GB 4789.7-1994 食品卫生微生物学检验 副溶血性弧菌检验.pdf

中华 人 民 共 和 国 国家 标 准 食 品 卫 生 微 生 物 学 检 验 47 89 . 7 一 9 4 GB储 副 溶 血 性 弧 菌 检 验 GB 4 7 8 9 . 7 - 8 4 Mi c r o b i o l o g i c a l e x a mi n a t i o n o f f o o d h y g i e n e E x a m i n a t i o n o f V i b r i o p a r a h a e m o l y t i c u s 1 主题内容与适用范围 本标准规定了副溶血性弧菌的检验方法。 本标准适用于食品和食物中毒样品中副溶血性弧菌的检验。 2 引用标准 G B 4 7 8 9 . 2 8食品 卫生微 生物学检验 染色法、 培养基和 试剂 3 设备和材料 3 . 1 试管: 2 0 mmX2 0 0 m m, 1 5 m mX1 0 0 m m, 3 . 2 吸管1 m L , 5 m L , 1 0 m L , 3 . 3 平皿: 皿底直径9 0 m m, 3 . 4 广口瓶或三角瓶。 3 . 5 电动均质器或乳钵。 3 . 6 酒精灯。 3 . 7 接种灯和接种环。 3 . 9 试管架。 3 . 1 0 载玻片。 3 . 1 1 温箱。 3 . 1 2 显微镜。 4 培养墓和试荆 4 . 1 4 . 2 4 . 3 4 . 4 4 . 5 4 . 6 4 . 7 4 . 8 4 . 9 氯化钠结晶紫增菌液: 按G B 4 7 8 9 . 2 8 中4 . 3 9 规定。 氯化钠蔗糖琼脂: 按G B 4 7 8 9 . 2 8 中4 . 4 0 规定。 嗜盐菌选择性琼脂: 按G B 4 7 8 9 . 2 8 中4 . 4 1 规定。 3 . 5 0 0 氯化钠三糖铁琼脂: 按G B 4 7 8 9 . 2 8 中4 . 4 2 规定。 氯化钠血琼脂: 按G B 4 7 8 9 . 2 8 中4 . 4 3 规定。 嗜 盐 性试验培养基: 按G B 4 7 8 9 . 2 8 中4 . 4 4 规定。 3 . 5 0 0 氯化钠生化试验培养基: 按G B 4 7 8 9 . 2 8 中4 . 4 5 规定。 革兰氏染色液: 按G B 4 7 8 9 . 2 8 中2 . 2 规定。 甲基红试剂: 按G B 4 7 8 9 . 2 8中3 . 4 规定。 中华人民共和国卫生部1 9 9 4 一 0 3 - 1 8 批准1 9 9 4 一 0 9 一 0 1 实施 G B 4 7 8 9 . 7 一9 4 4 . 1 0 靛基质试剂: 按G B 4 7 8 9 . 2 8 中3 . 1 3 规定。 4 . 1 1 V - P试剂: 按G B 4 7 8 9 . 2 8 中3 . 4 规定。 5 检验程序 副溶血性弧菌检验程序如下: 6 操作步骤 6 . 1 分离培养: 首先称取祥品2 5 g ， 加2 2 5 m L 3 . 5 % 灭菌盐水， 用均质器打碎或用乳钵磨碎， 接种氯化 钠琼脂平板和嗜 盐菌选择性琼脂平板各I 个， 同时取1 0 m L ， 加人1 0 0 m L 增菌液中， 放3 7 0C 8 1 6 h 培 养后， 涂上述平板进行分离， 于3 7 0C 1 8 -2 4 h 培养后取出观察。 6 . 2 挑取上述可疑菌落， 转种3 . 5 0/ n 氯化钠三糖铁斜面， 3 7 C . 2 4 h 观察结果。 6 . 3 涂片镜检: 将三搪铁培养基反应可疑者( 底层变黄葡萄糖产酸不产气， 斜面不变乳塘蔗糖不分解， 有动力， 不产生硫化氢) 进行涂片革兰氏染色镜检形态。 6 . 4 嗜盐性试验: 将上述可疑培养物分别接种于不同浓度的盐膝水中， 3 7 0C 2 4 h 培养后观察生长情 况， 在无盐和1 0 肠以上盐的陈水中不生长， 在7 %盐的陈水中生长良 好者进行下列有关试验。 6 . 5 生化试验: 分别接种各类生化培养基， 放 3 7 C, 除V - P , 靛基质、 甲基红试验培养4 8 h后加试剂观 察外， 其他均可在 2 4 h观察。 G B 4 7 8 9 . 7 一 9 4 表 1 副溶血性弧菌的生化学性状 V- P 靛基质 赖氨酸 鸟氮酸 精氨酸 溶血 + 十 + / 一 + / 牛一+ 酸气糖塘醉氢红 产产 糖糖露化基 萄萄 葡葡蔗乳甘硫甲 注: +阳性; 一阴 性; +/ 一多数阳 性， 少数阴性 表 2 副溶血性弧菌主要性状与其他弧菌的鉴别 无盐陈水 泳动 硝酸盐 ，半乳搪昔 鼠李糖 甘露糖 阿拉伯胶糖 肌醉 甘露醉 蔗糖 乳掩 VP 明胶 靛基质 鸟奴酸 精氨酸 赖氮酸 葡萄糖产气 氧化酶 名称 盐陈水， % 6 8 1 0 副榕血性弧菌 V. p a r a h a e m o l y t i c u s 溶燕性弧菌 V . a l g i n o l y t i c u s O , 霍乱弧菌 V. c h o l e r a e O, 非O , 霍乱弧菌 V. c h o l e r a e n o n O, 拟态弧菌 V. mi mi c u s 河弧菌 V . f l u i a l i s 创伤弧菌 V . u u l u i f b u s 梅氏弧菌 V. m e t s c h n i k a a i i 霍利斯弧菌 V h o l l i s a e V. d a ms e l . +d十干d + + +十+ +d ( d )+十+ld +d( d ) + + d 十+( d ) 一+ + d +d d+十+dd+d +d d+ d+d+ +d+dd一d +十 +一d+ 注: 十9 0 %以上阳性， 一9 0 %以上阴性; d 1 1 %-8 9 %阳性认十) 迟缓阳性; ( d ) 1 1 % -8 9 编迟缓阳性. 7 动物试验 将上述各类反应的副溶血性弧菌接种3 . 5 氯化钠陈水， 经3 7 0C 1 6 -1 8 h 培养后， 小鼠腹腔注射 。 ， 3 m L ， 观察2 - - 3 d ， 将死