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2011级硕士 免疫学实验课,闫东梅 ,补体依赖细胞毒试验,实 验 原 理,细胞性抗原与特异性抗体(IgG1,2,3或IgM)的结合可激活补体活化的经典途径，引起细胞膜损伤，膜通透性改变而吸收染料，使细胞着色，胀大而死亡，失去正常的折光性。根据死细胞的多少判断细胞毒性的强弱。 本次实验采用抗Thy-1血清(Thy-1是T细胞的一种表面标志)与小鼠的胸腺和脾的T细胞相互作用，通过激活补体对胸腺和脾的T细胞进行杀伤。,T Cell,细胞溶解现象,MAC,实 验 原 理 示 意 图,实验分组,四人一组，1只小鼠/组。 两人做脾，两人做胸腺。,物品分配,操作步骤,将3ml PBS加入平皿中。 小鼠脱颈处死，取脾和胸腺(分别位于左侧腹部和胸骨柄处) 取胸腺和脾脏分别放到平皿中，用直头镊子固定组织，用弯头镊子轻压组织，将其捣碎，再将3-4层纱布覆盖到组织上，然后用滴管隔着纱布将细胞悬液吸出。 按下图加样： 混匀后放置37水浴，孵育40分钟。 取出后每管加入50ul台酚兰染液，混匀后立即取出染色的细胞悬液20ul滴到玻片上，用盖玻片盖上，在显微镜下观察。 观察结果：计数200个细胞中死细胞数(死细胞形态为肿胀变大，失去折光性，呈兰色)。 结果判定 ：,加 样 方 法,阳性管,阳性管,阴性管,Ag+Ab+C,Ag+C,结 果 判 定,注意事项,靶细胞浓度要适中，过高或过低均会影响试验结果。 台酚兰染色时间不要太长，因为台酚兰本身具有一定的毒性作用，可致细胞死亡。 补体要新鲜采集，三只以上的豚鼠的血清混合。,补体依赖性细胞毒实验的应用,
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