗服务及实验室管理现状现场调查,浙江省沙眼衣原体检测项目调查, 数据不包括疾控机构。 截止2016年1月全省评审通过的临床基因扩增检验实验室159家。,浙江省沙眼衣原体检测阳性率调查（2016年5月）,生殖器疱疹,生殖器疱疹主要由单纯疱疹病毒 2型（HSV-2）引起。 DNA病毒，细胞侵袭力强。 病毒较易潜伏在脊神经节内。 有两个血清型，一般HSV-1 主要感染腰以上部位，HSV-2 主要感染腰以下部位。,生殖器疱疹病毒,形态学检查：涂片检查、免疫荧光法； 细胞培养：传统的“金标准”； 血清学检测：ELISA法、免疫印迹法； 核酸检测：PCR法；,生殖器疱疹的实验室诊断方法,单纯疱疹病毒抗体检测,实验室最常用的方法； 可区分HSV1和HSV2感染； 可分别测定IgM和IgG抗体； 诊断疑似患者或非疱疹期感染者； 孕妇和新生儿筛查；,抗体产生的滞后现象影响现症感染的阳性率。,尖锐湿疣,尖锐湿疣由人乳头瘤病毒（HPV）感染引起。 目前发现的有120多个基因型 ，约30型与肛门或生殖道损伤有关。 70%的宫颈癌为HPV16/18感染，90%的生殖器疣为HPV6/11感染。,人乳头瘤病毒,人乳头瘤病毒,人乳头瘤病毒检测,分子生物学方法 HPV6/11、16/18 HPV分型全套,尖锐湿疣的辅助诊断 ； 尖锐湿疣复发的预测和随访； 宫颈癌及其癌前病变的观察 ； 男性生殖器肿瘤和肛门癌的观察；,人乳头瘤病毒检测,性病实验室检测,1,性病实验室质量管理,2,主要工作内容,工作任务布置 检测技术培训 室间质量评价（国家级性病质评、省级梅毒质评） 年中技术督导 年末工作考核 方法学研究和试点 淋球菌耐药监测,工作任务布置,性病实验室质量管理工作任务下发到各市疾控，工作任务主要包括对辖区医疗机构开展培训、工作督导及协助完成梅毒室间质评和省级培训的组织工作。 召开全省性病实验室质量管理 工作会议，在总结上一年度工 作同时布置本年度工作任务， 讨论并明确每一项工作的要求 和完成时间截点。,省级培训 主要针对全省梅毒室间质评的参评单位，采用全免费的形式有分期和名额限制，所有单位分成三期，每年一期，