农残检测中应注意的问题.ppt

农残检测中应注意的问题,样品制备,（1）样本应在冷冻状态下运送和保存，并避免在运送期间解冻，样品储存一般需在20，样品提取浓缩液储存应在05。通常动植物样品需搅拌或匀浆（籽粒需磨碎过40目筛），土壤样本需去石块等杂物，阴干后充分混匀，过40目筛。 样品检测前需混匀，可用粉碎机搅拌混匀，颗粒尽量小。 粉碎前应保持半冷冻状态，以免待测成份随水分流失。,（2）提取： 用溶剂将待测样品中农药溶解、分离出来的操作步骤。根据样本和待测农药种类，用不同溶剂和方法进行提取。 原理：相似相溶。选择与待测农药极性相似的溶剂，提取剂沸点应4580，且不能与样本发生作用，毒性低，价格便宜，必须能溶解待测农药。采用ECD时，不能选带卤素的溶剂。对含水量高的样本，一般选与水相混溶的溶剂（乙腈、丙酮等），要求溶剂对样本有较强的渗透能力，以便能将样本中农药充分提取。当单一溶剂效果不理想，可选择2种或2种以上不同极性的溶剂，以不同比例配成混合提取剂，溶剂的级性由强到弱顺序：水乙腈甲醇乙酸乙醇异丙醇丙酮正丁醇正戊醇乙酸乙酯二氯甲烷三氯甲烷苯甲苯二甲苯四氯化碳二硫化碳环己烷正己烷（石油醚）。,溶剂纯化：目前我国市售的有机溶剂几乎都需纯化后方可使用。 方法：多采用重蒸馏的方法。纯化后的溶剂检验方法是将溶剂浓缩100倍，吸取1l注入气相中无干扰峰即符合要求。也可采用中性氧化铝、硅胶、活性炭等吸附剂制成层析柱纯化。,提取方法：振荡法：在盛有样本的容器中加提取剂，振荡一定时间。 均质法：用均质机对加提取剂的样本快速均质。快速、简便。 超声法：样本加入提取剂，以超声波提取。 索氏提取：提取效果好，但时间长，干扰物多。多用于动物样本。 快速混匀法：适用于液体样品。,一般经三次提取，第一次约提取70-90%，第二次和第三次提取残渣中的剩余部分。无水硫酸钠和氯化钠的盐析作用能提高待测组分的回收率。干性样品（含水量10%）应加入适量水分再提取，采用乙酸乙酯提取含水量高的样本中农药时需加一定量的无水硫酸钠，提取浓缩菜汁或含糖量高的样本中农药时需加适量水，提取干燥土壤中农药时也需加适量水都能提高提取效果。,（3）净化：将样本中待测农药与干扰杂质分离的步骤。原则是尽量完全除掉干扰杂质，而又使待测农药损失尽量少。 液液分配：乙腈正己烷，丙酮正己烷，丙酮石油醚。 吸附柱层析：弗罗里硅土、三氧化二铝、硅胶、活性炭、硅藻土等。存于干燥器中。 固相萃取：四步：固定相活化、样品上柱、洗涤和洗脱。,（4）浓缩： 氮吹仪 旋转蒸发仪：水浴温度，蒸发速度，不能蒸干。,（5）定容：一定要准确。 方法评价指标：灵敏度（以方法最低检出浓度表示），准确度（添加回收率表示），精密度（标准偏差）。 精密度：指用某种方法重复测定同一均质样品所得测定值的彼此接近程度，表示分析结果的重复性。常用标准差（SD）或相对标准偏差（RSD）表示。,精密度重复性 重现性 重复性：短期内相同实验条件下（实验室、操作者、仪器型号和试剂批号），对同一样品测定结果的精密度。 重现性：指不同实验条件下使用某种分析方法对同一样品各个独立测定值间的精密度。 （重现性重复性）,精密度与待侧物的浓度关系： 浓度（g/kg） CV（%） 1 35 110 30 10100 20 100 15 对于定量方法，重复性精密度应控制在15%为宜，最高不超过20%；重现性精密度可在重复性精密度基础上加倍。,准确度：指测定值（平均值）与真实值的接近程度，表示分析结果的正确性。通常用添加回收率表示。 回收率：在空白样本中添加一定量待测农药标准样品，制成已知含量的样本，然后按拟定的方法对样本进行提取、净化和测定。所得到的实测值与已知值比较，实测值与已知值的百分率即为方法添加回收率。添加回收率应以接近100%为最佳。但是由于试样中种类和农药品种多，以及杂质干扰、操作误差等原因。要求回收率为70110%，平均回收率80%即符合要求。,加标量原则上应以接近待测试样中农药含量为宜，但由于待测样本中农药残留量未知，因此一般以该试样的农药高残留限量作为参照，一般以规定的MRL值接近的浓度作为中档添加浓度，低于和高于MRL值一个数量级的浓度作为低档和高档添加浓度。 回收率=（测定值空白值）/添加量（如何添加标准） 定量方法回收率范围：70%110%，平均回收率应80%以上。实际工作中根据待测物的浓度范围，只要精密度符合要求60%以上回收率也可以接受。但是回收率偏低会影响灵敏度，在残留分析报告中一般不要求用回收率对测定值进行校正。,参考数据： 检测限（LOD limit of detection）：指分析方法能够从样品背景信号中检测出待测物质存在时所需最低浓度。LOD反映了分析方法整体的灵敏度效能指标。一般对分析方法在LOD水平的定量可信性（如精密度、回收率）不作要求，一般要求残留分析方法LOD0.1MRL LOD=B+2SD或B+3SD 影响LOD的因素：检测器灵敏度、噪声水平、基质干扰（净化效果）、样品量和浓缩倍数，宜注重提高净化效果，而不应完全依据增加进样量或浓缩倍数来降低检测限。,定量限（LOQ limit of quantitation）：指分析方法能够对样品中待测物进行定量测定的最低浓度。用于定量方法的验证。 一般要求其CV20%,回收率70%，方法LOQ0.2MRL，LOQ=B+10SD。,线性范围：待测物浓度与仪器的响应信号呈线性关系并且能满足定量要求的浓度范围，用浓度最小值和最大值或二者之比表示。,定性定量方法,定性法： 1.保留值定性：样品中组分保留值（保留时间、保留体积等）与已知物质在 相同条件下测得保留值比较，如果数值在实验容许的误差范围内，就可以推定此组分可能是该物质。要求载气流速、载气温度和柱温一定恒定，否则其微小的波动和变化都会改变保留值影响定性。可采用加标法（避免载气流速变化影响）和相对保留值定性法（柱温和固定相一定时，相对保留值为定值，可作为定性较可靠参数，常用双柱定性，两个纯化合物在性能不同的两根以上色谱柱上有完全相同保留值，则这两个纯化合物基本可以认定为同一化合物。使用柱子越多，可信度越高）。,2.MS定性： GC/MS法可给出组分分子量和结构信息，以此可对组分进行确证，是残留分析最有效的定性方法。仅用质谱碎片对同分异构体等判断较困难。一般采用色谱保留值与质谱相结合的方法定性。 GC/MS能通过总离子流检测得到色谱峰，对每个色谱峰进行扫描，用解析法或标准质谱图对照法定性。还可用质量碎片法选择高峰度特征性质量峰进行选择离子检测，为筛选分析提供更有效的定性或定量信息。 GC/MS还可以方便的判定色谱峰内未分离开的组分。,3.选择性检测器定性：选择性检测器只对 某类或某几类化合物有信号，可用来判定 被测物是否此类化合物，如FID，仅对含碳 化合物响应；ECD，只对含强电负性基团 有响应。两个或两个以上检测器串联或并 联还可以得到更多定性信息。,定量法： （1）外标法：经标准曲线定量（经过原点），46个点，也可单点校正，但必须保证组分峰面积与标样峰面积相近，且色谱条件及进样量一致。若有系统误差，则单点校正误差较大。 优点：直接定量，适合大批量样品。标线绘制后可使用一段时间，在此段时间内可经常用一个标准样品对曲线进行校正，以确定其是否可以使用。 缺点：每次样品分析色谱条件（柱温、检测器状态、进样量、柱效果）很难完全相同，易出误差。另外，样品前处理中欲测组分变化无法补偿。,（2）内标法：是在要测定的样品中加入已知量的已知化合物，作为测定的比较标准，用待测物峰面积和内标物峰面积比值进一步求得待测物组分浓度。 优点：进样量变化，色谱条件微小变化对结果影响不大，前处理前加内标，可部分补偿欲测组分在前处理时的损失。 缺点：内标物选择困难，称量要准确，操作较麻烦。,（3）影响定量的因素 样品制备：待测组分富集，净化效果（影响积分、回收率），制备好的样品储存条件（温度、湿度、避光、分解、氧化或其他化学反应）。 样品制备好后应尽可能立即检测。 进样技术：进样量主要影响外标法，因素有二：一是进样装置准确度和精度；二是操作人员进样技术和熟练程度。进样时，插针速度、进针位置、深度和熟练程度，影响进样准确性和重复性。对沸程宽的样品，进针快，拔针慢，防止难挥发组分在拔针时未完全进入柱子，还要注意橡胶垫漏气问题，引起样品损失。,色谱条件选择：柱温变化影响保留时间和峰高，且对峰高的影响随分子量增加而加大，即柱温变化对各组分峰高影响是不等效的。而对峰面积影响小，故气相中多采用峰面积定量。积分参数设置很重要。对定量结果影响很大。 总的原则是尽可能保持每次进样时色谱条件一致。 检测器特性：检测器稳定性和线形范围直接影响色谱定量分析结果的准确性和重复性，因此应尽可能维护好检测器，保持其工作稳定性。 分离度：待测物质的色谱峰分离度直接影响到峰高和峰面积的积分，从而影响到待测物质的准确定量。,方法建立步骤,1.文献检索： 2.建立检测方法： 3.建立样品处理方法： 4.标准曲线： 5.稳