基因工程应用与克隆.ppt

1、请画出质粒被限制酶切割后所形成的黏性末端。,2、请画出目的基因两侧被限制酶切割后所形成的黏性末端。,3、在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来？为什么？,可以连接。因为由两种限制性内切酶切割后所形成的黏性末端是相同的(或“是可以互补的”),（2011年浙江卷）,6、ada（酸脱氨酶基因）通过质粒pET28b导入大肠杆菌并成功表达腺苷酸脱氨酶。下列叙述错误的是 A. 每个大肠杆菌细胞至少含一个重组质粒 B. 每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位点 C. 每个限制性核酸内切酶识别位点至少插入一个ada D. 每个人的ada至少表达一个腺苷酸脱氨酶分子,答案：C,下图四种质粒含有E1和E2两种限制酶的识别，Apr表示抗青霉素的抗性基因，Tcr表示抗四环素的抗性基因。,（2011上海生命科学卷 57基因工程中使用的限制酶,其特点是,：特异性地识别和切割DNA,将两端用E1切开的Tcr基因与用E1切开的质粒X1混合连接，连接后获得的质粒类型有。（可多选） AX1 BX2 CX3 DX4,答案：ABC,例1.下面哪项不具有限制酶识别序列的特征（ ） AGAATTC BGGGGCCCC CCTGCAG DCTAAATC CTTAAG CCCCGGGG GACGTC GATTTAG,1.限制酶的特点,例2.限制酶Hind酶切DNA的识别序列是AAGCTT，限制酶Hpa酶切DNA的识别序列是CCGG。假定DNA分子中A、T、G、C所含的比例相等，那么，限制酶Hind酶切割双链DNA的概率是 ，酶切位点间的平均距离约 kb（千碱基）；限制酶Hpa酶切割双链DNA的概率是 ，酶切位点间的平均距离约 kb。,解析：因为限制酶识别序列具有回文对称序列的特点，这两个序列在相应的互补链上又会呈现，因此我们只需考虑DNA的一条链即可。六碱基长Hind识别序列AAGCTT出现的概率是（1/4）6或1/4096，因此Hind酶切位点之间的平均距离大约为4 kb。同样的道理，4碱基长的Hpa酶识别序列CCGG出现的概率是（1/4）4或1/256，因此Hpa酶切位点的平均距离大约为0.25 kb。,例3.下列所示的黏性末端是由几种限制性内切酶作用产生的（ ） A1种 B2种 C3种 D4种,2黏性末端与限制酶类型的关系,4基因诊断,一对等位基因经某种限制性内切酶切割后形成的DNA片段长度存在差异，凝胶电泳分离限制酶切割的DNA片段，与探针杂交后可显示出不同的带谱(如图I所示)。根据该特性，就能将它作为标记定位在基因组的某位置上。现有一对夫妇生了四个儿女，其中I号性状表现特殊(如图)，由此可推知四个儿女的基因型(用D、d表示一对等位基因)正确的是 A1号为XdXd B2号为XDY C3号为Dd D4号为DD或Dd,基因工程的应用,基因工程与遗传育种,杂交育种的的缺点：所需时间长，远缘亲本难以杂交,基因工程：克服远缘难以杂交的障碍，实现种间遗传物质的交换,基因工程的应用,基因工程与疾病治疗,基因工程药物 基因治疗,基因工程的应用,基因工程与生态环境保护,可降解生物塑料 超级细菌,第二章 克隆技术,精子,卵细胞,4.营养生殖,红富士 国光,zhn砧木,接穗,扦插,压条,繁殖的类型:,（一）有性繁殖 （二）无性繁殖,特点:具备了双亲的遗传特性 具有更强的生活能力和变异性,定义:,特点:其个体保持了亲本的遗传性状，可以产生很多后代,应用：,克隆技术,原因：,由于细胞核具有基因组全套遗传信息,第一节 什么是克隆,只要不通过两个分子、两个细胞或两个个体的结合，只由一个模板分子、母细胞或母本直接形成新一代分子、细胞或个体，就是无性繁殖，即克隆。,无性繁殖系克隆,一、克隆的层次：,1、在分子水平上 2、在细胞水平上 3、在个体水平上,目的基因的复制、分离过程,单克隆抗体：利用动物细胞融合技术将骨髓瘤细胞和能产生抗体的B淋巴细胞融合得到杂交瘤细胞，培养，筛选到杂交瘤细胞系。,基因克隆,制备单克隆抗体,繁殖出生物个体,单克隆抗体制备过程,细胞融合、筛选,杂交瘤细胞系,细胞水平的克隆实例,植物组织培养过程,原理：植物细胞全能性,多利的一生,姓名：多利 性别：雌 种族：哺乳纲、牛科、绵羊 生日：1996年7月5日 出生地：苏格兰 基因父亲：无 基因母亲：一只芬兰白绵羊 线粒体母亲：一只苏格兰黑脸羊 生育母亲：另一只苏格兰黑脸羊 进入社交圈时间：1997年2月23日 子女：生育6名，存活5名 死亡：2003年2月14日,动物克隆：由胚胎细胞克隆到体细胞克隆的发展过程,胚胎细胞克隆不属于严格意义上的动物个体克隆。,二、克隆技术的发展：,微生物克隆时期 遗传工程克隆时期 个体水平上的克隆时期,DNA克隆或基因克隆技术,植物克隆、 动物克隆技术,细胞克隆技术,单细胞生物或病毒的繁殖,重组细胞,早期胚胎,另一头苏格兰黑面 母羊C子宫,克隆绵羊“多莉”,芬兰白面