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免疫学实验 （ 供临床医学本科用）,基础医学院免疫学教研室 李念虹,Email: lnh666“ ,教材,高等医学院校基础医学实验教学系列教材 免疫学实验 科学出版社，2008年6月 主编 朱道银，吴玉章,临床医学本科实验内容及安排,非临床医学本科实验内容及安排,一、免疫学实验注意事项 1.学生进实验室必须穿白大褂，不得穿拖鞋。 2.学生在实验过程中应遵守实验操作规程和实验室秩序，按要求完成实验。 3.学生应爱护实验设备、器材等公物，厉行节约；若损坏实验用品，要及时报告。 4.需回收的玻璃器材如载玻片等，放于指定陶瓷缸内；废弃的使用品仍-入垃圾桶内。 5.实验结束，清理好桌面，由班干部安排值日学生做清洁；做完清洁，关好水电、门窗，由带教老师检查认可后，值日学生方可离去。,二、免疫实验课目的 1.验证所学理论知识。 2.训练基本操作技能，培养独立工作能力。 三、要求 1.严肃认真。 2.多想、多看、多做。 3.当堂完成实验报告。,四、Ag-Ab反应的相关知识 血清学反应即体外进行的Ag-Ab反应。 由于机体绝大部分抗体存在于血清中，故 称之为血清学反应。 1.Ag-Ab反应的基本原则 （1）用已知抗体检测未知抗原； （2）用已知抗原检测未知抗体。,2. Ag-Ab反应的特点： （1）特异性 （2）可逆性 （3）可见性,3.影响Ag-Ab反应的因素 （1）电解质：0.85% NaCl （2）酸碱度：pH68 （3）温度：37,4.Ag-Ab反应类型：,（1）凝集反应 （2）沉淀反应 （3）补体结合反应 （4）中和反应 （5）免疫标记技术,4大经典免疫实验,实验一 凝集反应,一、目的要求 1.掌握血清学反应概念、特点。 2.熟悉凝集反应的概念、常用凝集反应的实验方法及结果判定。 3.了解凝集反应的原理、类型及其用途。,二、实验内容 1.直接凝集试验(玻片法) ABO血型鉴定(每人做) 2.间接凝集试验 类风湿因子检测(小组做),三、凝集反应相关知识 （一）概念 颗粒性抗原(细菌、细胞等)与相应抗体结合，在一定条件下，出现肉眼可见的凝集物，称为凝集反应。,颗粒性Ag 又称凝集原 相应Ab 又称凝集素, 颗粒性抗原： 光镜下可见，肉眼观呈浑浊悬液，如细菌、RBC等。, 可溶性抗原： 光镜下无形态，肉眼观呈澄清透明，如蛋白质、多糖抗原等。,（二）凝集反应类型,1.直接凝集反应,2.间接凝集反应,1.直接凝集 玻片法 已知Ab,测Ag，为定性实验； 用途：鉴定菌种、菌种分型、血型鉴定。 试管法（如肥达氏反应） 已知Ag,测Ab，为半定量实验； 用途：辅助诊断肠热症等。,2.间接凝集反应,RBC间接血凝试验 用途：某些病毒感染和变态反应患者血清中的相抗体量。,乳胶间接乳胶凝集试验 用途：检测类风湿因子等。,间接凝集抑制试验,妊娠试验,（已知）,（已知）,（已知）,（已知）,反向间接凝集试验,某些传染病和原发性肝癌的早期诊断。,四、实验操作内容 （一）玻片法 ABO血型鉴定（每人做） 用已知血型Ab,测未知血型Ag；为定性实验。 ABO血型系统 血型 红细胞表面的血型Ag 血清中的血型Ab A型 A 抗B B型 B 抗A AB型 A、B O型 抗A、抗B,1.材料 已知Ab：标准血清 抗A、抗B 待测Ag：红细胞血型抗原,2.操作步骤,(1)无菌操作采血(无名指尖)于NS试管形成约 25%红细胞(RBC)悬液； (2)准备1张载波片； (3)加血清(Ab)各1滴； (4)加RBC各1滴； (5)摇晃混匀； (6)结果判断(10-15分钟后)。,3.结果判断 凝集者：出现红色颗粒状或块状凝集物； 不凝集者：呈红色均匀混浊。 (1)若抗A凝集，抗B不凝集 A 型血 (2)若抗A不凝集，抗B凝集 B型血 (3)若抗A、抗B均凝集 AB型血 (4)若抗A、抗B均不凝集 O型血,在白背景上观察,凝集,不凝集,4.注意事项 (1)适度的RBC悬液浓度，约2-5%； (2)抗A和抗B不能混用； (3)在白色背景上观察效果较好。,（二）间接乳胶凝集试验 类风湿因子检测 类风湿关节炎患者血清中存在： 变性IgG Ag 抗变性IgG抗体(类风湿因子) Ab 临床上用检测类风湿因子以辅助诊断类风湿关节炎。,1.材料 已知Ag：致敏乳胶(乳胶颗粒表面有变性IgG) 待测Ab：待检血清中的类风湿因子,待测Ab,已知Ag,2.检测步骤： (1)取黑底纸片三片； (2)加待测血清、阳性和阴性对照血清各1滴； (3)各加1滴致敏乳胶,用牙签混匀； (4)5分钟后观察结果，以黑背景观察为佳。,阳性者现象：呈乳白色细沙状（乳胶凝集）； 阴性者现象：呈乳白色均匀混浊。,完成实验报告 实验一 凝集反应 一、直接凝集反应（玻片法） ABO血型鉴定 1.材料 2.操作步骤 3.结果判断（自己的血型） 4.实验讨论 二、