补充检验方法

附件银杏叶提取物、银杏叶片、银杏叶胶囊中游离槲皮素、山柰素、异鼠李素检查项补充检验方法【检查】游离槲皮素、山柰素、异鼠李素 照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录 D）测定。色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4%磷酸溶液（50:50）为流动相；检测波长为360nm。理论板数按槲皮素峰计算应不低于2500。对照品溶液的制备 分别取槲皮素对照品、山柰素对照品、异鼠李素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml分别含30g、30g、20g的混合溶液，作为对照品溶液。供试品溶液的制备 取银杏叶提取物约40mg；或取银杏叶片10片，糖衣片除去包衣，精密称定，研细，取约相当于总黄酮醇苷9.6mg的粉末；或取银杏叶胶囊装量差异项下的内容物，混匀，研细，取约相当于总黄酮醇苷9.6mg的粉末，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇溶液20ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率33kHz）20分钟，取出，放冷，再称定重量，用80%甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法 分别精密吸取对照品溶液10l，供试品溶液210l，注入液相色谱仪，测定，分别计算槲皮素、山柰素、异鼠李素的含量。结果判断：银杏叶提取物：本品按干燥品计，每1g含槲皮素（C15H10O7）不得过10.0mg，山柰素（C15H10O6）不得过10.0mg，异鼠李素（C16H12O7）不得过4.0mg。银杏叶片：规格（1）本品每片含槲皮素（C15H10O7）不得过0.40mg，山柰素（C15H10O6）不得过0.40mg，异鼠李素（C16H12O7）不得过0.16mg；规格（2）本品每片含槲皮素（C15H10O7）不得过0.80mg，山柰素（C15H10O6）不得过0.80mg，异鼠李素（C16H12O7）不得过0.32mg。银杏叶胶囊：规格（1）本品每粒含槲皮素（C15H10O7）不得过0.40mg，山柰素（C15H10O6）不得过0.40mg，异鼠李素（C16H12O7）不得过0.16mg；规格（2）本品每粒含槲皮素（C15H10O7）不得过0.80mg，山柰素（C15H10O6）不得过0.80mg，异鼠李素（C16H12O7）不得过0.32mg；规格（3）本品每粒含槲皮素（C15H10O7）不得过1.67 mg，山柰素（C15H10O6）不得过1.67mg，异鼠李素（C16H12O7）不得过0.67mg。附注：银杏叶片规格： （1）每片含总黄酮醇苷9.6mg，萜类内酯2.4mg （2）每片含总黄酮醇苷19.2mg，萜类内酯4.8mg银杏叶胶囊规格：（1）每粒含总黄酮醇苷9.6mg，萜类内酯2.4mg （2）每粒含总黄酮醇苷19.2mg，萜类内酯4.8mg（3）每粒含总黄酮醇苷40mg，萜类内酯10mg自从国家食品药品监督管理总局5月19日发布关于桂林兴达药业有限公司等企业违法生产销售银杏叶药品的通告（2015年第15号）以来，银杏叶药品专项治理工作在全国的制药企业内逐渐扩大，愈演愈烈。截至6月4日，全国涉案中药提取物生产企业：6家；涉案购买不合格原料进行制剂生产的企业达43家（国内使用银杏叶提取物的制剂厂家共有113家，其中注射剂14家，口服制剂98家）几乎一半企业被牵扯在内，其中不乏大型制药企业。业内企业大多噤若寒蝉，新一轮的重点排查开始了。各省药监局雷厉风行彻查各种银杏制剂，各级医院甚至摆出了2012年毒胶囊事件的架势，清退全部银杏制剂。究竟什么原因造成了这次事件呢？国家局曝光的信息：几家生产企业，擅自将提取工艺从乙醇提取变成了3%的稀盐酸提取。如果采用乙醇加热回流的传统方法，乙醇作为溶剂，蒸发损耗比较大。并且乙醇属于高度易燃物，所以生产企业的期间制造成本非常高。所以要迎合“某些企业低价采购原料提取物降低药品成本，最后得以低价中标进入医院市场”的目的。部分企业将乙醇换成了3%的稀盐酸作为溶剂进行提取。稀盐酸提取银杏制剂的优势：1.加热回流蒸发损耗比较少。2.根据相似相溶的原理，稀盐酸作为溶剂更容易将银杏叶中的杂质成份银杏酸清除出来。更容易达到国家标准中对银杏酸的含量要求。3.虽然盐酸会造成一定的银杏黄酮类成份损耗（这点可以采用加大银杏叶药材投药量；提取后迅速中和的办法解决）但弱酸性环境有利于提高银杏叶提取物中银杏内脂的稳定性既然稀盐酸相对乙醇提取有那么多的优势，为何国家药监总局要彻查此事，要求企业整改呢？NO.1：环境保护要求盐酸提取银杏叶后的废水处理是一个难题，含有大量银杏酸的酸性废液，按照正常应该是用生石灰中和后，经过治污处理才能排放。但是由于氯化钙的多孔性和其他原因，难以将废水正常环保化处理。酸性废液会污染水体，上世纪90年代21世纪初，各地化工厂，制革厂、印染厂的废水污染河流的情况，大多都是这样的废酸引起的。请企业家们计算下环保成本！地方政府单纯为了GDP罔顾环保压力发展经济的时代早该结束了！如果采用成本较高的乙醇提取银杏叶，只会产生固体废渣和少量废液，环保无害化处理相对容易简单。NO.2：GMP严格执法的要求国家药监总局2014年7月下发的关于加强中药生产中提取和提取物监督管理的通知（食药监药化监2014135号）的要求组织生产、自主组织原料提取。并按照有关规定在总局登记。并要求2016年1月1日后各家中药企业完全自主提取中药材。实际实施过程中企业并不顺利。并查出多家企业伪造进货记录的情况。阿里巴巴上搜索“银杏提取物”的情况结果获得528条搜索记录，卖家来自全国各地，银杏提取物均满足24/6的国家标准要求（银杏黄酮含量大于24%，银杏内脂含量大于6%）国家局在借“银杏叶事件”整顿整个中药产业，甚至通过此事件，介入到保健品生产的上游进行有关的监管。消灭以往的监管死角。建立从成份含量管理到方法控制的全过程监管。长期来讲，对国民健康是负责的，利好消息。NO.3：技术上优胜劣汰，促进中药产业发展资料显示，银杏叶提取物自1965年被德国研制以来，在全球均有广泛应用，主要用于神经内科、心内科、老年科、中医科和保健品市场。到2013年，全球市场上银杏叶制剂（含针剂）年销售额达70亿美元。由于其研发时间很早，故而质量标准层次较低。提取的有效成份的含量只有30%【惊叹银杏疗效的强大，70%的不明成份！一起进入体内的成份是敌是友都不知道】进过几十年的临床研究和使用，银杏制剂受制于老的质量标准，难以有治疗效果的全面提升。直到2011年银杏内酯上市，将其中最具有临床疗效的银杏内酯和白果内酯按照最优比52%:48%提取精制纯化，有效含量达到99%第三代银杏制剂才真正释放出“银杏”这个古老物种的魅力。世界各国银杏叶提取物质量标准比较：银杏内酯其提取过程的非常复杂（原研德国企业几十年也没做到）除了普通的乙醇提取外，还需要大量的非极性溶剂（如乙酸乙酯）【如果换盐酸那点节省的成本已经完全忽略了】层析柱从普通的树脂柱变成按照银杏内酯分子类型定制的“聚酰胺”分离柱按照欧盟GMP标准生产：全程环保、高效、无污染。对于落后产能的严格管理和产品质量标准提升，对于我国中药资源的深度开发是非常有益的。银杏叶提取物事件与2012年的毒胶囊事件不同，其中一个重要的特征是产品有效成份和杂质等的检测完全合格，只是采用了未经许可的生产工艺，管理上有诸多不符合GMP规定的行为。本次事件上，国家药监总局更多的出发点是：国家产业政策优化，经济可持续发展层面。中国的医药产业发展必然要淘汰落后产能、落后工艺而更多追求更好疗效和创新产品。为我们的孩子留下蓝天绿水，为我们的父辈们制造有效而经济的药物，医药同道们共勉。2015 年，由于采用劣质原料，擅自改变银杏叶提取物生产工艺，而造成的银杏叶风波牵连了的多家国内生产企业。这些企业擅自更改提取工艺，用 3% 的稀盐酸代替稀乙醇制备银杏叶提取物。不仅每吨能节约 4000 元成本，而且还能提高出率，缩短基础工艺流程时间。然而这种工艺严重影响药品安全和疗效，今天就帮助大家解释稀盐酸提取银杏制剂的劣势吧！1. 稀盐酸提取方法会造成银杏叶提取物中的有效成分降低、远达不到中国药典的标准，特别是萜内酯的大量分解，最终导致产品功效降低。2. 在安全性方面，盐酸提取法会导致提取物中有害成分银杏酸等的含量增加，从而影响产品的安全性。3. 盐酸提取会对环境造成一定的危害。盐酸提取银杏叶后的废水，含有大量银杏酸的酸性废液，这种酸性废液如不妥当处理会污染水体，对环境造成严重危害。说到银杏叶的提取工艺，目前国内外广泛采用的有二类：水 - 丙酮提取法和水 - 乙醇提取法。以国际上银杏叶提取物的标杆产品达纳康(成份为 Egb761) 为例，它是通过水 - 丙酮双相提取法，生产工艺是以水 - 丙酮为起始溶剂粗提取，再经脱脂、除去银杏酚酸等、活性成分富集、纯化等数十道复杂工序，制成提取物。这是一个专利过程，区别于国际上的任何一种银杏叶提取物的提取工艺。由于丙酮对提取设备中的不锈钢内胆及密封橡胶圈有一定腐蚀性，提取设备需定期更换，成本增高，因此考虑到国内 - 的设备和成本现状，我国药典规定银杏叶提取物制剂采用水 - 乙醇提取法。但相比而言，水 - 丙酮提取法对银杏叶有效成分的提取率更高。众所周知，植物药的品质取决于原料来源、质量控制、生产工艺和设备等很多方面因素，而提取工艺无疑是最为重要的一个环节。某种程度上说，选择一种产品，就是选择一种工艺标准，就是选择品质与信誉。例如上文提到的 EGB761，它代表了行业的更高标准，具