测定VitA醋酸酯维生素A等波长差校正法图解.ppt

Analysis of Vitamines,第十章 维生素类 药物的分析,药物分析教研室,概述,一.定义： 维生素是维持人体正常代谢功能所必须的一类微量的生物活性物质，主要用于机体的能量转移和代谢调节。,二.特点： 1.维生素均以维生素原的形式存在于食物中。 2.机体自身不能合成或合成量不足，必须通过食物获得。 3.维生素的作用是参与机体代谢调节。 4.人体维生素的需要量很小，但一旦缺乏就会引发相应的维生素缺乏症。,三、分类,VA的分析,VC的分析,VE的分析,VB1的分析,VD的分析,Vitamins,Contents,第一节 VitA的分析,概述 维生素A包括有维生素A1(视黄醇)、去氢维生素A（维生素A2），和去水维生素A（维生素A3）。通常所说的维生素A指的是维生素A1,Retinol (Vit A 醇),VA 醋酸酯,VA 棕榈酸酯,一、结构分析与性质,USP BP Ch.p,VA及醋酸酯、棕榈酸酯混合物的食用油溶液,维生素A 醋酸酯、 丙酸酯和 棕榈酸酯 混合物的 植物油溶 液,维生素A 醋酸酯。 收载了维 生素A胶丸、AD胶丸 和AD滴剂,一、主要性质,紫外吸收 不稳定性 存在多种立体异构体,氧化反应,酸性条件下反应,二、鉴别试验,1.三氯化锑反应(Carr-Price反应),注意：反应需在无水无醇条件下进行。,水可使SbCl3水解成SbOCl。 乙醇可与正碳离子作用使正电荷消失。 溶剂：饱和无水三氯化锑的无醇氯仿溶液。,2.紫外分光光度法,Vit A,Vit A3,（1）维生素A：5个共轭双键，其无水乙醇液在326nm波长处有最大吸收。 （2）去水维生素A(A3)：6个共轭双键，其最大吸收波长向红移，在340nm-390nm波长间出现3个最大吸收峰。（348、367、389）,三、含量测定,一、,维生素A的异构体,氧化产物：环氧化物、醛、酸 中间体、副产物 裂解产物 原料为鲸鱼时，提取可能含有鲸醇。鲸醇为维生素A的二聚体，无生物活性。 不相关物质：抗氧剂、稀释用油等。,A,nm,Vit A sample,impurities,2.三点校正法的基本原理,杂质的吸收在310 340 nm波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小； 物质对光的吸收具有加和性。,3.波长的选择,第一法等波长差法,2,1,3,328,340,316,A1,A2,A3,A1,A2,A3,X1,X2,X3,A328(校正)=3.52(2A328-A316-A340),测定VitA醋酸酯,图1：维生素A等波长差校正法图解,（1）方法（适用于维生素A醋酸酯）,取样品适量，精密称定，加环己烷制成每ml含有9-15个单位的溶液，测定吸收峰的波长，看最大吸收波长是否在326-329nm之间，如不在这个范围，就选用第二法。 如果吸收峰的波长在326-329nm之间，就分别在规定的波长下进行测定，计算各波长下的吸光度与波长328nm处的吸光度的比值，将这个比值与规定值进行比较。,（2）数据处理,每个差值【-0.02，+0.02】，就不需要计算A328的校正值，直接用A328进行下一步计算。 每个差值+0.02，需要计算A328的校正值。,数据处理,第二法等吸收比法（6/7A法、皂化法）,310,325,334,A1,A2,A3,A2,A1,A3,F,L,D,M,E,VitA醇,维生素A样品,维生素A纯品,杂质,第二法等吸收比法（6/7A法、皂化法） VitA醇测定,维生素A醇几何校正法图解,310,325,334,A1,A2,A3,A2,A1,A3,F,L,D,M,E,维生素A样品,维生素A纯品,杂质,(二)三氯化锑比色法,max 618nm-620nm,1.原理：,2.方法： 取维生素A对照品，制成系列浓度的三氯甲烷溶液，加入一定量的三氯化锑氯仿溶液，在5-10s内，于620nm波长处测定吸光度绘制标准曲线。按同法测定供试品溶液的吸光度，根据标准曲线计算含量。,优点：简单、快递,3.讨论,第二节 维生素E的分析,概述,USP BP Ch.p,右旋或外消旋-生育酚及其醋酸酯和琥珀酸酯,外消旋- 生育酚醋 酸酯和- 生育酚,合成： 消旋体 天然：右 旋-生育 酚醋酸酯,一、结构分析与性质,1.结构,2.性质 水解性 氧化性 紫外吸收特性 溶解性,二、鉴别试验,1.硝酸反应,2.三氯化铁反应,方法：取本品约10mg,加乙醇制成氢氧化钾试液2ml，煮沸5min，放冷，加水4ml与乙醚10ml振摇，静置使分层，取乙醚液2ml,加2,2联吡啶的乙醇溶液数滴和三氯化铁的乙醇液数滴，应显血红色。,3.紫外分光光度法,4.薄层色谱法 薄层板：硅胶G板 展开剂：环己烷-乙醚（4:1） 显色剂：硫酸（105 ） VitE Rf=0.7 -生育酚和-生育醌的Rf值分别为0.5和0.9。,三、杂质 检查,1.生育酚 （1）原理,（2）方法： 取本品0.1g，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺试液1滴，用硫酸铈滴定液（0.01mol/l）滴定，消耗硫酸铈滴定液（0.01mol/l）不得过1.0ml。,第三节 维生素C,概述 维生素C又叫L-抗坏血酸，是一种水溶性维生素，能够治疗坏血病并且具有酸性，所以称作抗坏血酸。维生素C是最不稳定的一种维生素，由于它容易被氧化。微量的铜、铁离子可加快破坏的速度。,植物及绝大多数动物均可在自身体内合成维生素C，可是人因缺乏将L-古洛酸转变为维生素C的酶类，不能合成维生素C。维生素C在人体内的半衰期较长（大约16天），所以食用不含维生素C的食物34个月后才会出现坏血病。维生素C的主要功能是帮助人体完成氧化还原反应，提高人体灭菌能力和解毒能力。,一、结构分析与性质,1.结构,2.性质 （1）旋光性： 2个手型C原 子有4个光学 异构体。 比旋： +20.5-21.5度,（2）水解性,（3）酸性,（4）还原性,L-抗坏血酸,(有生物活性),L-二酮古洛糖酸,L-去氢抗坏血酸,无生物活性,（有生物活性）,（5）糖类的性质,（6）紫外吸收特性,二、鉴别试验,1.与AgNO3反应,2.与2,6-二氯靛酚反应,3.糖类的反应,4.紫外分光光度法 维生素C在0.01mol/l盐酸溶液中，在243nm波长处有唯一的最大吸收，利用此特征进行鉴别。（BP）,三、杂质检查,铁、铜离子的检查 由于微量铁盐和铜盐的存在会加速维生素C的氧化和分解，所以在中国药典质量标准中设立了铁和铜的检查项。利用的是原子吸收分光光度法。,四、含量测定,1.碘量法 （1）原理：维生素C在醋酸酸性条件下，可被碘定量氧化。,（2）实验方法：取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.05mol/L）滴定，至溶液显蓝色，在30秒内不褪。每1ml碘滴定液(0.05mol/L)相当于8.806mg的维生素C。,（3）讨论 新沸过的冷水：减少水中溶解的氧对测定的影响。 稀醋酸：酸性介质中维生素C受空气中氧的氧化速度减慢。 中国药典采用碘量法对维生素C原料、片剂、颗粒剂和注射剂进行含量测定。为了消除注射剂中抗氧剂亚硫酸氢钠对测定的影响，测定前需要加丙酮或甲醛。,2. 2,6二氯靛酚滴定法 （1）原理： 2,6二氯靛酚在酸性溶液中为显红色的氧化型物质，在碱性溶液中为显蓝色的氧化型物质，与维生素C反应后立即变为无色的酚亚胺。,（2）原理 样品,2,6二氯靛酚滴定液,偏磷酸-醋酸,终点：无色-玫瑰红色,（3）讨论 酸性环境：HPO3-HAC 稳定VitC； 快速滴定：2min内，防止其他还原物质干扰； 注意随行空白； 剩余比色测定； 该方法干扰多；滴定液不稳定，需要经常标定。,3.HPLC法,人血清中维生素C稳态血浆浓度分析 根据稳态血浆浓度评价高校学生人群维生素C营养状况。采用高效液相色谱法测定128名男性大学生在正常饮食条件下，以及其中14名受试者连续13d每天口服补充200mg维生素C后，血浆中维生素C的稳态浓度。发现正常饮食条件下受试者血浆中维生素C的稳态水平偏低，平均为（4.72.7）g/mL，其中血浆浓度低于正常营养水平下4 g/mL者68例，占总人数的3%；补充维生素C后，受试者稳态血浆浓度显著提高，达到（12.41.9）g/mL (P0.01)。说明目前高校学生从饮食中摄入维生素C量严重不足，待改善饮食结构或予以补充。,1、在三氯醋酸或盐酸存在下，经水解、脱羧、失水后，加入吡咯即产生蓝色产物的药物应是 A. 氯氮卓 B. 维生素A C. 普鲁卡因 D. 盐酸吗啡 E. 维生素C,2. 既具有酸性又具有还原性的药物是（ ） A.维生素A B.咖啡因 C.苯巴比妥 D.氯丙嗪 E.维生素C,3. 测定维生素C注射液的含量时，在操作过程中要加入丙酮，这是为了（ ） A.保持维生素C的稳定 B.增加维生素C的溶解度 C.使反应完全 D.加快反应速度 E.消除注射液中抗氧剂的干扰,4. 维生素A的鉴别实验为（ ） A.三氯化铁反应 B.硫酸锑反应 C.2，6-二氯靛酚反应 D.三氯化锑反应 E.间二硝基苯的碱性乙醇液反应 5. 紫外法（第一法）测定维生素A含量时，在哪些情况下需应用校正值计算含量 A.A328(校正)-A328/A328100%+3% B.A/A328值未超过规定比值的0.02 C. A328(校正)-A328/A328100% 3 D. max不在326329nm E. A328(校正)-A328/A328100%在-15%+3%,5、使用碘量法测定维C的含量,已知维生素C的分子量为176.13，每1ml碘滴定液(0.05mol/L) 相当于维生素C的量为 A. 17.61mg B. 8.806mg C. 176.1mg D. 88.06mg E. 1.761mg,B,多项选择,中国药典（2010年版）规定维生素A的测定采用 紫外分光光度法（三点校正法），此法又分为（ ） A.等波长差法 B.等吸收比法 C.6/7 A法 D.差示分光法 E.双波长法 维生素C的鉴别反应是（ ） A.与硝酸银反应 B.与2，6-二氯靛酚反应 C.与三氯化铁反应 D.与茚三酮反应 E.与四氮唑盐反应,3、维C的鉴别反应，常采用的试剂有 A. 硝酸银 B. 碘化铋钾 C. 乙酰丙酮 D. 三氯醋酸和吡咯,4、中国药典（2005年版）规定维生素A的测定采用紫外分光光度法 （三点校正法），此法又分为 A等波长差法 B等吸收度法 C6/7 A法 D差示分光法 E双波长法,5、维生素E的鉴别试验有 A硫色素反应 B硝酸氧化呈色反应 C硫酸-乙醇呈色反应 D碱性水解后加三氯化铁乙醇 液与2,2-联吡啶乙醇液呈色反应 EMarquis反应,6、下面哪些描述适用于维生素A A. 分子具有长二烯醇侧链，易被氧化 B. 具有较长的全反式共轭多烯结构 C.含酯键，经水解后产生苯并二氢吡 喃衍生物，易被氧化 D.与三氯化锑的无醇氯仿液中呈不稳 定兰色，很快转变为紫红色,维生素A与 反应即显蓝色，渐变成紫红色；反应需在 条件下进行。,三氯化锑,无水,维生素E在酸性或碱性溶液中加热可水解生成游离 ，当有氧或其他氧化剂存在时，则进一步被氧化成醌型化合物，尤其在碱性下更易发生。,生育酚,维生素C是 元弱酸，具有强 性，易被氧化剂氧化，常用作其它制剂的 剂。,一,还原,抗氧,维生素E中游离生育酚的检查时规定消耗硫酸铈滴定液（0.01mol/L）不得过1.0ml，现硫酸铈滴定液的实际浓度为0.01053mol/L，应不得超过多少ml？ A. 0.95 B. 0.97 C. 0.99 D. 0