JJF1529-2015细菌内毒素分析仪校准规范

中华人民共和国国家计量技术规范J J F1 5 2 92 0 1 5细细菌内毒素分析仪校准规范C a l i b r a t i o nS p e c i f i c a t i o nf o rB a c t e r i a lE n d o t o x i nA n a l y z e r s 2 0 1 5 - 0 6 - 1 5发布2 0 1 5 - 0 9 - 1 5实施国 家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 局 发 布市场监管总局市场监管总局细细菌内毒素分析仪校准规范C a l i b r a t i o nS p e c i f i c a t i o nf o rB a c t e r i a lE n d o t o x i nA n a l yz e r sJ J F1 5 2 92 0 1 5 归 口 单 位:全国生物计量技术委员会 主要起草单位:中国计量科学研究院 参加起草单位:河南省计量科学研究院广东省计量科学研究院天津市天大天发科技有限公司 本规范委托全国生物计量技术委员会负责解释J J F1 5 2 92 0 1 5市场监管总局市场监管总局本规范主要起草人: 傅博强 ( 中国计量科学研究院) 丁峰元 ( 河南省计量科学研究院) 赵海山 ( 天津市天大天发科技有限公司) 参加起草人:唐治玉 ( 中国计量科学研究院)阳金勇 ( 广东省计量科学研究院)保志娟 ( 广东省计量科学研究院)J J F1 5 2 92 0 1 5市场监管总局市场监管总局目目 录引言()1 范围(1)2 引用文件(1)3 术语和计量单位(1)3 . 1 细菌内毒素单位(1)3 . 2 反应时间一致性(1)4 概述(1)5 计量特性(1)5 . 1 透光度一致性(1)5 . 2 零点漂移(1)5 . 3 温度示值误差(1)5 . 4 温度波动度(1)5 . 5 孔间温度差异(1)5 . 6 反应时间一致性(2)6 校准条件(2)6 . 1 环境条件(2)6 . 2 测量标准及其他设备(2)7 校准项目和校准方法(2)7 . 1 透光度一致性(2)7 . 2 零点漂移(2)7 . 3 温度示值误差和温度波动度(3)7 . 4 孔间温度差异(3)7 . 5 反应时间一致性(3)8 校准结果表达(4)9 复校时间间隔(4)附录A 标准物质溶液及鲎试剂溶液的配制(5)附录B 温度示值误差测量结果的不确定度评定示例(6)附录C 校准原始记录格式(7)附录D 校准证书 ( 内页)格式(9)J J F1 5 2 92 0 1 5市场监管总局市场监管总局引引 言本规范的制定主要参考了 中华人民共和国药典 。本规范为首次发布。J J F1 5 2 92 0 1 5市场监管总局市场监管总局细菌内毒素分析仪校准规范1 范围本规范适用于细菌内毒素分析仪 ( 动态浊度法)的校准。2 引用文件本规范引用了下列文件: 中华人民共和国药典凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本规范;凡是不注日期的引用文件,其最新版本 ( 包括所有的修改单)适用于本规范。3 术语和计量单位3 . 1 细菌内毒素单位 E Ue n d o t o x i nu n i t细菌内毒素的活性单位,1E U与1个内毒素国际单位 (I U)相当。 中华人民共和国药典3 . 2 反应时间一致性 R T Cr e a c t i o nt i m ec o n s i s t e n c e仪器检测不同通道中鲎试剂与细菌内毒素标准物质反应后光密度达到某一预先设定值所需要反应时间的一致程度,用相对标准偏差表示。4 概述细菌内毒素分析仪 ( 以下简称仪器)是通过动态浊度法检测鲎试剂与细菌内毒素反应过程中的光密度 ( 浊度)变化来测定细菌内毒素含量的装置。反应时间或浊度增加速度与细菌内毒素的浓度存在一定的关系,绘制内毒素工作标准溶液的反应时间或浊度增加速度-内毒素浓度的单对数或双对数曲线,可以实现动态浊度法对样品中的细菌内毒素浓度的定量。仪器主要由光源、恒温加热器、样品孔、检测器、显示与存储系统 ( 含控制软件)等组成。光信号通过光电传感器转化为电信号,再通过电子电路转化为数字信号,最后控制软件计算达到某一预先设定的光密度所需要的反应时间或浊度增加速度。仪器据检测波长分类,可分为单波长、双波长。5 计量特性5 . 1 透光度一致性5 . 2 零点漂移5 . 3 温度示值误差5 . 4 温度波动度5 . 5 孔间温度差异1J J F1 5 2 92 0 1 5市场监管总局市场监管总局5 . 6 反应时间一致性6 校准条件6 . 1 环境条件环境温度:(1 03 0)。相对湿度:8 0%。6 . 2 测量标准及其他设备6 . 2 . 1 数字温度计:采用热电偶测温探头,探头长度不超过2 0mm,最大允许误差为0 . 2,测量范围满足 (2 0 . 05 0 . 0)。6 . 2 . 2 细菌内毒素分析仪校准用国家有证标准物质,2 0E U/支,相对扩展不确定度5 0%(k=2) 。6 . 2 . 3 定量鲎试剂 ( 检测限0 . 0 3E U/m L) 。6 . 2 . 4 细菌内毒素检查用水。6 . 2 . 5 移液器:(2 02 0 0)L,(1 0 010 0 0)L各1支,经检定合格。7 校准项目和校准方法7 . 1 透光度一致性将装有0 . 4m L内毒素检查用水的反应管插入仪器的所有检测孔中,数值显示稳定后,读取所有通道的透光度,计算所有通道的透光度一致性的相对标准偏差。测定仪器所有波长的透光度一致性。按照式 (1)计算透光度一致性:R S Dt=1tni=1(ti-t)2n-11 0 0%(1) 式中:R S Dt 透光度一致性 ( 相对标准偏差) ,%;ti 第i个孔的透光度值;t 所有孔透光度测量值的算术平均值;n 测试的样品孔数,个。7 . 2 零点漂移装有0 . 4m L内毒素检查用水的反应管放于任一孔,封口膜封口,测定仪器的基线6 0m i n。待测定结束后,打印反应曲线,计算基线光密度的零点漂移。按照式 (2)计算零点漂移值:ODd=ODm a x-OD0(2) 式中:O Dd 零点漂移值;O Dm a x 光密度示值的最大值;2J J F1 5 2 92 0 1 5市场监管总局市场监管总局O D0 光密度初始值 ( 时间0点的光密度示值) 。7 . 3 温度示值误差和温度波动度在测定仪器零点漂移的同时,待仪器进入3 7恒温状态,选取中间孔,插入装有0 . 4m L内毒素检查用水的反应管,将数字温度计插入反应管中,稳定5m i n后读取数字温度计示值,每隔5m i n记录1次,持续记录6 0m i n,数字温度计测量平均值Tsi即为温度标准值。按式 (3)计算温度示值误差:T=Ti-Tsi(3) 式中:T 温度示值误差,;Ti 仪器的温度示值,;Tsi 数字温度计测得的温度标准值的算术平均值,。温度波动度用6 0 m i n内温度测量标准值的最大值与最小值之差ST表示,按式 (4) 计算:ST=Tm a x-Tm i n(4) 式中:ST 温度波动度,;Tm a x 某样品孔6 0m i n内的温度测量标准值的最大值,;Tm i n 某样品孔6 0m i n内的温度测量标准值的最小值,。7 . 4 孔间温度差异在测定样品孔温度波动度的同时,根据仪器加热模块的组成,选取具有代表性的位置 ( 例如检测盘的中心孔和四周任意选取四个孔位) ,将数字温度计探头插入选定位置装有0 . 4m L内毒素检查用水的反应管中,待稳定后读取数字温度计测量结果Tsi。孔间温度差异Rsi按式 (5)计算:Rsi=Tsim a x-Tsim i n(5) 式中:Rsi 孔间温度差异,;Tsim a x 所选取的样品孔中的温度标准值的最大值,;Tsim i n 所选取的样品孔中的温度标准值的最小值,。7 . 5 反应时间一致性将6 . 2 . 2中的2 0E U/支的细菌内毒素分析仪校准用国家有证标准物质溶解稀释,按照附录A制备成0 . 2 5E U/m L的细菌内毒素标准物质溶液,取1 0支作为反应时间一致性的测试溶液。选取具有代表性的位置 ( 例如检测盘的中心孔和四周任意选取9个孔位) ,将以上细菌内毒素溶液与预先加入到反应管中的一定量的定量鲎试剂反应,每加完一瓶立即将其推至样品孔底 ( 反应结束前不能再动反应管) 。采用动态浊度法,在(3 7 . 00 . 5)测定,软件记录光密度达到0 . 0 2的反应时间。按照仪器测定要求加入所需体积的鲎试剂溶液 ( 一般0 . 1m L)和内毒素标准物质溶液 ( 一般0 . 1m L或0 . 2m L) 。3J J F1 5 2 92 0 1 5市场监管总局市场监管总局按式 (6)计算反应时间一致性:R S DR T=1 R T ni=1(R Ti-R T)2n-11 0 0%(6) 式中:R S DR T 反应时间一致性 ( 相对标准偏差) ;R Ti 第i个样品孔的反应时间,s;R T 所有样品孔反应时间测量值的算术平均值,s;n 测试的样品孔数,个。8 校准结果表达经校准的细菌内毒素分析仪,出具校准证书,校准证书应符合J J F1 0 7 12 0 1 0中5 . 1 2的要求,校准证书内容见附录D。9 复校时间间隔送校单位可根据实际使用情况决定复校时间间隔,复校时间间隔建议不超过一年。4J J F1 5 2 92 0 1 5市场监管总局市场监管总局附录A标准物质溶液及鲎试剂溶液的配制A . 1 试剂与材料A . 1 . 1 细菌内毒素分析仪校准用国家有证标准物质,2 0E U/支。A . 1 . 2 定量鲎试剂 ( 检测限0 . 0 3E U/m L) 。A . 1 . 3 细菌内毒素检查用水。A . 1 . 4 无内毒素安瓿瓶,5m L/支。A . 1 . 5 无内毒素安瓿瓶,2m L/支。A . 1 . 6 一次性无内毒素吸头,10 0 0L。A . 1 . 7 一次性无内毒素吸头,2 0 0L。A . 2 仪器A . 2 . 1 移液器:经检定合格,(2 02 0 0)L,(1 0 010 0 0)L。A . 2 . 2 涡旋混合器。A . 3 细菌内毒素标准溶液的配制取2 0E U/支的细菌内毒素分析仪校准用国家有证标准物质一支,轻弹瓶壁,使粉末落入瓶底,使反应管颈处的开口小气泡朝上,用力掰断,启开过程中应防止玻璃屑落入瓶内。加入1 . 0m L细菌内毒素检查用水溶解,涡旋震荡1 5m i n,得2 0E U/m L溶液;取第步溶液0 . 2m L,加入到1 . 8m L细菌内毒素检查用水中,在涡旋混合器上混合3 0s,得2E U/m L溶液;取第步溶液0 . 3m L,加入到2 . 1m L细菌内毒素检查用水中,在涡旋混合器上混合3 0s,得0 . 2 5E U/m L溶液。4保存备用,有效期1周。A . 4 鲎试剂溶液的配制取定量鲎试剂2支 ( 检测限0 . 0 3E U/m L) ,轻弹瓶壁,使粉末落入瓶底,使反应管颈处的开口小气泡朝上,用力掰断,启开过程中应防止玻璃屑落入瓶内。每支加入0 . 6m L细菌内毒素检查用水溶解,轻轻转动瓶壁,使内容物充分溶解,不要太剧烈,避免产生气泡,充分溶解后将鲎试剂溶液混和在一起,然后分装到2m L无细菌内毒素的空反应管中,分装1 0管备用。不立即使用时用封口膜封住瓶口。已复溶的鲎试剂在间歇使用过程中最好将其在-2 0以下冻存,仅可在7天内使用,鲎试剂只能冻融一次。5J J F1 5 2 92 0 1 5市场监管总局市场监管总局附录B温度示值误差测量结果的不确定度评定示例B . 1 测量模型T=Ti-Tsi 式中:T 温度示值误差,;Ti 仪器的温度设定值,;Tsi 数字温度计测量平均值,。B . 2 不确定度来源(1)测量重复性引入的不确定度。(2)数字温度计引入的不确定度。B . 3 不确定度分量的计算B . 3 . 1 重复性引入的不确定度u1(Tsi)表B . 1 5个测试孔位温度测量结果测试孔编号12345标准偏差Tsi/3 7 . 13 7 . 13 7 . 03 7 . 03 7 . 20 . 0 8 4 计算5个测试孔位温度测量结果的标准偏差s,根据表B . 1测量结果,u1(Tsi)=s/5=0 . 0 3 7B . 3 . 2 数字温度计引入的不确定度由数字温度计校准证书得到,u2(Ts)=uc/k=0 . 0 5 0B . 4 标准不确定度分量一览表温度示值误差测量结果的标准不确定度分量见表B . 2。表B . 2 标准不确定度分量一览表标准不确定度分量 (ui)来源标准不确定度/u1(Tsi)重复性0 . 0 3 7u2(Ts)数字温度计0 . 0 5 0B . 5 合成不确定度u(T)=u12(Tsi)+u22(Ts)=0 . 0 6 2B . 6 扩展不确定度取包含因子k=2,则仪器温度示值误差的扩展不确定度为:U=2u(T)=0 . 26J J F1 5 2 92 0 1 5市场监管总局市场监管总局附录C校准原始记录格式( 推荐性表格)送校单位: