GB5009.279-2016食品安全国家标准食品中木糖醇、山梨醇、麦芽糖醇、赤藓糖醇的测定.pdf

中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准G B5 0 0 9.2 7 92 0 1 6食品安全国家标准食品中木糖醇、 山梨醇、麦芽糖醇、 赤藓糖醇的测定2 0 1 6 - 1 2 - 2 3发布2 0 1 7 - 0 6 - 2 3实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会国 家 食 品 药 品 监 督 管 理 总 局发 布G B5 0 0 9.2 7 92 0 1 6 前 言 本标准代替G B/T2 2 2 2 22 0 0 8 食品中木糖醇、 山梨醇、 麦芽糖醇的测定 高效液相色谱法 。本标准与G B/T2 2 2 2 22 0 0 8相比, 主要变化如下: 标准名称修改为“ 食品安全国家标准 食品中木糖醇、 山梨醇、 麦芽糖醇、 赤藓糖醇的测定” ; 修改了样品前处理方法; 增加了第二法高效液相色谱-蒸发光散射检测法; 增加了食品中赤藓糖醇的检测。G B5 0 0 9.2 7 92 0 1 61 食品安全国家标准食品中木糖醇、 山梨醇、麦芽糖醇、 赤藓糖醇的测定1 范围本标准规定了口香糖、 饼干、 糕点、 面包、 饮料中木糖醇、 山梨醇、 麦芽糖醇、 赤藓糖醇的高效液相色谱-示差折光检测和蒸发光散射检测测定方法。本标准适用于口香糖、 饼干、 糕点、 面包、 饮料中木糖醇、 山梨醇、 麦芽糖醇、 赤藓糖醇含量的测定。第一法 高效液相色谱-示差折光检测法2 原理试样经沉淀蛋白质后过滤, 上清液进高效液相色谱仪, 经氨基色谱柱或阳离子交换色谱柱分离, 示差折光检测器检测, 外标法定量。3 试剂和材料除非另有说明, 本方法所用试剂均为分析纯, 水为G B/T6 6 8 2规定的一级水。3.1 试剂3.1.1 乙腈(CH3C N) : 色谱纯。3.1.2 三氯乙酸(C C l3C OOH) 。3.1.3 无水碳酸钠(N a2C O3) 。3.2 试剂配制3.2.1 三氯乙酸溶液(1 0 0g/L) : 称取1 0g三氯乙酸, 加水溶解并定容至1 0 0m L。3.2.2 碳酸钠溶液(2 1.2g/L) : 称取2.1 2g碳酸钠, 加水溶解并定容至1 0 0m L, 现用现配。3.3 标准品3.3.1 木糖醇(C5H1 2O5,C A S号:8 7 - 9 9 - 0) , 纯度9 9%, 或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。3.3.2 山梨醇(C6H1 4O6,C A S号:5 0 - 7 0 - 4) , 纯度9 9%, 或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。3.3.3 麦芽糖醇(C1 2H2 4O1 1,C A S号:5 8 5 - 8 8 - 6) , 纯度9 9%, 或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。3.3.4 赤藓糖醇(C4H1 0O4,C A S号:1 4 9 - 3 2 - 6) , 纯度9 9%, 或经国家认证并授予标准物质证书的标准G B5 0 0 9.2 7 92 0 1 62 物质。3.4 标准溶液配制3.4.1 标准储备液(4 0m g/m L) : 分别称取4 0 0m g( 精确至0.1m g) 木糖醇、 山梨醇、 麦芽糖醇、 赤藓糖醇标准品, 加水定容至1 0m L, 放置4密封可贮藏1个月。3.4.2 标准工作液: 分别准确移取各种糖醇标准储备液4 0L、6 0L、8 0L、1 0 0L、1 2 0L、1 5 0L,加水定容至1m L, 配制成质量浓度分别为1.6m g/m L、2.4m g/m L、3.2m g/m L、4.0m g/m L、4.8m g/m L、6.0m g/m L的混合系列标准工作溶液。4 仪器和设备4.1 高效液相色谱仪: 具有示差折光检测器。4.2 色谱柱: 氨基色谱柱( 内径4.6mm, 柱长2 5 0mm, 粒径5m) 或阳离子交换色谱柱( 内径6.5mm,柱长3 0 0mm) 。4.3 食品粉碎机。4.4 分析天平: 感量为0.1m g、0.0 1g。4.5 高速离心机: 转速95 0 0r/m i n。4.6 超声波清洗机: 工作频率4 0k H z, 功率5 0 0W。5 分析步骤5.1 试样制备及前处理5.1.1 口香糖取口香糖样品至少2 0g, 用刀片切成小碎块, 置于密闭的容器内混匀。准确称取2g左右切碎的样品, 置于5 0m L离心管中, 加入4 0m L水, 混匀后置于8 0 水浴锅中加热2 0m i n, 每隔5m i n振荡混匀, 取出后90 0 0r/m i n离心1 0m i n。取8m L上清液置于1 0m L容量瓶中, 加水定容、 摇匀,0.2 2m滤膜过滤后, 上机测试。5.1.2 饮料对非蛋白饮料类, 取样品至少2 0 0m L, 充分混匀, 置于密闭的容器内。称取1 0g饮料于5 0m L容量瓶中, 加水定容至5 0m L, 摇匀,0.2 2m滤膜过滤后, 上机测试。对蛋白饮料类, 取样品至少2 0 0g, 置于密闭的容器内混匀。称取样品5g, 置于5 0m L容量瓶中,加入3 5m L水, 摇匀后超声3 0m i n, 每隔5m i n振荡混匀, 取出后90 0 0r/m i n离心1 0m i n。沉淀蛋白质: 上清液中加入三氯乙酸溶液(1 0 0g/L)5m L, 摇匀后室温放置3 0m i n,95 0 0r/m i n离心1 0m i n。 取8m L上清液于1 0m L容量瓶中并加水定容, 摇匀后取滤液8 5 0L, 加入碳酸钠溶液(2 1.2g/L)1 5 0L, 摇匀中和; 或取1 0m L上清液加入2 0m L乙腈, 摇匀后室温放置3 0m i n,95 0 0r/m i n离心1 0m i n, 上清定容至5 0m L, 摇匀。0.2 2m的微孔滤膜过滤, 上机测试。注:对糖醇含量较低, 经乙腈沉淀稀释后低于检出限的样品, 应采用三氯乙酸沉淀。对赤藓糖醇含量较低(1%)的样品, 应采用乙腈沉淀。其他情况两种方法均可。5.1.3 饼干、 糕点、 面包取样品至少2 0 0g, 用粉碎机粉碎, 置于密闭的容器内混匀。称取粉碎的样品1g 5g, 置于5 0m LG B5 0 0 9.2 7 92 0 1 63 离心管中, 加入4 0m L水, 摇匀后超声3 0m i n, 每隔5m i n振荡混匀, 取出后90 0 0r/m i n离心1 0m i n。沉淀蛋白质: 上清液中加入三氯乙酸溶液5m L, 摇匀后室温放置3 0m i n,95 0 0r/m i n离心1 0m i n。取8m L上清液于1 0m L容量瓶中并加水定容, 摇匀后取滤液8 5 0L, 加入碳酸钠溶液1 5 0L, 摇匀中和; 或取1 0m L上清液加入2 0m L乙腈, 摇匀后室温放置3 0m i n,95 0 0r/m i n离心1 0m i n, 上清定容至5 0m L, 摇匀。0.2 2m滤膜过滤后, 上机测试。注:对糖醇含量较低, 经乙腈沉淀稀释后低于检出限的样品, 应采用三氯乙酸沉淀。对赤藓糖醇含量较低(1%)的样品, 应采用乙腈沉淀。其他情况两种方法均可。5.2 仪器参考条件5.2.1 氨基色谱柱的仪器条件氨基色谱柱的仪器条件列出如下:a) 色谱柱: 氨基柱, 柱长2 5 0mm, 内径4.6mm, 粒径5m, 或等效柱;b) 柱温:3 0;c) 流动相: 乙腈水=8 02 0;d) 流速:1.0m L/m i n;e) 进样量:2 0L;f) 检测池温度:3 0。5.2.2 阳离子交换色谱柱的仪器条件阳离子交换色谱柱的仪器条件列出如下:a) 色谱柱: 阳离子交换柱, 柱长3 0 0mm, 内径6.5mm, 或等效柱;b) 柱温:8 0;c) 流动相: 水或与色谱柱匹配的酸性水溶液;d) 流速:0.5m L/m i n;e) 进样量:2 0L;f) 检测池温度:5 0。5.3 标准曲线的制作将2 0L标准系列工作液分别注入高效液相色谱仪中, 在5.2所述色谱条件下测定标准溶液的响应值( 峰面积) , 以标准工作液的浓度为横坐标, 以响应值( 峰面积) 为纵坐标, 绘制标准曲线。5.4 试样溶液的测定将2 0L试样溶液注入高效液相色谱仪中, 在5.2所述色谱条件下测定试样的响应值( 峰面积) , 通过各个糖醇的色谱峰的保留时间定性。根据峰面积由标准曲线得到试样溶液中木糖醇、 山梨醇、 麦芽糖醇、 赤藓糖醇的浓度。6 分析结果的表述试样中糖醇含量按式(1) 计算:X=Vm10 0 01 0 0(1) 式中:X 试样中木糖醇、 山梨醇、 麦芽糖醇、 赤藓糖醇的含量,%;G B5 0 0 9.2 7 92 0 1 64 由标准曲线获得的试样溶液中木糖醇、 山梨醇、 麦芽糖醇、 赤藓糖醇的浓度, 单位为毫克每毫升(m g/m L) ;V 水溶液总体积, 单位为毫升(m L) ;m 试样的质量, 单位为克(g) ;10 0 0 换算系数。计算结果保留两位有效数字。7 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的1 0%。8 其他本方法对木糖醇、 山梨醇、 麦芽糖醇、 赤藓糖醇的检出限均为0.4g/1 0 0g, 定量限均为1.3g/1 0 0g。第二法 高效液相色谱-蒸发光散射检测法9 原理试样经沉淀蛋白质后过滤, 上清液进高效液相色谱仪, 经氨基色谱柱分离, 蒸发光散射检测器检测,外标法定量。1 0 试剂和材料除非另有说明, 本方法所用试剂均为分析纯, 水为G B/T6 6 8 2规定的一级水。1 0.1 试剂1 0.1.1 乙腈(CH3C N) : 色谱纯。1 0.1.2 三氯乙酸(C C l3C OOH) 。1 0.1.3 无水碳酸钠(N a2C O3) 。1 0.2 试剂配制1 0.2.1 三氯乙酸溶液(1 0 0g/L) : 称取1 0g三氯乙酸, 加水溶解并定容至1 0 0m L。1 0.2.2 碳酸钠溶液(2 1.2g/L) : 称取2.1 2g碳酸钠, 加水溶解并定容至1 0 0m L, 现用现配。1 0.3 标准品1 0.3.1 木糖醇(C5H1 2O5,C A S号:8 7 - 9 9 - 0) , 纯度9 9%, 或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。1 0.3.2 山梨醇(C6H1 4O6,C A S号:5 0 - 7 0 - 4) , 纯度9 9%, 或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。1 0.3.3 麦芽糖醇(C1 2H2 4O1 1,C A S号:5 8 5 - 8 8 - 6) , 纯度9 9%, 或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。G B5 0 0 9.2 7 92 0 1 65 1 0.3.4 赤藓糖醇(C4H1 0O4,C A S号:1 4 9 - 3 2 - 6) , 纯度9 9%, 或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。1 0.4 标准溶液配制1 0.4.1 标准储备液: 分别准确称取木糖醇2 5m g、 山梨糖醇2 5m g、 麦芽糖醇2 5m g、 赤藓糖醇3 5m g,精确至0.1m g, 加水定容至1 0m L, 每毫升溶液含相当于3.5m g赤藓糖醇、2.5m g木糖醇、2.5m g山梨醇、2.5m g麦芽糖醇, 放置4密封可贮藏1个月。1 0.4.2 标准工作液: 分别准确移取各种糖醇标准储备液4 0L、6 0L、8 0L、1 0 0L、1 2 0L、1 4 0L,加水定容 至1 m L, 赤 藓 糖 醇 配 制 成 质 量 浓 度 分 别 为0. 1 4 m g/m L、0. 2 1 m g/m L、0. 2 8 m g/m L、0.3 5m g/m L、0.4 2m g/m L、0.4 9m g/m L的混合系列标准工作溶液, 木糖醇、 山梨醇和麦芽糖醇配制成质量浓度分别为0.1 0m g/m L、0.1 5m g/m L、0.2 0m g/m L、0.2 5m g/m L、0.3 0m g/m L、0.3 5m g/m L的混合系列标准工作溶液。1 1 仪器和设备1 1.1 高效液相色谱仪: 具有蒸发光散射检测器。1 1.2 色谱柱: 氨基色谱柱, 柱长2 5 0mm, 内径4.6mm, 粒径5m, 或等效柱。1 1.3 食品粉碎机。1 1.4 分析天平: 感量为0.1m g、0.0 1g。1 1.5 高速离心机: 转速95 0 0r/m i n。1 1.6 超声波清洗机: 工作频率4 0k H z, 功率5 0 0W。1 2 分析步骤1 2.1 试样制备及前处理1 2.1.1 口香糖取口香糖样品至少2 0g, 用刀片切成小碎块, 置于密闭的容器内混匀。准确称取2g左右切碎的样品, 置于5 0m L离心管中, 加入4 0m L水, 混匀后置于8 0 水浴锅中加热2 0m i n, 每隔5m i n振荡混匀, 取出后90 0 0r/m i n离心1 0m i n。取8m L上清液置于1 0m L容量瓶中, 加水定容、 摇匀,0.2 2m滤膜过滤后, 稀释后上机测试。1 2.1.2 饮料对非蛋白饮料类, 取样品至少2 0 0m L, 充分混匀, 置于密闭的容器内。称取1 0g饮料于5 0m L容量瓶中, 加水定容至5 0m L, 摇匀,0.2 2m滤膜过滤后, 稀释后上机测试。对蛋白饮料类, 取样品至少2 0 0g, 置于密闭的容器内混匀。称取样品5g, 置于5 0m L容量瓶中,加入3 5m L水, 摇匀后超声3 0m i n, 每隔5m i n振荡混匀, 取出后90 0 0r/m i n离心1 0m i n。沉淀蛋白质: 上清液中加入三氯乙酸溶液(1 0 0g/L)5m L, 摇匀后室温放置3 0m i n,95 0 0r/m i n离心1 0m i n。 取8m L上清液于1 0m L容量瓶中并加水定容, 摇匀后取滤液8 5 0L, 加入碳酸钠溶液(2 1.2g/L)1 5 0L, 摇 匀 中 和; 或 取1 0 m L上 清 液 加 入2 0 m L乙 腈, 摇 匀 后 室 温 放 置3 0 m i n,95 0 0r/m i n离心1 0m i n, 上清定容至5 0m L, 摇匀。0.2 2m的微孔滤膜过滤, 稀释后上机测试。注:对糖醇含量较低, 经乙腈沉淀稀释后低于检出限的样品, 应采用三氯乙酸沉淀。对赤藓糖醇含量较低(1%)的样品, 应采用乙腈沉淀。其他情况两种方法均可。G B5 0 0 9.2 7 92 0 1 66 1 2.1.3 饼干、 糕点、 面包取样品至少2 0 0g, 用粉碎机粉碎, 置于密闭的容器内混匀。称取粉碎的样品1g 5g, 置于5 0m L离心管中, 加入4 0m L水, 摇匀后超声3 0m i n, 每隔5m i n振荡混匀, 取出后90 0 0r/m i n离心1 0m i n。沉淀蛋白质: 上清液中加入三氯乙酸溶液5m L, 摇匀后室温放置3 0m i n,95 0 0r/m i n离心1 0m i n。取8m L上清液于1 0m L容量瓶中并加水定容, 摇匀后取滤液8 5 0L, 加入碳酸钠溶液1 5 0L, 摇匀中和; 或取1 0m L上清液加入2 0m L乙腈, 摇匀后室温放置3 0m i n,95 0 0r/m i n离心1 0m i n, 上清定容至5 0m L, 摇匀。0.2 2m滤膜过滤后, 稀释后上机测试。注:对糖醇含量较低, 经乙腈沉淀稀释后低于检出限的样品, 应采用三氯乙酸沉淀。对赤藓糖醇含量较低(1%)的样品, 应采用乙腈沉淀。其他情况两种方法均可。1 2.2 仪器参考条件仪器参考条件列出如下:a) 色谱柱: 氨基柱, 柱长2 5 0mm, 内径4.6mm, 粒径5m, 或等效柱;b) 柱温:3 0;c) 流动相: 乙腈水=8 02 0;d) 流速:1.0m L/m i n;e) 进样量:1 0L;f) 漂移管温度:8 3.5;g) 雾化气流速:2.1L/m i n。1 2.3 标准曲线的制作将1 0L标准系列工作液分别注入高效液相色谱仪中, 在所述色谱条件下测定标准溶液的响应值( 峰面积) , 以标准工作液的浓度的以1 0为底的对数值为横坐标, 以响应值( 峰面积) 的以1 0为底的对数值为纵坐标, 绘制标准曲线。1 2.4 试样溶液的测定将1 0L试样溶液注入高效液相色谱仪中, 在所述色谱条件下测定试样的响应值( 峰面积) , 通过各个糖醇的色谱峰在色谱