(论文)雌激素受体_基因大鼠子宫内膜异位症模型的建立及微血管观察

1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. 多学者用来研究缺血性心肌损伤的理想动物模型。本实验通 过给大鼠腹腔注射异丙基肾上腺素5mg/kg,共2次,结果成功 复制了大鼠急性心肌损伤的动物模型,且病理特点与以往报 道一致 4 - 5。 在本实验中,笔者用卡托普利对造模大鼠进行预处理,尽 管仍有坏死的心肌细胞,但与Iso损伤组比较,心肌坏死面积 明显减少,同时,心肌细胞凋亡指数减少,Bax蛋白表达水平降 低,Bcl - 2蛋白表达增高。由此可见,卡托普利通过升高凋亡 相关蛋白Bcl - 2表达,抑制Bax的表达而减少心肌细胞凋亡, 心肌细胞凋亡减少,心肌坏死随之减少,从而发挥对心肌的保 护作用。卡托普利能减少心肌细胞凋亡的原因有很多,最主 要的是通过抑制血管紧张素II诱导的细胞凋亡。心肌细胞在 缺血、 缺氧的情况下,体内肾素-血管紧张素系统过度激活, 促进血管紧张素I(Ang I)转变为血管紧张素II(Ang II)。An2 gII可使促凋亡基因Bax蛋白表达增加,抗凋亡基因Bcl - 2蛋 白表达下降,从而使Bcl - 2/Bax比值下调而诱导细胞凋 亡 6。而卡托普利通过抑制血管紧张素转化酶的活性 ,阻止 了Ang I转换为Ang II,从而不但使Ang II所产生的氧自由基 和炎性介质减少,而且阻断Ang II介导的细胞凋亡作用。同 时,还能降低促凋亡基因Bax的表达,上调抗凋亡基因Bcl - 2 的表达,从分子水平发挥抗细胞凋亡的作用。 总之,卡托普利等血管紧张素转换酶抑制剂可以发挥心 肌保护作用,这可能是通过上调Bcl - 2和下调Bax蛋白的表 达来实现的。 4 参考文献 1 Krijnen PA,Nijmeijer R,Meijer CJ, et al1Apoptosis inmyo2 cardial ischemia and infarctionJ 1J Clin Pathol, 2002, 55 (11) : 8011 2 Takemura G, Fujiwara H1Role of apoptosis in remodeling aftermyocardial infarctionJ 1Phar macol Ther, 2004, 104 (1) : 11 3 Itoh G, Tamura J, SuzukiM, et al1DNA fragmentation of hu2 man infarcted myocardial cells demonstrated by the nick end labe2 ling method and DNA agarose gel electrophoresis J 1Am J Pathol, 1995, 146(6) : 13251 4 Manikandan P, Sumitra M, Kumar DA, et al1Antioxidant potential of a novel tetrapeptide derivative in isoproterenol - in2 duced myocardial necrosis in rats J 1Pharmacology, 2002, 65 (2) : 1031 5 刘 滨,李红莉,刘 阳,等 1大鼠急性心肌损伤E选择 素和细胞因子的变化J 1中国地方病学杂志, 2005, 24 (2) : 1581 6 Monteiro P, Goncalves L, Providencia LA1Diabetes and cardiovascular disease:the road to cardioprotection J 1Heart, 2005, 91(12) : 16211 收稿日期: 2009 - 04 - 03 编校:李晓飞 雌激素受体基因大鼠子宫内膜异位症模型的建立及微血管观察 李本楠 (长春医学高等专科学校,吉林 长春 130031) 摘 要 目的:对皮下筋膜层与腹壁肌层之间移植自体子宫内膜制作的子宫内膜异位症模型进行评估,且进一步研究雌 激素受体在宫内膜异位症发生发展过程中的作用。方法:用外科手术方法对15只 基因雌性性成熟大鼠进行自体子宫移植,术 后21d、29 d取出病灶组织进行组织形态学观察,免疫组织化学染色观察微血管密度。结果:异位子宫内膜可形成明显囊肿,内含 黏液,具有正常子宫内膜上皮细胞生长,异位内膜中微血管密度较正常子宫内膜高。结论:应用手术方法建立的大鼠子宫内膜异 位症模型,可以作为子宫内膜异位研究的动物模型,便于研究雌激素受体在子宫内膜异位发生发展过程中的作用。 关键词 子宫内膜异位症;微血管密度;雌激素受体;大鼠 Establishment of model of endometriosis with estrogen receptorgene in rats and capillary vessel observation LIBen - nan (Changchun M edical College, Changchun 130031, China) Abstract:Objective To evaluate the model of endometriosis that was made through transplantion between superficial fascia and ab2 dominalwall, and research the effection of estrogen receptoron developmentof endometriosis1M ethod Total15 femal rats that tookgene were transplanted with autoallergic uterus thruogh surgical intervention, the tissue and shape of focus of infection and density of capillary vesselwere observed through i mmunohistochemistry 21days and 29 days after operation1Results Dystopic endometria formed obvious cyst with mucus and had normal endometria endothelial cell, the density of capillary vessel in dystopic endometriawas higher than normal endo2 metrias1Conclusion Themodelof ratsendometriosis through surgical intervention can take for themodelof researching of endometriosis, it is easy to research the effection of estrogen receptor on development of endometriosis1 9652吉林医学2009年11月第30卷第21期 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. KeyW ords: Endometriosis;Density of capillary vessel; Estrogen receptor; Rat 子宫内膜异位症,是指子宫内膜组织出现在子宫体以外 的部位,是妇科常见病、 多发病,近年来有上升趋势,而临床药 物治疗及手术效果欠佳,目前众多国内外学者研究发现子宫 内膜异位症与雌激素受体的作用密切,但机制不详。因此,建 立子宫内膜异位症动物模型,对其病因学研究及新的治疗药 物的筛选和深入研究雌激素受体在子宫内膜异位症发生发展 过程中的作用有深远意义。 1 材料与方法 111 材料 11111 实验动物:健康清洁级雌性大鼠30只,年龄3075d, 体重 (189 10) g,由长春生物制品研究所提供,并进行基因鉴 定。 11112 试剂:微血管染色所用的兔抗鼠(D3)多克隆抗体和 SP免疫组化染色剂盒及DAB显色剂购自吉林省金泰化玻有 限公司。 112 方法 11211 分组:随机分两组, 15只大鼠选模, 15只大鼠作为对 照组,适应性饲养1周。 11212 建模方法: 10%水合氯醛(3ml/kg) ,腹腔注射麻醉大 鼠,腹部备皮,常规碘附消毒,正中纵行开腹,切口约12cm, 分离子宫周围结缔组织,钝镊分离出大鼠右侧子宫,将子宫体 纵行剖开,暴露于宫内膜,剪下中间一段子宫,置于生理盐水 中,切割成约4mm4mm4mm的子宫片,将切好的子宫片置 入腹肌与皮下筋膜层之间,使宫内膜与腹壁紧密贴合,常规关 腹,术后肌内注射青霉素预防感染。常规饲养,连续观察。 113 观察指标和方法 11311 大体观察:术后每周触摸包块至少2次,观察大小。 喂养3周后,用脊柱拉断法处死大鼠后剖开腹腔,观察移植病 灶体积大小。 11312 形态学观察:取出模型组大鼠的异位内膜包块和左侧 未行手术的正常子宫,保存在10%甲醛中,将取材病灶制成石 蜡标本,常规HE染色,光镜下观察异位内膜,在位内膜的组 织形态学特征。 11313 微血管密度观察:分别将模型组大鼠的异位包块及正 常子宫内膜常规石蜡包埋、 切片,用SP法检测内膜组织微血 管密度,低倍镜下 (10 10) 检视切片的微血管染色分布,其中 在较高微血管区域内选择8个最高微血管染色区域置于高倍 镜下 (10 40) 标记微血管记数。 2 结果 211 术后触摸包块情况:术后7d,有8只模型组大鼠在腹壁 可触及小米粒大小的包块, 21d处死前有10只大鼠腹壁两侧 可触及包块,其余5只大鼠一侧可触及包块。 212 形态学及组织学观察:肉眼见异位病灶大小不一,内形 成透亮的囊状,内充满液状物,其表面及四周见明显新生血 管,部分病灶与大网膜、 肠管等相黏连。镜下观察: 异位病 灶的内膜没有明显外膜,而在位子宫内膜为脏层腹膜。异 位内膜为多囊,囊内壁为内膜上皮覆盖,个别病灶伴有火性坏 死,内呈浑浊黄白色结节状,病理切面见大片炎性坏死细胞, 正常在位子宫内膜无此现象。 异位内膜病灶间质层较薄, 而在位子宫内膜下层腺体丰富。 异位内膜病灶周边肌层也 较薄,其内血管较少。 3 讨论 大鼠生命力较强,激素水平高,性周期短且规律,因此,用 大鼠做关于子宫内膜异位症造模及前后对此观察,较方便且 经济。手术移植法是造模较常用的方法。本实验将大鼠本位 的子宫内膜移植在腹肌与皮下筋膜间,位置好固定,异位的内 膜不易移动,手术程序简便,较传统的造模方式将子宫内膜移 植直肠、 卵巢等部位更有操作性、 实用性。本实验造模后因肌 内注射青霉素预防感染, 15只造模大鼠无一例感染,使造模后 期观察得以顺利进行。本造模实验选择3075d的大鼠,此 时期为大鼠的青壮年期,激素水平高,营养状态好,使异位子 宫内膜包块得以顺利生成,便于观察。对此,本实验在术后7d 即在造模大鼠腹壁触及小米粒大小的包块, 21d处死前有10 只大鼠腹壁两侧可触及包块,其余5只造模大鼠一侧可触及 包块。可以说,此次造模成功 2 。 本实验中检测的子宫内膜异位症包块与正常在位宫内膜 镜下提示:微血管密度(MVD)在异位内膜中值较高,由此推论 异位病灶与血管供应丰富有关,符合本实验结论及人类的子 宫内膜异位症的病理现象。本实验具有进一步研究价值。目 前认为雌激素受体存在两种亚型, ER -和ER -。在女性 生殖系统中ER -mRNA表达较ER -mRNA为强。两种受 体在子宫内膜异位症中的作用,专家们对此意见不统一。有 关资料证实,与ERKO鼠相比,ERKO鼠的表型变化为仔鼠 产率低,体形小、 雌鼠皮质骨变粗,在中枢神经系统,ERKO 鼠的部分脑部神经元细胞数减少。认为ER -在卵泡、 骨 骼、 细胞增殖等方面有抑制作用。本实验彩用ERKO鼠为研 究对象,未受以上 ERKO性状影响,造模成功。异位宫内膜 病灶内的囊泡生长良好,光镜下见囊内壁有子宫内膜上皮细 胞生成,与人类子宫内膜异位症包块在光镜下显示符合,本实 验对于深入探讨雌激素受体,尤其是ER -与子宫内膜异位 症的关系和寻找子宫内膜异位症的新的治疗方法具有一定意 义 3 。 4 参考文献 1 张 颖,曹 洪,张昌军 1改良大鼠子宫内膜异位症模 型的建立微血管密度观察J 1中国实验动物学报, 2008, 14 (1) : 561 2 宫庭钰,关 铮,张卓梅,等 1雌激素受体基因敲除小 0752吉林医学2009年11月第30卷第21期 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. 鼠子宫内膜异位症模型的建立 J 1中国实验动物学报, 2008, 16 (2) : 1481 3 王泽华,程丽坤,孙丽君,等 1妇产科学M 1北京:人 民卫生出版社, 2008: 2151 收稿日期: 2009 - 04 - 27 编校:李晓飞 病例报告 骨盆骨折合并严重骶髂关节脱位3例报告 姜殿凤 (敦化市医院,吉林 敦化 133700) 关键词 骨盆骨折;骶髂关节脱位 我院于1995年2月 2002年10月收治3例骨盆骨折合 并严重骶髂关节脱位、 伤侧肢体短缩较为严重的患者。现将 诊治体会报告如下。 1 病历摘要 例1,患者,男, 30岁,藏族。以“ 车祸摔伤左髋部10h”,于 1995年2月11日急诊入院。查体:一般情况良好,抬入病房, 表情痛苦,耻骨联合及左骶髂关节部有明显压痛,骨盆挤压试 验( + ) ,左下肢较右下肢短缩6cm。X线片示:左侧骶髂关节 脱位,耻骨联合分离,左侧耻、 坐骨支骨折。入院急诊在硬膜 外麻醉下行闭合式手法复位。硬膜外麻醉后,取仰卧位,用力 对抗牵引复位,复位时听到“ 咯嚓 ” 声即可,测量双侧下肢长度 相同,行皮牵引治疗。2d后床旁拍片,观察骨折脱位已复位。 2个月后拆除牵引,复查X线片,骨折复位良好,出院回家休 养, 1月后,再次复查X线片,骨折愈合良好,并可下地做轻微 的活动。7年后随访,行动正常。 例2,患者,男, 35岁,汉族。以“ 翻车致伤右髋部20d”,于 2002年3月13日收入我院,患者于20d前因车祸致伤,曾在 外院治疗,未见好转,即转入我院治疗。查体:一般情况良好, 耻骨联合处及右骶髂关节处有明显压痛,骨盆挤压试验( + ) , 右下肢较左下肢短缩5cm。X线片示:右髂骨翼骨折,骶髂关 节脱位,右耻骨、 坐骨支骨折,耻骨联合分离。入院4d后行大 重量右股骨髁上牵引治疗,重量约为本人体重的1/5。2周 后,行床旁X线片发现骨折已基本复位,骶髂关节亦复位,此 后将牵引重量减至本人体重的1/10,维持牵引。2个月后拆 除牵引,测量双侧下肢长度相同,扶双拐下地活动。1年后随 访,行动正常。 例3,患者,女, 28岁,藏族。以“ 车祸致伤左髋部,疼痛不 能站立,血尿2h” 于1999年3月2日入院。患者有血尿,请泌 尿科会诊,诊断为“ 膀胱破裂 ” 并急诊行膀胱修补术, 10天后 转入我科。查体:一般情况良好,左骶髂关节压痛( + ) ,骨盆 挤压试验( + ) ,左下肢较右下肢短缩5cm。X线片示:左髂骨 翼骨折,骶髂关节脱位