同步荧光光谱分析法的应用及新进展.ppt

同步荧光光谱分析法的应用,2013级分析化学 路以洋,1 简介 2 实际应用 3 目前工作,同步荧光分析法,常用的荧光测定方法是确定激发（或发射）波长在一定波长范围内扫描发射（或激发）光谱。同步荧光扫描技术与常用的荧光测定方法最大的区别是同时扫描激发和发射两个单色器波长由此测得的荧光强度信号与对应的激发波长(或发射波长)构成光谱图， 称为同步荧光光谱。 习惯上所说的同步荧光是恒波长同步荧光,恒波长同步荧光法是在扫描过程中使激发波长和发射波长彼此间保持固定的波长间隔（）。 一般值选择stocks位移值。 具有简化谱图、提高选择性、灵敏度高、减少光散射干扰少等特点。 较多用于多组分物质的测定或者一种组分在常规测试条件下受到较大干扰时的测定。,应用 环境分析,酚是环保检测项目之一，通过同步荧光光谱筛选最佳波长差，消除干扰，对酚经行定量测定，并用于大气中酚的测定。 用同步荧光分析法测定工业及生活废水中微量十二烷基苯磺酸钠2。,二 食品检测,如测定奶粉中VB1 和VB6的含量3，VB1为非荧光物质，通常测硫胺素氧化物的荧光强度， 在VB1、VB6共存时，光谱部分重叠，因此选择合适的波长差同步扫描，方法简单快速，效果良好。,三 临床医学,选择波长差为60nm 测量了人体子宫、子宫颈、卵巢正常组织、良性肿瘤和恶性肿瘤的同步荧光光谱， 为癌症的早期诊断提供了更有效、快速、准确的新手段。,四 蛋白质,蛋白质的内源荧光 蛋白质中含有的色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸是所有天然氨基酸中仅有的发荧光基团的氨基酸，这是蛋白质内源荧光的来源。 用同步荧光光谱法可以分别获得了色氨酸和酪氨酸的特征光谱。 =15nm 酪氨酸残基光谱特征 =60nm 色氨酸残基光谱特征,同步荧光光谱用于蛋白质构象的变化。色氨酸残基的最大发射波长与其所处环境的极性有关。 对于色氨酸残基：红移环境的疏水性降低肽链的伸展程度增加。 蓝移环境的疏水性增强大分子趋向于折叠态。,同步荧光分析法在研究蛋白质与物质相互作用主要在两个方面： 1.蛋白质分子的内源荧光被猝灭或敏化程度； 2.主要利用色氨酸最大发射波长的位移来判断蛋白质的构象变化。,Cu()对BSA同步荧光的影响5,现象：随着Cu()浓度的增大，酪氨酸残基特征特征荧光光谱峰和色氨酸光谱峰均略有红移。 结论：Cu()的引入使得BSA的构象发生了改变，使得色氨酸和酪氨酸的残基所处的微环境疏水性略有减小，表明整个BSA大分子肽链伸展。使-螺旋的含量减少。,PM-19对BSA同步荧光光谱的影响,现象：酪氨酸和色氨酸残基荧光同时被猝灭，相比之下，色氨酸残基的荧光降低比酪氨酸残基更显著。最大发射波长几乎没有改变。 结论：PM-19与BSA发生作用的结合位点更接近色氨酸残基，但是没有改变BSA的疏水腔的疏水环境，没有改变蛋白质的构象。,目前研究工作进展,钥孔戚血蓝蛋白的同步荧光光谱研,荧光光谱,固定1.0*10-6mol/L KLH为样品，做荧光激发和发射光谱。,=60nm,=15nm,初步实验汞对KLH同步荧光猝灭,固定KLH浓度在1.0*10-6mol/L，加入不同浓度的Hg2+与KLH反应。 设定=60nm值，在200450nm范围扫描同步荧光光谱。,现象：随着Hg2+ 浓度的增加，色氨酸和酪氨酸的同步荧光强度是下降的。其中色氨酸的下降更显著。二者的最大发射峰位没有太大的变化。 结论： Hg2+ 对KLH的荧光有猝灭作用，说明两者有相互作用。并且Hg2+ 与KLH的结合位点更接近色氨酸残基，但没有改变KLH的构象。,=60nm,=15nm,进一步工作,1.继续前一步工作，验证所得的初步结果是否正确，找到合适的KLH浓度和Hg