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文档简介
DNA复制(细胞内复制)转 录翻 译PCR技术(体外DNA复制技术)概念DNA复制是指以亲代DNA双链为模板合成两个相同的子代DNA以DNA的一条链为模板按照碱基互补配对原则合成RNA的过程以mRNA为模板,以tRNA为运载工具合成具有一定氨基酸顺序的蛋白质的过程K|S|5UPCR技术是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。场所主要细胞核(线粒体、叶绿体)主要细胞核(线粒体、叶绿体)K|S|5U细胞质中的核糖体体外原料4种游离脱氧核苷酸4种游离核糖核苷酸K|S|5U20种游离氨基酸K|S|5U4种游离脱氧核苷酸模板DNA分子中的两条链DNA中的一条链K|S|5UmRNA K|S|5U目的基因(或目的基因的两条链)酶解旋酶、DNA聚合酶(等解旋酶、RNA聚合酶等多种酶耐热DNA聚合酶(Taq酶)能量ATPATPATP不需要ATP,能量来自外界加热过程1、解旋:在解旋酶作用下,利用ATP释放的能量解开双螺旋;2、在DNA聚合酶的作用下,按照碱基互补配对原则,把游离的脱氧核苷酸连接到模板链上,并使脱氧核苷酸之间过磷酸二酯键连接;3、沿着模板链不断延伸,最终形成两个一模一样的DNA分子。1、解旋:在解旋酶作用下,利用ATP释放的能量解开双螺旋;2、以解开的一条DNA链为模板,按碱基互补配对原则,游离的核糖核苷酸与脱氧核苷酸配对,3、核糖核苷酸间通过磷酸二酯键连接成RNA(mRNA,tRNA,rRNA)mRNA从核孔进入细胞质,与核糖体结合,从起始密码子(AUG)开始翻译。tRNA一端携带氨基酸进入核糖体另一端的反密码子与mRNA上的密码子配对,两氨基酸间形成肽键。核糖体继续沿mRNA 移动,每次移动一个密码子,至终止密码结束,肽链形成1、变性:即加热至高温使得目的基因的双链打开(解旋,但不需要解旋酶);2、复性:降温使得解开的两条链分别与引物结合;3、延伸:在Taq酶的作用下,按碱基互补配对原则,脱氧核苷酸之间过磷酸二酯键连接成新链。重复上述三步,就能获得大量的目的基因。特点1、边解旋边复制;2、半保留复制边解旋边转录一条mRNA可与多个核糖体结合翻译成多条相同的多肽链1、半保留复制;2、快速大量复制产物形成两个完整的DNA分子单链RNA蛋白质(多肽链)短时间内形成大量的目的基因DNA复制、转录、翻译以及PCR技术比较二、在基因过程的各种检测和鉴定:1、标记基因:为了检测目的基因(目的基因表达载体)是否导入受体细胞; 2、用DNA分子杂交法:检测目的基因是否插到染色体DNA上(工具:基因探针)3、用DNA分子杂交法:检测目的基因是否转录出mRN
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