DB3205T 201-2011 荷花种质资源保存及提纯复壮技术规范.doc

Q/320500 JM 03-2001江苏省苏州质量技术监督局 发布20120301实施20120301发布荷花种质资源保存及提纯复壮技术规范DB3205/T 201-2011DB3205苏州市农业地方标准B 051DB3205/T 201-2011前 言荷花因兼具观赏、净化水环境等功能，在休闲农业、绿化美化、环境净化等方面具有广阔应用前景。荷花主要以种藕进行无性繁殖，种质容易退化。目前苏州市各类生态园及湿地系统中荷花得到广泛应用，但普遍存在品种杂乱、种性退化等问题，荷花种质资源保存与提纯复壮尚缺少技术规范。为规范荷花种质资源保存与提纯复壮技术，防止荷花种质资源流失与品种退化，推动标准化荷花种质保存与提纯复壮技术应用，根据中华人民共和国标准法，特制订本标准。本标准编写按GB/T 1.1-2009标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写。本标准由苏州市农业委员会提出。本标准起草单位：苏州市农业科学研究院、苏州市相城区荷花湿地公园开发有限公司。本标准主要起草人：李静会、徐正庭、李欣、姜红卫、徐君、杨雪星。I荷花种质资源保存及提纯复壮技术规范1 范围本标准规定了荷花种质资源保存及提纯复壮的术语和定义、种质资源种植保存技术、荷花种质资源试管苗保存技术、荷花种质资源分藕提纯复壮技术、荷花种质资源组培提纯复壮技术。本标准适用于荷花种质资源保存及提纯复壮。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB 4285 农药安全使用标准GB/T 8321.(19) 农药合理使用准则(所有部分)NY/T 837-2004 莲藕栽培技术规程3 术语和定义下列术语的定义适用于本标准。3.1荷花 本标准中荷花指观赏花的莲藕品种。3.2荷花种质资源携带不同遗传物质的莲植物的统称，包括野生种、地方品种、选育品种、品系、特殊遗传材料。4 种质资源种植保存技术4.1 种质资源圃建设4.1.1 环境条件临近水源，远离污染源，附近无高大树木、建筑物等，有充足的阳光。4.1.2 资源圃规格资源圃由若干个品种池组成，一份资源种植一个池，池的数量由需要保存的种质资源数量决定。单个品种池长、宽各为1.2m3m，面积为2m24m2，各品种池间完全隔断，间隔在0.8m以上。为防止漏水和便于操作，资源圃品种池一般采用半地下式，2/3在地下，1/3在地上。资源圃主体一般为混凝土或砖砌结构，亦可根据立地条件和投入规模选用其他建池材料。4.1.3 池底池底土壤先拌和生石灰，分层用机械整平压实，再铺10cm厚C15混凝土抹平，切割好伸缩缝。简易条件也可在机械密实后用5cm12cm24cm规格实心砖平铺，再抹1.5cm厚水泥砂浆。4.1.4 池埂池埂宜用空心砖砌成。共用进水口的品种池池埂高为25cm30cm，灌溉时水能越过池埂流通。不共用进水口的品种池埂高为40cm50cm。品种池之间的池埂宽度0.8m以上，周围排水沟池埂宽为20cm30cm。池埂表面抹1.5cm厚水泥砂浆。4.1.5 灌水沟和排水沟灌水沟与排水沟分开，一般灌水沟在中间，排水沟在四周，保证每个品种池水能灌溉进去，遇到大雨时水能越过池埂进入排水沟排出。进水也可用管道连通到每个品种池。进水沟或孔的底边高于品种池底面10cm15cm，排水沟略低于品种池土层高度。4.1.6 土壤品种池中土层厚度在15cm20cm，土质疏松肥沃，土壤有机质含量较高，ph值为5.57.5的水稻土、菜园土均适宜种植，品种池中土壤3年须更换一次。4.2 资源圃田间栽培管理技术4.2.1 土壤准备前一年冬前将土壤翻耕，拌好有机肥，拌腐熟粪肥45000kg/hm2或商品有机肥4500kg/hm2，冬季充分冻融，早春土壤过筛后入池。4.2.2 上水宜于种藕定植前3d5d上水充分浸泡土壤，耙平泥面。4.2.3 基肥施用在冬前有机肥充足的情况下基肥可以不施，有机肥不足可以适量施用基肥，宜于定植前15d施少量15:15:15复合肥，用量0.8 kg/m31.0 kg/m3土壤。4.2.4 种藕选择种藕必须是藕身健壮、无病虫害，具有顶芽、侧芽和叶芽的完整藕，并严格区分品种。4.2.5 种藕贮运应符合NY/T 837-2004规定。4.2.6 定植4.2.6.1 定植时间应在日平均气温达15以上时开始定植。苏州地区在3月下旬至4月中旬定植。4.2.6.2 定植方法种质资源圃内每池按1支/m2的密度种植。种藕以2025角斜插入土，藕头入泥5cm15cm，藕梢翘露泥面。种藕种植时保持池面基本无水。4.2.7 资源圃田间管理4.2.7.1 追肥于定植后每隔25d30d追肥，第1次在1片2片立叶长出时，第2次在封行前，第3次在结藕前。每次施腐熟粪肥22500kg/hm2或尿素150kg/hm2225kg/hm2，15:15:15复合肥300kg/hm2375kg/hm2。施肥前将水位降低，追肥时氮磷钾配合使用。施肥后应及时浇水冲叶，防止灼伤叶片。4.2.7.2 水层管理水层管理遵循前期浅、中期深、后期又浅的原则。不同时期的适宜水深分别为：定植期至萌芽阶段3cm5cm；生长中期开始抽生立叶至封行前5cm10cm，封行期至结藕期10cm25cm；结藕期至枯荷期5cm10cm；莲藕留地越冬期间3cm5cm。4.3 病虫害及杂草防治4.3.1 主要病虫草害危害荷花的主要病害有莲藕腐败病、褐斑病；虫害有斜纹夜蛾、莲缢管蚜、莲潜叶摇蚊、稻食根叶甲、克氏原螯虾及椎实螺、福寿螺；主要草害为杂草。4.3.2 防治原则坚持“预防为主，综合防治”的植保方针，优先采用“农业防治、物理防治和生物防治”措施，配套使用化学防治措施的原则。严禁使用高毒高残留农药。农药使用应符合GB 4285和GB/T 8321.(19)规定。4.3.3 防治方法莲藕腐败病 应选用抗病品种、栽植无病种藕，尽量减少人为造成地下茎伤口。于种植前3d5d，每公顷施生石灰750kg；或种藕用50%多菌灵可湿性粉剂800倍液或70%甲基硫菌灵可湿性粉剂800倍液浸泡1min。莲藕褐斑病 一般每公顷用50%多菌灵可湿性粉剂1:1000倍液，于发病初期喷雾1次，或75%百菌清可湿性粉剂1:600倍液，于发病初期喷雾1次；病情严重时交替用药。斜纹夜蛾 可用黑光灯或频振式杀虫灯诱杀成虫，或用糖6份、醋3份、白酒1份、水10份及90%敌百虫1份（重量比）调匀配成糖醋液诱杀成虫；人工摘除卵块或扑杀幼虫；分散后的幼虫每公顷用国产Bt粉剂500800倍液喷雾防治，或5%定虫隆（抑太保）1500倍液喷雾1次；病情严重时交替用药。莲缢管蚜 清除水生杂草，特别是水生寄生植物。宜用黄板诱杀有翅成虫，或50%抗蚜威可湿性粉剂1:1200倍液喷雾。莲潜叶摇蚊 如用90%晶体敌百虫8001000倍液喷杀，前期摘去受害较重的叶片，隔1周喷1次，连续喷3次。稻食根叶甲 冬季排干积水，促使越冬幼虫死亡，清除野生寄主，减少成虫取食及产卵场所。用茶籽饼粉300kg/hm2耕入田中消灭幼虫。克氏原螯虾（龙虾） 在定植前7d每公顷用2.5%溴氰菊酯乳油3000倍液均匀浇泼1次，水深保持3cm。椎实螺、福寿螺 于定植前7d，每公顷可施用灭螺鱼安（20硫酸烟酰苯胺粉）7.5kg或2%三苯醇锡粒剂15kg20kg撒于田间，水深保持3cm。杂草 定植前，结合耙地清除杂草；定植后至封行前，人工拔除杂草，清理绿萍与苔藓。4.4 采收莲子资源圃品种池中荷花结的莲子要及时套袋采收（或在成熟前套袋），随熟随采，防止散落到池中，或者在成熟前将莲蓬剪除，防止品种混杂。4.5 种藕出圃种藕出圃时间为种藕生长休眠期，一般在二月中下旬。起挖后将藕鞭剪掉，留主藕、子藕和孙藕。 对种藕进行分品种、分类、分级贮藏：一般将种藕直接假植在水池中，有条件可将种藕放入温度为58、湿度为9095的冷库中储存。5 荷花种质资源试管苗保存技术5.1 外植体取材取材时间：在莲藕萌发期（2月4月）或结藕期（10月12月）取材；取材要求：选取符合原品种特性、无明显病虫害症状的大田植株，挖出莲藕茎段，切取2cm3cm长的饱满顶芽。5.2 外植体表面消毒切取莲藕的顶芽，在自来水下洗净，并用洗衣粉溶液浸泡15min，在流水状态下冲洗1 h以上，转入无菌操作室。在无菌条件下，外植体先用75的乙醇浸泡30s，再用0.1升汞浸泡5min，无菌水冲洗 5次，每次30s以上，将材料置于无菌烧杯中备用。5.3 茎尖剥取将解剖镜置于超净工作台上，用75%酒精擦拭2遍，打开超净工作台风机与紫外灯，消毒2h。将表面消毒的材料置于灭过菌的滤纸上，用消毒的镊子和手术刀在解剖镜下剥离外层幼叶，切取0.3mm0.5mm顶端带2个叶原基的茎尖组织。5.4 分化培养将剥取的茎尖组织接种在经高温消毒（121，15min）过的分化培养基（MS+0.05 mg/L0.5 mg/L BA，3蔗糖，0.7%琼脂粉）上，封口后置于252，光照1500lux2000lux，每天光照12h的条件下培养，经过1个月2个月分化培养可获得试管苗。5.5 继代培养保存 在超净工作台上操作，将分化试管苗的丛芽切割，分为单芽或带1个腋芽的茎段，在无菌状态下转入高温消毒过的继代培养基（MS+0.3mg/L0.5mg/L BA，3蔗糖），置于202，光照1500lux2000lux，每天光照12h的条件下培养，继代周期为90d，待新芽形成后，重复上述步骤。5.6 生根培养将试管苗切成带2片3片叶或1个2个腋芽的茎段接入生根培养基（MS+0.05mg/L0.1mg/L NAA + 1.0mg/L2.0mg/L BA，3%蔗糖）中，培养20d左右可以长出较多的根。5.7 炼苗移栽将已长根且长势正常的试管苗拿到室外，闭瓶炼苗5d7d后再敞瓶炼苗2d。将试管苗取出洗净根部附着的培养基，栽入2cm3cm深的浅水灭菌基质（70%泥土+30%泥炭土），覆盖有透气孔的塑料薄膜，在温度2025、遮荫条件下培养7d10d，揭膜。喷洒适当营养液，经3周培养可移栽至小池或缸中种植，一般于5月7月移栽，前期晴天注意遮荫、雨天注意防止雨水冲刷。大田移栽成活后，仔细对照该品种的品种特性，辨别株型、长势、花色、花型、花期、着花密度、叶色等特征，通过品种鉴定的种苗所结的种藕，翌年春天可收获作为该品种的原种种藕。 6 荷花种质资源分藕提纯复壮技术6.1 方法采用改良混合选择方法，即单株选择、分系比较、二圃制（株系圃、原种圃)。6.2 种藕来源6.2.1 单株选择 提纯用种藕来源从株系圃中选优或从育种单位购买，第一年种植到种质资源圃进行初选。花期初选，从种质资源圃里选取生长强势、无退化表现、并符合原品种特性植株作为母株。选择数量依原种圃面积而定，初选数应比决选数增加一倍。结实结藕期决选，将健壮并具有该品种典型开花与结实结藕特征的单株品种池中所结的全部种藕单独贮藏，作为株系圃的种藕。6.2.2 株系圃株系圃一般为若干个面积不低于1m2的种植池或排列整齐的直径不低于0.65m的种植缸组成，各池（缸）间距不低于0.8m。第二年，将贮藏的全部种藕分品种分株单独种植，一池或一缸一藕，做好标识。生长期间进行多次品种特性观察，结合指示标志、抗血清法鉴定，严格淘汰病毒株和变异株系，对各品种株系苗期、开花期、结实结藕期综合观察甄别与检测，精选出的1株2株健壮、生长势强且符合品种典型特性的株系做好标志，所结种藕作为提纯复壮后的新种藕，下一年种植到种质资源圃中，余下的种藕去杂去劣后混收，作为该品种的原原种，用于繁殖生产原种。6.2.3 种质资源圃第三年，在株系圃中精选出的植株所结的种藕，已是提纯复壮后的新种藕，淘汰原种质资源圃中的种藕，用复壮后的新种藕种植到种质资源圃中，当年在种质资源圃中再选优良单株，下一年种植到株系圃中。6.3 隔离条件品种间用品种池隔离，各池根系不相连通。同品种池连续几年种植，满3年更换一次土壤。6.4 去杂去劣6.4.1 定植前 原种圃与株系圃，定植前都需要先挖出上年残留植株，清理掉落的种子。6.4.2 生长期及时清除花色、花形、叶色、叶形等性状与所繁品种明显有异的植株。花期每3d5d巡查一遍，结实期每5d7d巡查一遍，莲子成熟前及时套袋，防止种子掉落，成熟时及时采收，或者在成熟前将莲蓬剪除。6.4.3 枯荷期挖除田块内保持绿色的个别植株。6.4.4 挖采期剔除皮色、芽色、藕头与藕条形状等与所繁品种有异的藕支及感病藕支。6.5 定植与栽培管理参照4.2.6、4.2.7。6.6 种藕采收与储藏参照4.2.8、4.2.6。7 荷花种质资源组培提纯复壮技术方法同5。在5.6生根培养后和5.7炼苗移栽前进行病毒检测，淘汰带毒苗，未检测出的其余试管苗，1个月后再检测一次，确认无病毒可作为原种苗保存和繁殖。荷花种质资源保存及提纯复壮技术规范编制说明一、任务的来历及工作简要过程苏州是典型的江南水乡，湖泊众多，湿地资源丰富，随着湿地资源的快速开发利用，荷花因兼具观赏、净化水环境等功能，在休闲农业、绿化美化、环境净化等方面具有广阔应用前景。目前我市各类生态园及湿地系统中荷花得到广泛应用，但普遍存在品种杂乱、种性退化等问题，导致观赏性下降，迫切需要收集、保存与提纯复壮荷花种质资源，防止种性退化。我市尚无荷花种质资源保存与提纯复壮技术规范。2011年由苏州市农业委员会提出，苏州市农业科学研究院、苏州市相城区荷花湿地公园开发有限公司负责起草了荷花种质资源保存及提纯复壮技术规范。经过广泛征求专家意见，查阅了大量相关资料，根据实际情况进行了多次修改，于2011年11月完成了荷花种质资源保存及提纯复壮技术规范苏州市农业地方标准的起草工作。二、编写过程进行的主要调查及数据来源本标准制订前，我们已从全国各地收集荷花种质资源，建设荷花种质资源圃，并且开展了荷花种质资源保存和提纯复壮的相关研