《实验九大肠杆菌》PPT课件.ppt

实验九 大肠杆菌,大肠杆菌：是引起家畜、家禽大肠杆菌病的病原。可导致家畜、家禽死亡；大肠杆菌是条件致病菌。,心包炎、肝周炎,实验目的： 1、学习大肠杆菌与沙门氏菌常规微生物学诊断方法。 2、了解大肠杆菌与沙门氏菌的形态与染色特性。 3、熟悉大肠杆菌与沙门氏菌的主要培养特性。,大肠杆菌与沙门氏菌的常规 实验室诊断可按阶段划分,阶段划分（1 4阶段）,第一阶段：增菌、直接分离培养 第二阶段：纯培养、识别菌落、三糖铁接种。 第三阶段：生化鉴定（IMViC、H2S、硝酸盐还原、运动力、五种糖） 第四阶段：血清学鉴定。,病 料,增菌（亚硒酸盐汤等） 37、18-24h,直 接 划 线 分 离（麦 康 凯 、 SS 琼 脂和EMB培养基）,37、18-24h,选可疑菌落，移植到以下培养基,营养琼脂斜面,三糖铁琼脂,37、18-24h,纯种检验、革兰氏染色镜检,生化反应,血清学鉴定,沙门氏菌、大肠杆菌的一般诊断程序图,病料的采集 包装、运送,内脏、淋巴结,小家畜、家禽或胎儿,液态材料,病毒材料 50%甘油磷酸盐缓冲液,【动物尸体剖解的注意事项】,怀疑死于炭疽的动物严禁尸体剖解。 有针对性的采集病料。 作好个人的防护和环境消毒工作。 盛装病料的容器要求无菌。 无菌操作。 病料必须注明名称。 必须低温保存,及早送检。 动物尸体必须妥善处理(深埋、焚烧)。,SS平板分离肠道病原菌的强选择培养基,成分和作用： 1、基础培养基：提供氮源和碳源 2、胆盐、枸橼酸钠、煌绿：可抑制肠道非致病菌的生长，而对肠道致病菌抑制作用弱。 3、乳糖，中性红（pH6.8-8.0，红橙黄） ：致病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨产生碱性物质菌落淡黄色；大肠杆菌分解乳糖产酸，菌落呈红色,麦康凯培养基具中等强度选择性，抑菌力 略强，少数阴性菌不生长。 1、利用胆盐、龙胆紫来抑制革兰阳性细菌的生 长，而对伤寒等沙门菌有促进生长的作用 2、利用乳糖发酵，中性红的颜色可把分解乳和 不分解乳糖的细菌区别开 沙门菌及志贺菌呈无色菌落， 大肠埃希菌呈桃红色菌落,EMB（Eosin Methyl Blue)平板分离肠道病原菌的弱选择培养基,病原菌： 透明，无色 非致病菌：紫黑色,解剖病死鸭,本次实验操作步骤：,心脏、肝脏等脏器的分离接种 （SS平板、三糖铁琼脂）,组织触片（血片、肝片等） 、吉姆萨染色、镜检,37、18-24h,观察、记录结果,出具实验报告,姬姆萨染色方法： 1、触片、干燥。用甲醇固定3-5分钟。 2、将固定的触片浸于盛有稀释液的染色缸中（姬姆萨原液10滴加于10毫升中性或弱碱性蒸馏水中即可），染色30-60分钟，或过夜。 3、水洗、干燥。 4、镜检：细菌呈蓝黑色，组织、细胞等呈其他色。,动物尸体剖解顺序,观 察 体 表 皮肤消毒 切开颈腹部皮肤 剥 皮 观 察皮下病 变 开 腹 腔 观察内脏病变 开 胸 腔 观 察 病 变 开 胃 肠 观 察病 变,肠道菌实验室诊断包含的微生物 实验技术：,无菌操作技术 显微镜使用技术 培养基制备技术 细菌分离纯化技术 细菌染色技术 微生物的消毒灭菌技术 动物实验技术,作业： 1、鸭大肠杆菌病的实验室诊断意义、步骤。 2、绘出油镜下组织触片的大肠杆菌形态图。,思