GB4789.3-1994食品卫生微生物学检验大肠菌群测定.pdf

中华 人民 共 和 国国 家标 准 食 品 卫 生 微 生 物 学 检 验 大 肠 菌 群 测 定 G B 4 7 8 9 . 3 一 9 4 代替 G B 4 7 8 9 . 3 -8 4 Mi c r o b i o l o g i c l e x a m i n a t i o n o f f o o d h y g i e n e D e t e c t i o n o f C o l i J o r m b a c t e r i a 1 主题内容与适用范围 本标准规定了食品中大肠菌群的测定方法。 本标准适用于食品中大肠菌群的测定。 2 术语 大肠菌群系指一群能发酵乳糖、 产酸产气、 需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来 源于人畜粪便， 故以此作为粪便污染指标来评价食品的 卫生质量， 推断食品中 有否污染肠道致病菌的可 能。 食品中大肠菌群数系以1 0 0 m L ( g ) 检样内 大肠菌群最可能数( M P N ) 表示。 3 3 1 用标准 G B 4 7 8 9 . 2 8 食品卫生微生物学检验染色法、 培养基和试剂 4 设备和材料 4 . 1 温箱: 3 6 士1 0C。 4 . 2 冰箱 。 -4 C. 4 . 3 恒温水浴: 4 4 . 5 士。5 。 4 . 4 天平。 4 . 5 显微镜。 4 . 6 均质器或乳钵。 车了 平皿: 直径为9 0 m m. 4 . 8 试管。 4 . 9 吸管。 4 . 1 0 广口 瓶或三角烧瓶: 容量为5 0 0 m L o 4 . 们 玻璃珠: 直径约5 m m, 4 . 1 2 载玻片。 4 . 1 3 酒精灯。 4 . 1 4 试管架。 中华人民共和国卫生部1 9 9 4 一 0 3 一 1 8 批准 1 9 9 4 一 0 9 一 0 1 实施 G B 4 7 8 9 . 3 一 9 4 5 培养墓和试荆 5 . 1 乳搪胆盐发酵管: 按G B 4 7 8 9 . 2 8 中4 . 9 规定。 5 . 2 伊红美蓝琼脂平板: 按G B 4 7 8 9 . 2 8 中4 . 2 5 规定。 5 . 3 乳糖发醉管: 按G B 4 7 8 9 . 2 8 中4 . 1 0 规定。 5 . 4 E C肉汤: 按G B 4 7 8 9 . 2 8 中4 . 1 1 规定。 5 . 5 磷酸盐缓冲稀释液: 按G B 4 7 8 9 . 2 8 中3 . 2 2 规定。 5 . 6 生理盐水。 5 . 7 革兰氏染色液: 按G B 4 7 8 9 . 2 8 中2 . 2 规定。 6 检验程序 大肠菌群检验程序如下: 7 操作步骏 了 . 1 检样稀释 7 . 1 . 1 以无菌操作将检样2 5 m L ( 或9 ) 放于含有2 2 5 m L 灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内 G B 4 7 8 9 . 3 一 9 4 ( 瓶内予置适当数量的玻璃珠) 或灭菌乳钵内， 经充分振摇或研磨做成1 : 1 0 的均匀稀释液。 固体检样最 好用均质器， 以8 0 0 0 - 1 0 0 0 0 r / m i n 的速度处理 1 m i n ， 做成 1 : 1 0 的均匀稀释液。 7 . 1 . 2 用1 m L灭菌吸管吸取1 : 1 0 稀释液1 m L ， 注入含有9 m L灭菌生理盐水或其他稀释液的试管 内， 振摇试管混匀， 做成1 : 1 0 0 的稀释液。 7 . 1 . 3 另取 1 m L灭菌吸管， 按上条操作依次做 1 0 倍递增稀释液， 每递增稀释一次， 换用 1 支 1 m L灭 菌吸管。 7 . 1 . 4 根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计， 选择三个稀释度， 每个稀释度接种3 管。 了 . 2 乳糖发酵试验 将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内， 接种量在1 m L以上者， 用双料乳糖胆盐发酵管 1 m L及 1 m l 以下者， 用单料乳糖胆盐发酵管。 每一稀释度接种3 管， 置3 6 士1 C 温箱内， 培养2 4 士2 h ， 如所有乳 糖胆盐发酵管都不产气， 则可报告为大肠菌群阴性， 如有产气者， 则按下列程序进行。 了 . 3 分离培养 将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上， 置3 6 11 0C 温箱内， 培养1 8 - 2 4 h ， 然后取出， 观 察菌落形态， 并做革兰氏 染色和证实试验。 7 . 4 证实试验 在上述平板上， 挑取可疑大肠菌群菌落1 “ 2 个进行革兰氏染色， 同时接种乳糖发酵管， 置3 6 士1 0C 温箱内 培养2 4 士2 h 、 观察产气情况。 凡乳糖管产气、 革兰氏染色为阴 性的无芽胞杆菌， 即可报告为大肠 菌群阳性。 了 . 5 报告 根据证实为大肠菌群阳性的管数， 查M P N检索表， 报告每1 0 0 m L ( g ) 大肠菌群的MP N值。 8 龚大肠菌群( f a e c a l c o l i f o r m ) 8 . ， 用接种环将所有产气的乳搪胆盐发酵管培养物( 见7 . 2 条) 转种于E C肉汤管内， 置4 4 . 5 士。 . 2 “C 水浴箱内( 水浴箱内的水面应高于 E C肉汤液面) 。 培养 2 4 士2 h , 经培养后， 如所有E C肉汤管均不产 气， 则可报告为阴性; 如有产气者， 则将所有产气的E C肉汤管分别转种于伊红美蓝琼脂平板上， 置3 6 士 1 培养1 8 2 4 h , 凡平板上有典型菌落者， 则证实为粪大肠菌群阳性。 8 . 2 结果报告 根据证实为粪大肠菌群的阳 性管数， 查MP N检索表， 报告每1 0 0 m L ( g ) 粪大肠菌群的M P N值。 大肠菌群最可能数( MP N) 检索表 阳性管数 M PN 1 0 0 m L ( g ) 9 5 %可信限 下限上限 1 m L ( g ) X30 . 1 mL ( g ) X3 0 . 0 1 -L ( g ) X3 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 2 3 3 0 3 0 6 0 9 0 59 0 0 0 0 0 1 1 1 1 0 I 2 3 3 0 6 0 9 0 1 2 0 5 1 3 0 G B 4 7 8 9 . 3 一 9 4 续表 阳性管数 MP N 1 0 0 - L ( g ) 9 6 %可信限 1 m L ( g ) X30 . 1 mL ( g ) X3 0 . 0 1 -L ( g ) X3下限上限 0 0 0 0 2 2 2 2 0 1 2 3 6 0 9 0 1 2 0 1 6 0 0 0 0 0 3 3 3 3 0 1 2 3 9 0 1 3 0 1 6 0 1 9 0 1 1 1 1 0 0 0 0 0 1 2 3 4 0 7 0 1 1 0 1 5 0 G 510: 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 2 3 7 0 1 1 0 1 5 0 1 9 0 : 1 1 1 1 2 2 2 2 0 1 2 3 1 1 0 1 5 0 2 0 0 2 40 3 0 3 6 0 1 1 1 1 3 3 3 3 0 1 2 3 1 6 0 2 0 0 2 4 0 2 9 0 2 2 2 2 0 0 0 0 0 1 2 3 9 0 1 4 0 2 0 0 2 6 0 ;: 2 2 2 2 1 1 1 1 0 1 2 3 1 5 0 2 0 0 2 7 0 3 4 0 :;: 4 6 0 G s 4 7 8 9 . 3 一9 4 续表 阳性管数 MPN 1 0 0 m L ( g ) 9 5 % 可信限 1 m L ( g ) X30 . 1 mL ( g ) X30 . 0 1 m L ( g ) X3 下限上限 2 2 2 2 2 2 2 2 0 1 2 3 2 1 0 2 8 0 3 5 0 4 2 0 4010014701 500 2 2 2 2 3 3 3 3 0 1 2 3 2 9 0 3 6 0 4 4 0 5 3 0 3 3 3 3 0 0 0 0 0 1 2 3 2 3 0 3 9 0 6 4 0 9 5 0 4 0 7 0 1 5 0 1 2 0 0 1 3 0 0 3 8 0 0 3 3 3 3 1 1 1 1 0 1 2 3 4 3 0 7 5 0 1 2 0 0 1 6 0 0 7 0 1 4 0 3 0 0 2 1 0 0 2 3 0 0 3 8 0 0 3 3 3 3 2 2 2 2 0 1 2 3 9 30 1 5 0 0 2 1 0 0 2 9 0 0 1 5 0 3 0 0 3 5 0 3 8 0 0 4 4 0 0 4 7 0 0 3 3 3 3 3 3 3 3 0 1 2 3 2 4 0 0 4 6 0 0 1 1 0 0 0 2 4 0 0 0 3 6 0 7 1 0 1 5 0 0 1 3 0 0 0 2 4 0 0 0 4 8 0 0 0 注 本表采用3 个稀释度C l - L ( g ) , 0 . 1 m L ( g ) 和0 . 0 1 m L ( g ) ) ， 每稀释度3 管. 表内所列检样f如改用1 0 m L ( g ) , 1 m L ( g ) 和 。 . 1 m