槭叶草中齐墩果烷型27羧酸酸型三萜的抗菌活性研究.ppt

槭叶草中齐墩果烷型-27-羧酸酸型三萜的抗菌活性研究,目 录,前 言,槭叶草（Aceriphyllum rossii Engler） 功效：养心安神 主治：补心阳益心血,甲醇提取物,乙酸乙酯萃取三次,浓缩乙酸乙酯,TLC分离,得到三种色谱带,CHCl3：CH3OH=30:1,正己烷：乙酸乙酯：乙醇=10:2:2,CHCl3：CH3OH=15:1,2,3、4,1,提取分离部分,化合物1,甲醇,重氮甲烷,乙醚 9h,5,2,1，R1=H, -OH,R2=CH2OH,R3=COOH,3，R1=H, -OH,R2=CH3,R3=COOH,4，R1=H, -OH,R2=CH3,R3=COOH,5，R1=H, -OH,R2=CH2OH,R3=COOCH3,五种化合物分别为 1：槭叶草酸A 2：3-酮基-12-齐墩果烯-27-甲酸 3：3-羟基-12-齐墩果烯-27-甲酸 4：3-羟基-12-齐墩果烯-27-甲酸 5：甲基化的槭叶草酸A,高效液相色谱法 波长：210nm 洗脱剂：CH3OH:H2O=45:55 流速：0.4ml min 保留时间：12.2,18.9,15.6,13.7min,确定了化合物纯度大于99.9%,药 理 部 分,一、材料 革兰氏阴性菌：大肠杆菌、产气克雷伯菌、鼠伤寒沙门氏菌 革兰氏阳性菌：金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、醋酸钙不动杆菌、藤黄微球菌 真菌：白色念球菌 耐药菌：MRSA（3167、3506）、QRSA（3505、3519）,阳性对照药：万古霉素、苯唑西林、诺氟沙星 培养基：MHB、DMEM、胎牛血清、以及培养用的青霉素、链霉素 化学物质：甲醇、乙酸乙酯、氯仿、正己烷、二甲基亚砜、以及3-（4,5-二甲基-2-噻唑基）-2,5-二苯基四氮唑溴化物 96孔培养板,二、抗菌活性测试 将一定浓度的被测化合物和细菌分别接种到96孔培养板中 阳性对照药采用万古霉素、苯唑西林和诺氟沙星 37下培养，在650nm处分别测量0h和24h的吸光度 根据吸光度计算抑菌率,三、细胞毒性测试 在96孔培养板中培养需要的HepG2细胞 37 ，5%CO2的培养箱中培养，采用MTT法修正，加入不同浓度的被测化合物的胎牛血清，以及MTT并且总量保持10L 培养3h，将产生的晶体溶于100L的DMSO中，振荡5min 在570nm处测量吸光度，根据吸光度计算IC50值,四、作用时间研究 37 培养菌液15h，稀释菌液 加入1倍，2倍，4倍与最小抑菌浓度的被测物平分各个培养基 在0h、2h、4h、6h、和24h培养，连续稀释10倍 与空白组对照 测量，计算菌落,结果与讨论,整株植物、根部、地上部分甲醇提取物抗金黄色葡萄球菌的活性,化合物1-5的抗菌活性和细胞毒性结果,化合物1,2的抗菌活性与阳性对照的测试结果,化合物1对抗金黄色葡萄球菌的作用时间曲线,结 论,对全株植物、根部、地上部分分别做了抗菌活性测试，发现根部具有强大的抗菌活性，最小抑菌浓度为8gml 从根部提取的到的化合物1-4以及将化合物甲基化的5都进行了质谱、核磁共振、以及高效液相的鉴定,化合物1,2的最小抑菌浓度为4gml并且对MRSA及QRSA表现出相似的抗菌活性 化合物3,4表现出较弱的抗菌活性，而化合物5几乎没有任何抗菌活性 从结构中得知27-羧基和23-羟基是化合物1具有抗菌活性的必需官能团,化合物1,2在最小抑菌浓度的时候没有影响人类肝细胞的生存，但是在高浓度的时候依然具有细胞毒性 化合物1-5的抗菌活性与细胞毒性的不一致表现说明抗菌机理与细胞毒性机理可能不同,