中检所抗生素合作项目剖析.ppt

抗生素分析 2005版药典方法及改进,注射用阿莫西林克拉维酸钾 -symmetry,背景: 药典2005版难重现的方法 要求:1主成分峰与相邻杂质的分离,2阿莫西林闭环二聚体的分离 条件: Symmetry Shield RP18 4.6X250mm流动相A 为pH 6.0的0.01mol/L磷酸二氢钾溶液，流动相B为pH 6.0的0.01mol/L磷酸二氢钾溶液- 乙腈(20:80)，流速为每分钟1.0ml，线性梯度洗脱；检测波长为254nm。,注射用阿莫西林钠 - Symmetry Shield RP18,要求：阿莫西林峰和相邻杂质峰的分离度应大于1.5,流动相A为0.05mol/L磷酸盐缓冲液 （取0.05mol/L磷酸二氢钾溶液，用2mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至5.0）-乙腈（99：1）； 流动相B为0.05mol/L磷酸盐缓冲液（pH 5.0）-乙腈（80：20） 检测波长为254nm， 流速为每分钟1.0mlSymmetry Shield RP18 4.6*150mm 5um 时间（分钟） 流动相A（） 流动相B（） 0 92 8 25 0 100 40 0 100 41 92 8 55 92 8,RS=13.8,注射用阿莫西林钠 - Xbridge Shield RP18,流动相A为0.05mol/L磷酸盐缓冲液 （取0.05mol/L磷酸二氢钾溶液，用2mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至5.0）-乙腈（99：1）； 流动相B为0.05mol/L磷酸盐缓冲液（pH 5.0）-乙腈（80：20）； 检测波长为254nm， 流速为每分钟1.0ml Xbridge Shield RP18 4.6*150mm 5um 时间（分钟） 流动相A（） 流动相B（） 0 92 8 25 0 100 40 0 100 41 92 8 55 92 8,Rs=26, USP=1.26,吉他霉素的分析,吉他霉素又称柱晶白霉素（Leucomycin），含有多个组分，其基本结构由16元环大环内酯（macrolide）、碳霉素（carbomycin）和碳霉氨糖（L-arcanose）造成，各组分间的差别仅为16元环大环内酯环上3位的酰基和碳霉氨糖部分4位的酰基（R2）不同。酰基基团越大，极性越小；反之，则极性越大，-COCH3的极性大于-COCH2CH(CH3)2。,吉他霉素组分-XBridge Shield RP18,Rs(A5,A6)=3.15,以0.1mol/L醋酸铵溶液-甲醇-乙腈（40:55:5）为流动相； 柱温60； 检测波长为231nm 流速:1ml/min XBridge Shield RP18 4.6*250mm 5um,吉他霉素-Symmetry C18,NH4OAc:MeOH:ACN=30:65:5柱温60 检测波长为231nm 流速:1ml/min,色谱柱:Symmetry C18 4.6*150mm 5um,实验结果,麦白霉素,麦白霉素（Meleumycin）为麦迪霉素A1（Mydecamycin A1）及吉他霉素A6（Kitasamycin A6）（柱晶白霉素（Leucomycin）两个组分为主的混合物，含麦迪霉素A1不得低于35.0 麦迪霉素A1 R1=COCH2CH3 R2=H R3=COCH2CH3 吉他霉素A6： R1=H R2=COCH2CH3 R3=H 挑战:化合物偏碱性-色谱柱寿命和方法的稳定性,麦白霉素- XBridge C18,XBridge C18 150 4.6 mm，5m,XBridge C18 150 4.6 mm，5m 流动相: 0.2mol/L甲酸铵溶液（用三乙胺调节pH值7.3*）-乙腈（62:38） 检测波长:232nm ,柱温30； *调整到碱性条件方法会更简化,红霉素,1.红霉素分子由3部分组成：德糖胺克拉定糖和红霉素内脂,经分离得到红霉素A、B、C等组分。 2.红霉素抗菌活性最强，是主要的药用成分。红霉素C为主要杂质，毒性比红霉素A大2倍活性为红霉素的20。 挑战: 红霉素属碱性化合物，在该色谱条件下峰形拖尾现象严重。 红霉素及其杂质紫外吸收较弱,红霉素分析比较,色谱柱：Hypersil BDS 2504.6 mm，5m 流动相:以0.2 mol/L磷酸铵缓冲液 （取磷酸二氢铵1.15g，加水50ml溶解，用三乙胺调节pH值至6.5） 0.2mol/L四甲基氢氧化铵溶液（取25%四甲基氢氧化铵14.6ml，加水100ml，用磷酸调节pH值至6.5，再加水稀释至200ml） 乙腈水（5203045） 检测波长为215nm,红霉素-XBridge Shield RP18,色谱柱:XBridge Shield RP18 150(mm)4.6(mm)，5m 流动相：0.1mol/Ll磷酸氢二铵缓冲液 （取磷酸氢二铵13.21g，加水1000ml溶解， pH值为8.03）乙腈（65 : 35）， 柱温：35 C，检测波长：215nm,Usp =1.04,头孢克洛胶囊-药典规定方法,以0.78%磷酸二氢钠溶液(取磷酸二氢钠7.8g，加水溶解并稀释至1000ml，用磷酸调节pH值至4.0)为流动相A，以0.78%磷酸二氢钠溶液(pH4.0)-乙腈(5545)为流动相B，流速为每分钟1.0ml，检测波长为220nm，线性梯度洗脱： 时间（分钟） 流动相A（） 流动相B（） 0 95 5 30 75 25 45 0 100 50 0 100 51 95 5 61 95 5,要点:相关杂质的分离,头孢克洛胶囊-XbridgeC18,头孢克洛胶囊-UPLC方法,色谱柱:Acquity BEH C18 2.1*50mm 1.7um,注射用氨苄西林钠HPLC方法,柱温：25度 流动相： A=10mMH2PO4+0.06%HAC,pH=3.24 B=CAN 色谱柱:Waters XBr