人教版教学课件山东省新泰市第二中学2011-2012学年生物1.2基因工程的基本操作程序(课件).ppt

基因工程的基本操作程序,1.2,基因工程的基本操作程序,1.目的基因的获取,2.基因表达载体的构建,3.将目的基因导入受体细胞,4.目的基因的检测与鉴定,目前被较广泛提取使用的目的基因有：苏云金杆菌抗虫基因、人胰岛素基因、人干扰素基因、种子贮藏蛋白基因、植物抗病基因等。,基因操作的基本步骤,一、提取目的基因 将需要的基因从供体生物 的细胞内提取出来。,获得目的基因的方法,1. 从基因文库中获取目的基因,什么是基因文库？ 什么是部分基因文库？ 怎样从基因文库中得到我们所需的目的基因？ 目的基因的有关信息与什么相联系？,2.人工合成基因法PCR扩增技术,获得目的基因的方法,PCR (polymerase chain reaction) 聚合酶链式反应 是一项再生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。通过此技术，可获取大量的目的基因。,PCR技术,原理： 前提： 过程：,PCR扩增仪,DNA双链复制的基本原理,一段已知目的基因的核苷酸序列,目的基因DNA受热变性，解链； 引物与单链互补结合； 合成链在DNA聚合酶作用下进行延伸。,二、基因表达载体的构建基因工程的核心,基因操作的基本步骤,目的： 所需物质：,使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。,它们各自的作用是什么?,启动子,终止子,标记基因,复制原点,目,的,基,因,表达载体,用与提取目的基因相同的限制酶切割质粒使之出现一个切口，将目的基因插入切口处，让目的基因的黏性末端与切口上的黏性末端互补配对后，在连接酶的作用下连接形成重组DNA分子。,三、将目的基因导入受体细胞转化,基因操作的基本步骤,基因工程中常用的受体细胞有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。 用人工的方法使体外重组的DNA分子转移到受体细胞，主要是借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。 目的基因导入受体细胞后，就可以随着受体细胞的繁殖而复制，由于细菌繁殖的速度非常快，在很短的时间内就能够获得大量的目的基因。,将目的基因导入受体细胞并使之扩增,将目的基因导入各类细胞的方法,将目的基因导入植物细胞 将目的基因导入动物细胞 将目的基因导入微生物细胞,农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法,显微注射技术,感受态细胞吸收DNA分子,农杆菌转化法,你能说说农杆菌转化法的大概过程吗？ 根据农杆菌可将目的基因导入双子叶植物的机理，你能分析出农杆菌不能将目的基因导入单子叶植物的原因吗？ 如果想将一个抗病基因导入单子叶植物，理论上你认为该怎么做？,显微注射技术,导入贮藏蛋白基因的超级羊和超级小鼠,将目的基因导入微生物细胞,利用大肠杆菌可以生产出人的胰岛素。若要生产人的糖蛋白，可以用大肠杆菌吗？,四、目的基因的检测与鉴定 检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因 检测目的基因是否转录出mRNA 检测目的基因是否翻译成蛋白质,基因操作的基本步骤,分子杂交技术,1）以下说法正确的是 （ ） A、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 B、质粒是基因工程中唯一的运载体 C、运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接 D、基因控制的性状都能在后代表现出来,C,练习,2) 有关基因工程的叙述中，错误的是（ ） A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来 B、 限制性内切酶用于目的基因的获得 C、目的