GBT14931.2-1994畜禽肉中己烯雌酚的测定方法.pdf

中华 人 民共 和 国 国 家标 准 G B / T 1 4 9 3 1 . 2 一 9 4 畜禽肉中己烯雌酚的测定方法 Me t h o d f o r d e t e r mi n a t i o n o f d i a e t h y l s t i l b e s t r o l i n f l e s h 1 主题内容与适用范围 本标准规定了用高效液相色谱( H P L C ) 方法测定畜禽肉中己 烯雌酚残留。 本标准适用于新鲜鸡肉、 牛肉、 猪肉、 羊肉中己 烯雌酚残留量测定。最小检出限1 . 2 5 n g ( 取样5 g 时， 最小检出浓度0 . 2 5 m g / k g ) , 2 原理 样品匀浆后， 经甲醇提取过滤， 注入H P L C柱中， 经紫外检测器鉴定。 于波长2 3 0 nn 处测定吸光度 同条件下绘制工作曲线， 已烯雌酚含量与吸光度值在一定浓度范围内成正比， 样品与工作曲线比较定 量。 3 试荆 使用的试剂一般系分析纯， 有机溶剂需过。 . 5 p m F H滤膜， 无机试剂需过0 . 4 5 p m滤膜。 3 . 1 甲醇 3 . 2 0 . 0 4 3 m o l / 1 . 磷酸二氢钠( N a H , P O , 2 H 0 ) 取1 g 磷酸二氢钠溶于水成5 0 0 m L , 3 . 3 磷酸 3 . 4 己烯雌酚( D E S ) 标准溶液: 精密称取1 0 0 m g己 烯雌酚( D E S ) 溶于甲醇， 移入 1 0 0 M L容量瓶中， 加甲 醇至刻度， 混匀， 每毫升含D E S I . 0 m g , 贮于冰箱中。 3 . 5 己 烯雌酚( D E S ) 标准使用液: 吸取1 0 . 0 0 m L D E S 贮备液， 移入1 0 0 m L容量瓶中， 加甲 醇至刻度， 混匀， 每 毫升 含D E S 1 0 0 p g e 4 仪器 高效液相色谱仪: 具紫外检测器。 小型绞肉机。 小型粉碎机。 电动振荡机。 离心机。 414.24.34.44.5 5 操作方法 5 门提取及净化 称取5 g(10. 1 g ) 绞碎( d 、 于5 m m ) 肉样品， 放入5 0 m L具塞离心管中， 加1 0 . 0 0 m L甲醇， 充分搅 拌， 振荡2 0 m i n ， 于3 0 0 0 r / m i n 离心1 0 m i n ， 将上清液移出， 残渣中再加1 0 . 0 0 m L甲醇， 混均后振荡 2 0 m i n ， 于3 0 0 0 r / m i n 离心1 0 m i n ， 合并上清液， 此时出现混浊， 需再离心1 0 m i n ， 取上清液过0 . 5 p m 中华人民共和国卫生部 1 9 9 4 一 0 1 一 2 4 批准 1 9 9 4 一 0 s 一 0 1 实施 G B / T 1 4 9 3 1 . 2 一 9 4 F H滤膜， 备用。 5 . 2 色谱条件 5 . 2 . 1 紫外检测器检测波长2 3 0 n m, 5 . 2 . 2 灵敏度: 0 . 0 4 A UF S , 5 . 2 . 3 流动相: 甲醇 : 0 . 0 4 3 m o l / L磷酸二氢钠; 7 0 / 3 0 ， 用磷酸调p H=5 ( 其中N a H , P O , 2 H 2 0水溶 液需过0 . 4 5 p m滤膜) 。 5 . 2 . 4 流速: 1 m L / m i n , 5 . 2 . 5 进样量: 2 0 p L . 5 . 2 . 6 色谱柱: C L C - O D S - C l 8 ( 5 ) a m) 6 . 2 m m X1 5 0 m m不锈钢柱。 5 . 2了 柱温: 室温。 5 . 3 工作曲线绘制 称取5 份( 每份5 . 0 g ) 纹碎的肉样品， 放入5 0 m L具塞离心管中， 分别加入不同浓度的标准液 ( 6 . 0 , 1 2 . 0 , 1 8 . 0 , 2 4 . 0 p g / m L ) 各1 . 0 m L ， 同时做空白。 其中甲醇总量为2 0 . 0 0 m L ， 使其测定浓度为 0 . 0 0 , 0 . 3 0 , 0 . 6 0 , 0 . 9 0 , 1 . 2 0 k g / m L ， 按5 . 1 处理方法提取备用。 5 ， 4 测定 分别取样2 0 p L ， 注入H P L C柱中， 可测得不同浓度D E S 标准溶液峰高， 以D E S 浓度对峰高绘制工 作曲线， 同时取样液2 0 I L , 注人H P L C柱中， 测得的峰高从工作曲线图中查相应含量， R t = 8 . 2 3 5 0 5 . 5 计算 A X 1 0 0 0 式中: X 样品中己 烯雌酚含量， m g / k g ; A 进样体积中己烯雌酚含量, n g ; 。 样品的质量， g ; V 2 进样体积， p L ; V , 样品甲醇提取液总体积， mL , 5 . 6 色谱图 2 . 7 1 8 ( 1 ) 4 . 3 4 ( 2 ) 8 . 3( 3 ) ( 1 ) 一溶剂峰; ( 2 ) 一杂质峰; ( 3 ) 一己烯雌酚标准品峰 c B / T 1 4 9 3 1 . 2 一9 4 附加说明: 本标准由卫