乙型肝炎病毒外膜大蛋白检测与HBV—DNA及血清标志物的相关性分析.doc

乙型肝炎病毒外膜大蛋白检测与hbvdna及血清标志物的相关性分析现代检验医学杂右第26卷第3期2011年5月jmodlabmed,voi.26,no.3,may.2011127乙型肝炎病毒外膜大蛋白检测与hbvdna及血清标志物的相关性分析范公忍,熊锦华,李树玲(北京军区总医院肝病研究所,北京100700)摘要:目的探讨乙型肝炎病毒外膜大蛋白(lhbs)与乙肝病毒血清标志物及hbvdna之问的相关性及临床意义.方法采用酶联免疫吸咐试验(elisa)和实时荧光定量pcr法分别检测396例慢性乙型肝炎患者血清中lhbs,hbv-m和hbvdna并进行相关性分析.结果在hbeag阳性的143例患者中hbvdna和lhbs的检出率分别为93.0和96.5;抗hbe阳性的191倒中,分别为63.9和59.2;在hbsag阳性,抗hbc阳性的62例中分别为50.9%和38.6%;慢性乙型肝炎轻度193例,中度119例,重度84例,其乙肝病毒包膜大蛋白阳性率分别为57.2,63.9和59.5,三组之间比较差异无统计学显着性意义(p>o.05).结论血清lhbs水平能够反映hbv感染者体内hbvdna复制程度,其灵敏度高于hbvdna,可作为病毒复制观察的新的血清学指标.关键词;慢性乙型肝炎;乙肝病毒外膜大蛋白;病毒复制;血清学指标中图分类号:r512.62;r446.6文献标志码:a文章编号:16717414(2011)0312703doi:10.3969/j.issn.167卜7414.2011.03.045relationshipbetweenhbvdnaandserummarkerswithlargeenvelopeproteinfangongren,xiongjinhua,lishuling(instituteofhepatology,beijingarmygeneralhospital,beijing100700,china)abestract:objectivetostudytherelationshipbetweenhepatitisbvirusserummarkersandhepatitisbvirusdna(hbvdna)withhepatitisbviruslargeenvelopeprotein(lhbs).methodsserumhbvdnawasquantitivelydetectedbyrealtimepolymerasechainreaction(rtpcn)andthelhbsandhbvmweredetectedbyenzymelinkedimmunosorbentassay(elisa)in396serumsamplescollectedfromchronichepatitisbpatients.resultsthepositiveratesofhbvdnaandlhbsinpatientswithhbeagpositivewas93.0and96.5,respectively.thatinpatientswithantihbepositivewas63.9/6and59.2,respectively.andthatinpatientswithhbsagandantihbepositivewas50.9%and38.6,respectively.thepositiveratesoflhbsinpatientswithchronichepatitisbofmild,moderateandseveredegreewerenotsignificantlydifferent.conclusionthelevelofserumlhbscanbeusedtoreflectthestateofhbvreplicationanditisbetterthanhbvdnainsensitivity.soitmaybeusedasanewserologicalmarkertoreflectthehbvreplication.keywords:hepatitisb;hbvlargeenvelopeprotein;viralreplication;serogicalmark乙肝病毒外膜大蛋白(hepatitisbvirussur一院的慢性乙型肝炎患者396例,男217例,女179例,faceprotein,lhbs)存在于感染性dane颗粒和亚平均年龄48.211.7岁.诊断符合2005年中华医学病毒颗粒上,具有独特的双重跨膜拓扑结构,由s,会肝病学分会和感染病学分会制订的慢性乙型肝前s1及前s2基因区共同编码口,与乙肝病毒复制炎防治指南诊断标准口.临床诊断为慢性乙型肝关系密切,可以反映病毒复制的活跃程度.已有研炎轻度193例,中度119例,重度84例.排除甲,丙,丁究证明乙型肝炎患者血清中检测到lhbs可能是和戊型肝炎.所有受检者均空腹采集血液,分离血hbv复制的一个重要标志2.目前用于评估hbv清后,放置一80冰箱保存统一检测.复制的指标主要有hbvdna载量和血清1.2试剂与方法分离血清后首先测定hbv五hbeag的转换.但hbvdna检测阴性并不意味项免疫学标志物,再分批检测lhbs及hbv一着病毒完全被清除,这对临床治疗及预后评估造成dna.根据乙肝五项结果将其分为不同阳性血清了困难.本文通过对hbsag阳性血清lhbs检测学模式组,以便统计分析.hbvdna定量检测采并与hbvdna进行对比分析,旨在探讨其在乙用实时荧光定量pcr法,试剂由深圳匹基生物工型肝炎诊断,治疗及预后中的临床价值.程股份有限公司提供,hbvdna5.0010.拷1材料与方法贝/ml为阳性,使用仪器为德国罗氏公司lightcy1.1研究对象自2010年3月8月我院门诊及住cler荧光定量pcr仪;lhbs检测采用酶联免疫吸作者简介:范公忍(1958一),男,副主任技师,主要从事肝病分子生物学和免疫学检验工作,email:f.128现代检验医学杂志第26卷第3期2011年5月jmodlabmed,v_01.26,no.3,may.2011附试验(ellsa法),试剂盒由北京热景生物技术有限公司提供hbv五项免疫标志物检测采用酶联免疫吸咐试验(eusa法),试剂盒由北京万泰生物药业有限公司提供,使用仪器为伯乐550型全自动酶联仪,均严格按试剂盒说明操作.1.3统计学分析采用spssi3.0软件进行统计学分析,计数资料用率表示,组问率的比较用检验,p<0.05为差异有统计学意义.2结果2.1hbv患者不同感染模式lhbs和hbvdna阳性率比较在hbeag阳性的143例中,lhbs和dna阳性检出率分别为96.5和93.0,在抗hbe阳性191例中分别为63.9%和59.2,见表1.表1hbv患者不同感染模式中lhbs和hbvdna阳性率比较()2.2lhbs与hbvdna阳性的相关性分析在396例患者血清中lhbs阳性率为73.7(292/396),hbvdna阳性率为67.9%(269/396),两者阳性率比较差异无统计学显着性意义(尸>o.05),两者均阳性者266例,均阴性者109例,两者符合率为94.7%(375/396).2.3hbv载量与lhbs及hbeag的关系见表2.i.hbs阳性率与dna载量拷贝数之间呈线性关系,lhbs阳性率与dna阳性率之间差异无统计学显着性意义,dna及lhbs阳性检出率均明显高于hbeag阳性检出率(p<0.05).表2hbvdna载量与lhbs及hbeag阳性的关系n()2.4慢性乙型肝炎患者临床诊断与lhbs的关系慢性肝炎轻度193例,中度119例,重度84例,其中lhbs检测阳性率分别为57.2,63.9%和59.09,5,三组之问比较差异无统计学显着性意义(p>0.05).3讨论目前临床上用于评估乙型肝炎患者病毒复制与抗病毒疗效的检测指标主要通过hbvdna定量和hbeag血清学转换判断.病毒核酸检测需要较高的实验条件,在许多基层医疗机构尚不能开展此项目,仅依靠hbeag血清学转换与肝功能复查作为判断hbv复制的指标,但在hbeag阴性的慢性乙肝患者中,由于hbv基因前c区和cp区的变异,导致hbeag合成障碍|容易造成漏检,hbeag呈阴性而病毒仍在复制,因此寻找能正确反映hbv复制的新指标已成为目前研究热点内容之一.lhbs是hbvdna颗粒与亚病毒颗粒(管状颗粒)的主要包膜成分,与hbv病毒的复制程度密切相关,在感染早期,它可与细胞受体结合介导病毒的细胞内摄入;感染晚期,是病毒组装和分泌的关键,尤其是亚病毒颗粒在hbv感染过程中还能显着增强细胞内hbvdna复制和基因表达,这是由于lhbs的反式激活作用所触发.过量lhbs在肝细胞内积聚是导致内质网应激反应的关键因素,并可导致肝细胞损伤,损伤的肝细胞质可释放出大蛋白和病毒颗粒,此时处在循环中的lhbs可被特异的抗体所捕获,使得血清lhbs检测成为可能.血清lhbs检测是对hbv完整外膜蛋自存在的判断,代表着病毒基因或亚病毒颗粒的存在口,是判断慢性肝炎患者病毒存在和复制的又一新指标.本文通过对396例hbv不同感染模式血清中lhbs检测结果分析,发现lhbs主要存在于hsag阳性的慢性乙型肝炎患者血清中,说明lhbs与hbsag存在伴随关系,检测lhbs有助于hbv感染的诊断.在292例lhbs阳性血清中有269例hbvdna检测阳性,两者阳性检出符合率为94.7;hbeag阳性143例中lhbs阳性138例,阳性率为96.59/6,在hbeag阴性253例中154例lhbs阳性,阳性率为60.9.结果显示lhbs检出hbv灵敏度高于hbeag,对临床上存在的hbeag阴性患者hbv感染及复制情况的监测更具有明显的优势.与国内外的研究报告一致8.有研究证实乙肝病毒外膜大蛋白可反映抗病毒治疗效果,对于抗病毒效疗的评价具有重要的参考价值9,如与hbvdna联合检测可更加准确地反映病毒的复制情况.本研究显示慢性乙型肝炎轻度,中度及重度三组之问lhbs检测阳性率比较差异无统计学显着性意义(尸>0.05),提示血清lhbs阳性可能与肝功能损害程度无关.检测lhbs方法简便,适应于各级医院开展,对于没有条件开展hbvdna定量检测的(下转131页)现代检验医学杂击第26卷第3期2011年5月jmodlabmed,vo1.26,no.3,may.2011131在重庆地区变态反应性疾病的患者中不耐受食物主要是鸡蛋,其次是虾,接着是蟹,牛奶,小麦等,与其他地区的食物不耐受情况不完全一致.而且在变态反应性疾病患者中常见食物过敏原特异性igg抗体检出率高(1o个常见项目检出率达92以上).因此,通过测定食物过敏原特异性igg抗体,可以帮助制定具体的饮食限制方案,以减轻患者临床症状.此外,对变态反应性疾病的诊断和鉴别诊断也有重要意义.本研究中临床研究试剂盒(深圳博卡)使用的14种食物过敏原均来源于国内,用公司自创方法制备过敏原提取液,采用酶联免疫吸附法(elisa).研究显示,与biomerica试剂比较,该国产试剂对10种常见食物过敏原igg抗体检测敏感度高,特异度强,准确度好,说明具有良好的真实性和可靠性.而且两种食物过敏原igg抗体检测试剂盒之间具有高度的一致性(kappa值均大于0.75).因此,临床上可以选择该国产试剂盒来进行检测,该检测方法操作简便,成本适中,可以在临床推广使用.目前,在国际上关于食物不耐受的研究已成为热点,其应用正在世界范围内迅速普及.而食物过敏原特异性igg抗体测定提供了一种准确,快速,安全的替代方法来确定不耐受食物.本研究中的临床研究试剂为国产试剂盒,通过对比研究,说明该试剂盒与biomerica公司的食物不耐受检测试剂盒之间具有高度的一致性,该国产试剂盒可以应用于临床实验室检测,从而为临床检测食物不耐受特异性igg抗体提供方便.参考文献:eli李彩虹,张振国,苏宗义.两种不同方法检测常见过敏原的对比分析d.大连医科大学,2009,31(3):346347,363.2国家食品药品监督管理局.关于印发体外诊断试剂临床研究技术指导原则及<体外诊断试剂说明书编写指导原则的通知eb/ol.http:www./wsol/clo059/9420.htm1.20100824.33谢志贤,刘倩.食物不耐受与相关性疾病j.中华内科杂志,2006,45(2):150151.4fischerr,megheejr,vuhl,eta1.oralandnasalsensitizationpromotedistinctimmuneresponsesandlungreactivityinamousemodelofpeanutallergyj.amjpathol,2005,167(6):16211630.5pitknene.mannose,mannitol,fructoseand1,5-anhydroglucitolconcentrationsmeasuredbygaschro-matography/massspectrometryinbloodplasmaofdiabeticpatientsj.clinchimacta,1996,251(1):911o3.6陈嫣,陈同辛,朱亚忠.食物过敏原特异性igg检测的临床意义j.上海交通大学(医学版),2010,30(2):143146.7朱桂峰,刘乃政,司磊.食物过敏原特异性igg抗体检测临床意义实验研究j.中国实验诊断学,2008,12(11):14311432.收稿日期:20101207修回日期:2011-0116(上接128页)广大基层医院,开展lhbs的检测可为临床诊断,治疗提供更有价值的参考指标.参考文献:61griponp,cannie1,urbans.efficientinhibititionof232435hepatitisbvirusinfectionbyacylatedpeptidesderivedfromthelargeviralsurfaceproteinj.jvirol,2005,79(3):16131622.patientr,hourionxc,sizaretpy,eta1.hepatitisbvirussubviralenvelopeparticlemorphogensisandintracellulartraffickingj.jvirol,2007,81(8):38423851.中华医学会肝病分会,感染病学分会.慢性乙型肝炎防治指南j.中华肝脏病杂志,2005,10(4):348357.saikian,tatukdarr,mazumders,eta1.manage-mentofpatientswithhbeag-negativechronichepatitisbd.postgardmedj,2007,83(975):3239.lambertc,manns,prange