SN 0284-1993 出口禽肉中癸氧喹酯残留量检验方法荧光法.pdf

SI I 中华人民共和国进出口商品检验行业标准 s N 0 2 8 4 一 9 3 出口禽肉中癸氧喳醋残留量检验方法 荧光法 Me t h o d f o r t h e d e t e r mi n a t i o n o f d e c o q u i n a t e r e s i d u e s i n p o u l t r y m e a t f o r e x p o r t - F l u o r o me t r i c me t h o d 1 9 9 3 一 1 2 一 2 8 发布1 9 9 4 一 0 5 一 0 1 实施 中华人民共和国国家进出口 商品检验局发 布 中华人民共和国进出口 商品检验行业标准 出口禽肉中癸氧喳醋残留量检验方法 荧光法 S N 028 4一 93 Me t h o d f o r t h e d e t e r mi n a t i o n o f d e c o q u i n a t e r e s i d u e s i n p o u l t r y me a t f o r e x p o r t - F l u o r o me t r i c m e t h o d 主题内容与适用范围 本标准规定了出口禽肉中癸氧哇醋残留量检验的抽样、 制样和荧光法测定方法。 本标准适用于出口鸡肉中癸氧哇酷残留量的检验。 抽样和制样 2 . 1 检验批 以不超过 2 5 0 0 件为一检验批。 同一检验 批的 商品 应具有相同的特征， 如包装、 标记、 产地、 规格和等级等。 2 . 2 抽样数量 批量， 件最低抽样数， 件 1 - 2 5 1 2 6 1 0 0 5 1 0 1 2 5 0 1 0 2 5 1 - 5 0 0 1 5 5 0 1 - 1 0 0 0 1 7 1 0 0 1 2 5 0 0 2 0 2 . 3 抽样方法 按2 . 2 规定的抽 样件数随机抽取， 逐件开启。 每件取5 0 0 g ( 或一袋) 作为原始样品， 原始样品总量不 得少于Z k g . 加封后， 标明 标记， 及时送实验室。 2 . 4 试样制备 将所取原始 样品 缩分出1 k g ， 取可食部分， 经组织捣碎机捣碎， 均分成两份， 装入洁净容器内， 作为 试样。密封， 并标明标记。 2 . 5 试样保存 将试样于一1 s 以下冷冻保存。 注: 在抽样和制样的操作过程中， 必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化. 测定方法 方法提要 试样在甲醉一 三氯甲烷中匀浆， 加入偏磷酸后， 癸氧哇醋被提取到三氯甲烷中， 在弗罗里硅土层析柱 中华人民共和国国家进出口商品检验局1 9 9 3 - 1 2 - 2 8 批准 1 9 9 4 一 0 5 一 0 1 实施 I S N 028 4一 93 上与干扰物质分离， 用氯化钙一 甲醉溶液洗脱往上的癸氧哩酷， 荧光法测定。 3 . 2 试剂和材料 3 . 2 . 1 甲醇: 分析纯 ， 重蒸馏， 收集 6 4 6 5 0C 馏分。 3 . 2 . 2 三盆甲烷: 分析纯， 重蒸馏. 3 . 2 . 3 无水氯化钙: 分析纯。 3 . 2 . 4 偏磷酸: 分析纯。 I2 . 5 甲醇一 三氯甲烷( 4 +1 ) , 3 . 2 . 6 洗脱 液: 将1 0 g 无水氯化钙 溶解于1 L 重燕馏甲 醉中， 放置2 4 h 。 取澄清液备 用。 3 . 2 . 7 偏磷酸溶液; 将 5 0 g 偏磷酸溶解于 1 L水中。在 5 下冷藏， 使用冷溶液. 3 . 2 - 8 弗罗 里硅土: 1 0 0 2 0 0目， 层析用。 于1 3 0 0C A箱中 活化5 h ， 取出， 放置干燥器中冷却备用。 3 . 2 . 9 癸氧哇醋标准品; 纯度)9 9 X, 3 . 2 . 1 0 癸氧哇醋标准溶液: 准确称取适量的癸xviro标准品， 用三氯甲 烷配成浓度为2 0 0 1 g / m L的 标准储备洛 液， 根据需要再配成适当浓度的标准工作溶液。 3 . 3 仪器和设备 3 . 3 . 1 荧光分光光度计， 配有 1 0 mm荧光比色皿。 3 . 3 . 2 组织捣碎机。 3 ， 3 . 3 刻度试管: 1 5 m L, 具塞。 3 . 34 高速匀浆器 I15 离心管: 5 0 m L， 具塞。 3 . 3 . 6 分液漏斗: 2 5 0 m L , 3 3 . 7 层析住: 玻璃柱， 2 0 0 mm X 1 0 mm( 内径) 。柱底部填少量玻璃棉。柱中加入5 mL三氯甲烷， 然 后加。 . 4 士 。0 1 g 弗罗里硅土。 再加入2 m L 三氯甲 烷并用 细玻璃棒搅动， 用 三氯甲 烷冲洗柱壁。 临使 用前制备。 3 . 4 测定步骤 3 . 4 门提取 称取 试样2 0 g ( 精确到。 1 g ) 于高速匀 浆器中， 加入8 0 士 1 g 甲 醇一 三氯甲 烷( 4 十 1 ) 。 匀浆1 m i n 后 转入离心 管中， 在 约2 0 0 0 r / m i n 下离心5 m i n , 倾出并称 取5 0 g 上清液( 相当于1 0 g 样品) 于2 5 0 m L 分液漏斗中。 加入 1 0 0 mL偏磷酸溶液( 3 . 2 - 7 ) ， 将分液漏斗颠倒 5 0次， 静置分层1 0 min ， 收集三氯甲烷 层 保留水相。 再加人 1 0 m L三氯甲烷于分液漏斗中， 如前摇动和分层。 合并两次三氯甲烷提取液， 加入 2 m L甲醉， 并用三氯甲烷稀释至2 5 mL , 3 . 4 . 2 净化 将2 5 mL提取液加于层析柱中， 用1 0 mL甲醇洗层析柱， 弃去流出液。用1 5 m L洗脱液( 3 . 2 . 6 ) 进 行洗脱， 收集 1 5 m L流出液， 供侧定。 3 . 4 . 3 测 定 3 . 4 . 3 门分光荧光条件 a . 激发波长: 2 6 5 n m; b . 发射波长: 3 9 0 n m, 3 . 4 - 3 . 2 标准曲线的绘制 在4 个2 5 0 m L的分液 漏斗中， 分别加入5 5 m L ( 5 0 g ) 甲 醉一 三氯甲 烷( 4 十1 ) 溶液， 再分别加 入0 . 0 , 0 . 1 , 0 . 3 和0 . 5 m L 标准 S作溶液( 1 0 p g / m L ) ， 其中分别含0 , 1 , 3 和5 K g 癸氧喳酷。 从“ 加入1 0 0 m L 偏 磷酸溶液( 3 . 2 . 7 ) 一 ” 开始按测定步骤操作。 用荧光强度与对应的癸氧喳 酷( t a g / m L ) 绘制标准曲 线。 3 . 4 . 3 . 3 荧光分光测定 测定样液中癸氧哇酷的荧光强度。样液中葵氧喳醋含量应在仪器检测的线性范围内。由标准曲线 s x 0 2 8 4 一9 3 查得样液中癸氧喳酷的浓度( p g / m L ) , 3 . 4 . 4 空白试验 除不加试样外， 按上述测定步骤进行. 3 . 5 结果计算和表述 按下式计算试样中癸氧喳酷残留含量: x二 二 二 式中: x 试样中 癸氧哇醋残留量, m g / k g ; c 样液中 癸氧哇酷的浓度， p g / m L ; V 样液最终定容体积, mL ; 二 最终样液所代表的试样量, g . 注: 计算结果需扣除空白值。 方法的测定低限、 回收率 4 . 1 测定低限 本方法的测定低限为0 . 1 m g / k g , 4 . 2 回收率 回收率的实验数据: 癸氧哇酷的添加浓度在0 . 1 0 - 0 . 5 0 m g / k g范围内. 回收率为8 0 . 0 %- 1 0 6 . 0 %. 附加说明: 本标准由中华人民共和国国家进出口商品检验局提出。 本标准由中华人民共和国浙江进出口商品检验局负责起草。 本标准主要起草人郑自 强、 徐亮、 唐红芳。 参考文献 : Of f ic i a l Me t h o d s o f An a ly s i s o f t h e As s o c i a t io n o f O f f i c i a l A n a l y t ic a l C h e m i s t s , 1 5 t h e d i t io n , 9 7 3 . 7 9, 1 9 9 0 . P r o f e s s i o n a l S t a n d a r d o f t h e P e o p l e s R e p u b l i c o f C h f o r I mp o r t a n d E x p o r t C o mm o d i t y I n s p e c t i o n I n a Me t h o d f o r t h e d e t e r mi n a t i o n o f d e c o q u i n a t e s x 0 2 8 4 一9 3 r e s i d u e s i n p o u l t r y m e a t f o r e x p o r t - Fl u o r o me t r i c me t h o d 1 S c o p e a n d f ie l d o f a p p l i c a t i o n T h i s s t a n d a r d s p e c i f ie s t h e me t h o d s o f s a mp l i n g , s a m p l e p r e p a r a t io n a n d d e t e r m i n a t i o n b y f l u o - r o m e t r y o f d e c o q u i n a t e r e s i d u e s i n p o u l t r y me a t f o r e x p o r t . T h is s t a n d a r d i s a p p l ic a b l e t o t h e d e t e r mi n a t i o n o f d e c o q u i n a t e r e s i d u e s i n c h ic k e n m e a t f o r e x - po r t 2 S a mp l i n g a n d s a mp l e p r e p a r a t i o n 2 . 1 I n s p e c t i o n l o t T h e q u a n t i t y o f a n i n s p e c t i o n lo t s h o u l d n o t b e mo r e t h a n 2 5 0 0 p a c k a g e s T h e c h a r a c t e r is t i c s o f t h e c a r g o w i t h in t h e s a m e i n s p e c t io n l o t , s u c h a s p a c k i n g , m a r k , o r i g i n , g r a d e a n d s p e c if i c a t i o n , s h o u l d b e t h e s a m e 2 . 2 Q u a n t i t y o f s a mp l e t a k e n N u m b e r o f p a c k a g e s i n Mi n i mu m n u m b e r o f p a c k a g e s e a c h i n s p e c t io n l o t t o b e t a k e n 1 - 2 5 1 510151720 2 6 -1 00 1 0 1 - 2 5 0 2 5 1 - 5 0 0 5 0 1 一 1 0 0 0 1 0 0 1 - 2 5 0 0 2 . 3 S a mp l i n g p r o c e d u r e A n u mb e r o f p a c k a g e s s p e c i f i e d i n 2 . 2 a r e t a k e n a t r a n d o m a n d o p e n e d o n e b y o n e . T h e s a m p l e w e i g h t t a k e n a s t h e p r i m a r y s a m p l e f r o m e a c h p a c k a g e s h o u l d b e a t l e a s t 5 0 0 g r a m s ( o r o n e b a g ) . T h e t o t a l w e i g h t o f a l l p r ima r y s a m p l e s s h o u l d n o t b e l e s s t h a n 2 k g , w h i c h s h a l l b e s e a le d , l a b e l e d a n d s e n t t o l a b o r a t o r y i n t i me . 2 . 4 P r e p a r a t io n o f t e s t s a mp l e T h e c o m b in e d p r i m a r y s a m p l e is r e d u c e d t o 1 k g , t h e e d i b l e p o r t i o n s a r e b l e n d e d , a n d t h e n d i v id e d A p p r o v e d b y t h e S t a t e A d mi n i s t r a t i o n o f I m p l e me n t e d f r o m Ma y . 1 , 1 9 9 4 I m p o r t a n d E x p o r t C o mm o d it y I n s p e c t i o n o f t h e p e o p l e s R e p u b l i c o f C h i n a o n D e c . 2 $ , 1 9 9 3 S N 028 4-.93 in t o t wo e q u a l p o r t io n s . E a c h p o r t i o n i s p l a c e d i n a c l e a n c o n t a i n e r a s t h e t e s t s a m p l e , w h i c h i s t h e n s e a l e d a n d l a b e l e d . 2 . 5 S t o r a g e o f t e s t s a mp l e T h e t e s t s a m p l e s s h o u ld b e s t o r e d a t b e l o w-1 8 0C. N o t e : I n t h e c o u r s e o f s a mp li n g a n d s a mp le p r e p a r a t i o n ， p r e c a u t i o n mu s t b e t a k e n t o a v o id t h e c o n t a m i n a t io n o r a n y f a c t o r s wh i c h ma y c a u s e t h e c h a n g e o f r e s i d u e c o n t e n t 3 Me t h o d o f d e t e r mi n a t io n 3 . 1 P r i n c i p l e T h e s a mp l e i s h o m o g e n i z e d in m e t h a n o l - c h l o r o f o r m. Af t e r a d d i n g o f me t a p h o s p h o r ic a c i d , d e c o - q u in a t e i s e x t r a c t e d i n t o C H C l , a n d s e p a r a t e d f r o m i n t e r f e r i n g m a t e r i a l s b y c h r o m a t o g r a p h y o n f l o r is i l c o l u m n . D e c o q u i n a t e i s e l u t e d f r o m c o l u mn w i t h c a l c i u m c h lo r i d e - me t h a n o l s o l u t i o n a n d d e t e r m i n e d b y f l u o r o me t r y . 3 . 2 R e a g e n t s a n d ma t e r i a l s 3 . 2 . 1 Me t h a n o l ; A n a l y t i c a l g r a d e , r e d i s t i l l w i t h a l l g l a s s a p p a r a t u s , c o ll e c t t h e d i s t i l l a t e o f 6 4 - 6 5 C . 3 . 2 . 2 C h l o r o f o r m; A n a l y t i c a l g r a d e , r e d i s t il le d . 3 . 2 . 3 A n h y d r o u s c a l c i u m c h l o r i d e , An a l y t i c a l g r a d e . 3 . 2 . 4 M e t a p h o s p h o r i c a c id : A n a l y t i c a l g r a d e . 3 . 2 . 5 Me t h a n o l- c h l o r o f o r m( 4 +1 ) . 12 . 6 E l u t i o n s o l v e n t : D i s s o l v e 1 0 g a n h y d r o u s c a l c i u m c h l o r i d e i n 1 0 0 0 mL o f r e d i s t i l l e d m e t h a n o l . L e t s t a n d 2 4 h . D e c a n t f r o m a n y in s o l u b l e r e s id u e , a n d t h e c l e a r l i q u i d i s u s e d . 12 . Me t a p h o s p h o r i c a c id s o l u t i o n : D i s s o l v e 5 0 g m e t a p h o s p h o r i c a c i d i n 1 0 0 0 mL o f d is t i l l e d w a - t e r . R e f r i g e r a t e a t 5 0C a n d u s e t h e c o l d s o l u t io n . 3 . 2 . 8 F l o r i s i l : 1 0 0 -2 0 0 m e s h , c h r o ma t o g r a p h i c g r a d e . H e a t a t 1 3 0 0C f o r 5 h a n d k e e p i n a t i g h t l y c l o s e d c o n t a i n e r . 3 . 2 . 9 D e c o q u i n a t e s t a n d a r d : P u r i t y _9 9 %. 12 - 1 0 D e c o q u i n a t e s t a n d a r d s o l u t i o n ; A c c u r a t e l y w e i g h a n a d e q u a t e a m o u n t o f d e c o q u in a t e s t a n d a r d , d i s s o l v e i n c h l o r o f o r m a n d p r e p a r e a s o l u t io n o f 2 0 0 p g / m L a s t h e s t a n d a r d s t o c k s o l u t i o n . A c c o r d i n g t o t h e r e q u i r e m e n t , p r e p a r e t h e s t a n d a r d wo r k i n g s o l u t i o n o f a p p r o p r i a t e c o n c e n t r a t i o n . 3 . 3 A p p a r a t u s a n d e q u i p me n t 3 . 3 . 1 S p e c t r o f l u o r o p h o t o me t e r ; E q u i p p e d w i t h 1 0 mm q u a r t z s i l i c a c e l l s . 3 . 3 . 2 H i g h - s p e e d b l e n d e r . 3 . 3 . 3 G r a d u a t e d t e s t - t u b e : 1 5 mL , w i t h g r o u n d s t o p p e r . 3 . 3 . 4 H o m o g e n i z e r . 3 . 3 . 5 C e n t r i f u g e t u b e : 5 0 m L , w i t h g r o u n d s t o p p e r . 3 . 3 . 6 S e p a r a t o r y f u n n e l : 2 5 0 m L . 3 . 3 . 7 C h r o m a t o g r a p h i c c o l u mn : G l a s s c o l u m n , 2 0 0 mm X 1 0 mm ( i d ) . I n s e r t s m a l l a mo u n t g l a s s w o o l i n t h e b o t t o m o f t h e c o l u m n . A d d 5 ml - ,o f c h l o r o f o r m t o c o l u m n a n d t h e n 0 . 4 士0 . 0 1 g o f f l o r i s i l . A d d 2 m L o f a d d i t i o n a l c h l o r o f o r m a n d s t i r w i t h a t h in g l a s s r o d t o s e t t l e t h e a d s o r b e n t . Wa s h t h e t u b e s i d e w i t h c h l o r o f o r m. P r e p a r e j u s t b e f o r e u s e . 3 . 4 P r o c e d u r e 5 S N 0 28 4一 93 14 . 1 Ex t r a c t i o n We i g h c a 2 0 g o f t h e t e s t s a m p l e ( a c c u r a t e t o 0 . 1 g ) i n t o a h o m o g e n i z e r . A d d 8 0 土1 g o f me t h a n o l - c h l o r o f o r m( 4 +1 ) . Ho mo g e n i z e f o r 1 min . T r a n s f e r t o a c e n t r if u g e t u b e a n d c e n t r i f u g e f o r 5 m in a t c a 2 0 0 0 r / m i n . D e c a n t a n d w e i g h 5 0 g o f t h e s u p e r n a t a n t ( e q u i v a l e n t t o 1 0 g s a m p l e 乏 i n t o a 2 5 0 mL s p a r a t o r y f u n n e l , a d d 1 0 0 m l , o f me t a p h o s p h o r ic a c id s o lu t i o n ( 3 . 2 . 7 ) , i n v e r t 5 0 t i me s , s t a n d f o r 1 0 mi n t o s e p a r a t e t h e p h a s e s . C o l l e c t t h e c h l o r o f o r m l a y e r . R e t a i n t h e w a t e r l a y e r . A d d 1 0 mL c h lo r o - f o r m t o t h e s e p a r a t o r y f u n n e l , i n v e r t , a n d l e t s e p a r a t e a s b e f o r e . C o mb i n e t h e c h l o r o f o r m e x t r a c t s , a d d 2 mL o f me t h a n o l a n d d i l u t e t o 2 5 ml , wi t h c h l o r o f o r m. 3 . 4 . 2 C l e a n u p A d d 2 5 ml , o f t h e e x t r a c t t o t h e c h r o ma t o g r a p h i c c o l u m n ( 3 . 3 . 7 ) . Wa s h t h e c o l u mn w i t h 1 0 mL o f me t h a n o l . El u t e wi t h 1 5 mL o f t h e e l u t io n s o l v e n t a n d c o l l e c t c a 1 5 mL o f t h e e l u a t e i n t o a 1 5 mL g r a d u a t e d t e s t - t u b e a n d d i l u t e 2 q v o l u m n f o r f l u o r o m e t r ic d e t e r m i n a t io n . 3 . 4 . 3 D e t e r min a t i o n 3 . 4 . 3 . 1 S p e c t r o p h o t o f l u o r o m e t r i c o p e r a t i n g c o n d i t i o n a . E x c i t a t io n w a v e l e n g t h : 2 6 5 n m; b . E mi s s i o n w a v e l e n g t h : 3 9 0 n m. 14 . 1 2 P r e p a r a t i o n o f s t a n d a r d c u r v e A d d 5 5 m L( 5 0 g ) me t h a n o l - c h l o r o f o r m( 4 +1 ) t o e a c h o f f o u r 2 5 0 mL s e p a r a t o r y f u n n e l . A d d 0 . 0 . 0 . 1 , 0 . 3 a n d 0 . 5 mL s t a n d a r d w o r k in g s o l u t io n ( 1 0 p g / m L) c o n t a i n in g 0 , 1 , 3 a n d 5 p g d e c o - q u i n a t e , r e s p e c t i v e l y . P r o c e e d a s 3 . 4 . 1 b e g i n n i n g f r o m“ A d d 1 0 0 ml , m e t a p h o s p h o r ic a c i d s o l u t i o n ( 3 . 2 . 7 ) , “ “ “ t o d e t e r m i n e t h e f l u o r e n c e . C o n s t r u c t s t a n d a r d c u r v e b y p l o t t i n g fl u o r e s c e n c e a g a i n s t d e - c o q u i n a t e ( p g / mL ) . 3 . 4 . 3 . 3 S p e c t r o p h o t o f l u o r o m e t r i c d e t e r mi n a t i o n Me a s u r e t h e f l u o r e s c e n c e i n t e n s i t y o f t h e s a m p l e s o l u t i o n . T h e r e a d i n g s s h o u l d b e i n t h e l i n e a r r a n g e o f t h e i n s t r u m e n t a l d e t e c t i o n . Ob t a i n t h e c o n c e n t r a t i o n ( p g / mL ) o f d e c o q u i n a t e i n s a mp l e s o l u - t i o n f r o m s t a n d a r d c u r v e . 3 . 4 . 4 B l a n k t e s t T h e o p e r a t i o n o f t h e b l a n k t e s t i s t h e s a m e a s t h a t d e s c r i b e d i n t h e me t h o d o f d e t e r m i n a t i o n , b u t wi t h o u t a d d i t io n o f s a mp l e . 3 . 5 C a l c u l a t i o n a n d e x p r e s s i o n Th e c a l c u l a t i o n o f r e s u l t i s o f r e s u l t c a r r y o u t a c c o r d i n g t o t h e f o l l o w i n g e q u a t i o n X=c “ 1 二 ， 刀 wh e r e X -t h e c o n t e n t o f d e c o q u i n a t e i n t e s t s a mp l e , mg / k g ; c -t h e c o n c e n t r a t i o n o f d e c o q u i n a t e i n s a m p l e s o l u t i o n ,Kg/ml_; V -t h e f i n a l v o l u me o f s a mp l e s o l u t i o n , mL ; m -t h e c o r r e s p o n d i n g ma s s o f t h e t e s t s a mp l e i n t h e f i n a l s a mp l e s o l u t