甘草酸二铵胶囊人体相对生物利用度研究.pdfVIP

医药导报2 0 0 8 年8 月第2 7 卷第8 期 9 1 5 甘草酸二铵胶囊人体相对生物利用度研究 金悠1 ”，杨俊2 ，魏磊2 ，吴鹏飞2 ，龙利红1 ”，陈建国1 ，2 ( 华中科技大学同济医学院1 临床药理研究所；2 药理系，武汉4 3 0 0 3 0 ) 摘要】目的建立甘草酸二铵的活性代谢产物甘草次酸血药浓度的液一质联用色谱测定法( L c M s ) ，并对甘草 酸二铵胶囊在健康受试者体内的生物等效性进行研究。方法采用两制剂双周期随机交叉试验设计，2 0 例男性健康受 试者先后分别单剂量口服甘草酸二铵受试制剂或参比制剂1 5 0m g ，采用液一质联用色谱法，以熊果酸为内标，测定血浆中 其活性代谢产物甘草次酸的浓度。采用D A s2 o 药动学软件进行数据处理。结果试验制剂与参比制剂的A 一。分别 为( 16 4 8 4 9 2 3 0 5 5 ) 和( 16 0 9 2 7 2 6 5 5 9 ) n g m L 1 h ；C 分别为( 9 5 9 7 1 4 9 9 ) 和( 9 3 0 5 1 7 9 1 ) n g m L - l ； t 分别为( 1 2 0 0 1 3 0 ) 和( 1 1 8 0 1 4 4 ) h 。结论两种制剂人体内血药浓度变化符合二室模型，两药的平均生物利 用度为( 1 0 3 5 1 2 7 ) ( A 。) ，具有生物等效性。 关键词】甘草酸二铵；甘草次酸；液质联用色谱法；生物等效性 中图分类号R 2 8 6 ；R 9 6 5【文献标识码A 文章编号1 0 0 4 J D 7 8 1 ( 2 0 0 8 ) 0 8 J 0 9 1 5 m 3 S t I l d yo nt h eR e l a t i V eB i o a v a i l a b m t yo fD i a m m o I l i 岫G l y c y 盯l l i z i 肋t eC a p s l l l ei nH e a l t l l y V o l u n t e e r sb vH P L C M S J I NY o u L 2Y A N GJ u n 2 ，w E IL e j 2 ，w uP e n g 橱2 ，L o N Gu h o n g k 2 ，c H E NJ i 粕一g u 0 1 2 ( 1 胁疵妣矿 a 讯如口Z 耽o r ，眦锄；2 D e p 口n 胱m 旷耽口M 嘶，强彬胁d 记o Zc o 阮萨，月沈舶昭踟妇瑙砂矿 & 如耽eo 以死如加f o 删，阢觑n4 3 0 0 3 0 。铂i M ) A B S T I t A C To b j e c t i v eT bd e v e l o paL C M Sa s s a yf o rd e t e r I l l i n a t i o no fg l y c y r r h e t i ca c i di nh u m 粕p l 船m a 明dt o 既t i m a t et h er e l a t i v eb i o a v a i l a b i l i t yo fd i 锄n l o n i u md v c v 丌h i z i n a t ec a p s u l e si n2 0h e a l t h yv o l u n t e e r s 【e t h o d sA c c o r d i n gt oa 枷d o m i z e dt w o - p e T i o dc m s s o v e rd e s i g n ，2 0h e a l t I l yv 0 1 u n t e e r sw e r eo r a l l ya d m i n i s t e r e d 诵t h1 5 0m gd i 锄m o n i u m 出y c y 曲i z i 岫t e c a p s u l e so rr e f e r e n c eo n e s ，r e s p e c t i v e l y G l y c y 玎h e t i ca c i di np l a s m aw a sd e t e 珊i n e db yL C M S 诵t hu r s o l i ca c i du s e d 踮i n t e 兀l a l s t a n d a r d 。a n dt h ed a t aw e r ep r o c e s s e dw i t l lD A S2 0p h a r m a c o k i n e t i cp r o 丹姗R e s u I t s T h ep h a 珊a c o k i n e t i cp 铷胁e t e r so f t h et w ot a b l e t sw e r e 船f o l l o w s ：A u G tw e r e ( 16 4 8 4 9 2 3 0 5 5 ) a n d ( 16 0 9 2 7 2 6 5 5 9 ) I l g m L 一“，c w e 陀 ( 9 5 9 7 1 4 9 9 ) 蚰d ( 9 3 0 5 1 7 9 1 ) n g m L - l ，f w e r e ( 1 2 0 0 1 3 0 ) 锕d ( 1 1 8 0 1 4 4 ) h ，阳s p e c t i V e l y C o 眦l 璐i o nn ec o n c e n t r a t i o n - t i m ec u n ，e so ft w ot a b l e t sa r ec o n s i s t e n tw i mat w o c o m p a n m e n tm o d e l 1 1 l em e 蛐r e l 蚯v e b i o a v a i l a b i l i t yi s ( 1 0 3 5 1 2 7 ) ( A 0 t ) ，b o t ho f w h i c ha r eb i o e q u i v a l e n t K E YW o R D SD i 哪o n i u md v c 劬i z i n a t e ：G l y c v 盯h e t i ca c i d ：L C M S ；R e l a t i v eb i o a v a i l a b i l i t y 笔者在本实验中建立了甘草次酸血药浓度的液一 质联用色谱测定法( L c M s ) ，通过测定甘草次酸在血 浆中的浓度改变来描述甘草酸二铵在体内的变化过 程，并以此来评价甘草酸二铵胶囊的生物利用度。 1 材料与方法 1 1 仪器与试药 美国1 1 1 e 珊oF i n n i g a I l 公司生产的 高效液相色谱一离子阱质谱联用仪，含四元泵、自动进 样系统、色谱工作站等。受试制剂甘草酸二铵胶囊 ( 湖北潜龙药业有限公司生产，规格：每粒5 0m g ，批 号：2 0 0 6 0 4 1 5 ) ，参比制剂甘草酸二铵胶囊( 江苏正大 天晴药业股份有限公司生产，规格：每粒5 0m g ，批号： 收稿日期 2 0 0 7 0 7 - 2 7 作者简介金悠( 1 9 7 2 一) ，女，湖北安陆人，主管技 师，硕士，研究方向：药理学。电话：( 0 ) 1 3 9 9 5 5 1 8 6 4 3 。 通讯作者陈建国，男，教授，博士生导师，研究方向：药 理学。E m a i l ：c h e I l j m a i l s t j 舢e d u c n 。 0 5 1 2 1 5 ) ；甘草次酸对照品( 批号：1 1 0 7 2 3 2 0 0 4 1 1 ) 、熊 果酸对照品( 批号：1 1 0 7 4 2 2 0 0 5 1 6 ) 均由中国药品生物 制品检定所提供；甲醇均为色谱纯( B u r d i c k & J a c k s o n U S A 公司) ，其他试剂均为分析纯。 1 2 色谱与质谱条件 1 2 1 色谱条件色谱柱：O D s 柱( 2 1m m 1 5 0m m ，5 m ，T h e 珊oH y p e r s i l k e y s t o n eU S A 公司) ； 柱温：2 5 ；流动相为甲醇：水= 9 0 ：1 0 ；流速：0 2 5 m L m i n 一；进样量1 0 灿。以熊果酸为内标，用内标法 定量。 1 2 2 质谱条件选用液相分离- 电喷雾电离质谱 检测法( L C E S I M s ) 。采用电喷雾电离源；负离子检 测( E S I 。) ；毛细管电压4k V ；源温度1 1 0 ；脱溶剂干 燥氮气流速1 0L m i n ，氮气温度3 5 0 ，碎片电源 2 0 0V ，一级质谱( L c E S I M S ) 采用负离子选择性监测 模式。监测对象：甘草次酸( M H 。离子，m 儿质荷 比4 2 5 4 0 ) ，熊果酸的 M 1 ( M H 。离子，砒质荷 9 1 6 H e r a l do fM e d i c i n eV 0 1 2 7N o 8A u g u s t2 0 0 8 比4 0 7 4 0 ) 。 1 3 试验方法选择2 0 例男性健康受试者，平均年 龄( 2 3 3 2 0 5 ) 岁( 2 0 2 8 岁) ，平均身高( 1 7 2 4 4 8 ) c m ( 1 6 2 1 8 0c m ) ，平均体重( 6 3 3 5 7 5 1 ) k g ( 5 4 8 0k g ) 。试验前经全面体检，血、尿常规，血 钾，血钠，肝、。肾功能，胸部x 线片。呼吸状况、血压、 心率及心电图均无异常后方可纳入试验。试验前两周 内未服任何药物，试验期间愿意统一进清淡饮食。受 试者均签署知情同意书。随机分两组各1 0 例。 受试者于服药前1d 夜间禁食1 2h ，次日晨 7 ：0 0 7 ：3 0 分别空腹服用受试制剂或参比制剂 1 5 0m g ，用2 5 0m L 温开水送服。服药2h 后方可饮 水，4h 后进统一食谱饮食。该项试验全过程在一期 临床观察室进行，并实施医疗监护。 于服药前( 0h ) 及服药后3 ，6 ，8 ，1 0 ，1 2 ，1 4 ，1 5 ， 1 6 ，2 4 ，3 2 ，4 0 ，5 0h 肘静脉采血4m L ，血样置于肝素化 采血管，离心分离血浆，血样置于一4 0 贮存备用。 1 4 血浆样品的预处理精密量取1 O g m L - l 熊 果酸对照品溶液1 0m L ，置于1 0m L 具塞离心试管 中，5 0 氮气吹干；再向试管中加入血浆1 om L ，涡旋 振荡5m i n 后，加入乙酸乙酯5m L ，涡旋振荡3m i n ，离 心1 0m i n ( 30 0 0r m i n d ) ，提取有机层，用乙酸乙酯 共提2 次，每次5m L ，合并提取液，5 0 氮气吹干。用 流动相2 0 0 止复溶，取1 0 灿进样。 1 5 统计学方法采用D A s 2 0 药动学软件处理血 药浓度数据。主要药动学参数A 叩和c 。；经对数转 换后进行交叉试验的方差分析、双单侧检验及9 0 可信限考察；。进行非参数检验( 秩和检验) ，对两种 制剂作出生物等效性评价。 2 结果 2 1 色谱行为在选定的L C M S 条件下，甘草次酸 和内标熊果酸峰形良好，其保留时间分别约为3 5 0 和 4 0 0m i n ，且血浆中内源性组分未影响甘草次酸和熊 果酸的分离测定。 2 2 线性关系与最低定量限考察精密量取1 ，3 ，5 ， 1 0 ，2 0 ，5 0 ，1 0 0 和2 0 0n g mL - l 甘草次酸溶液1 0m L 和1 0 斗g mL - l 内标熊果酸溶液1 0m L ，置于1 0m L 具塞离心试管中，5 0 氮气吹干；再加入空白血浆 1 0m L ，各浓度重复3 次，分别按上述方法处理血浆 样品后进样分析。结果表明，甘草次酸血浆浓度在 1 O 2 0 0n g m L 1 浓度范围内线性关系良好；其线性 回归方程为C = 6 0 1 18 尺一0 0 8 18 ( 月即甘草次酸熊 果酸) ，回归系数r = O 9 9 63 ( n = 3 ) 。血浆样品可进 行定量检测的最低浓度为1 0n g m L 。 2 3 方法学评价精密量取1 ，2 0 ，2 0 0n g m L 1 甘草 次酸对照品溶液1 Om L ，内标熊果酸对照品溶液 1 0m L ，每一浓度重复5 次，5 0 氮气吹干；再加入空 白血浆1 0m L ，并按上述方法处理血浆样品，最后加 2 0 0 “L 流动相溶解，进样1 0 斗L ，测定甘草次酸和熊果 酸的峰面积，计算日内变异；并准备1 ，2 0 ，2 0 0 n g m L 4 甘草次酸( 含内标) 3 种浓度的标准血样各3 份，按上述方法处理血浆样品，进样，连续5d 重复此 操作，记录各图谱甘草次酸和熊果酸的色谱峰面积，计 算日间变异。另分别准备1 ，2 0 ，2 0 0n g mL - 1 3 种浓度 的甘草次酸( 含内标) 和3 种浓度的标准血样各3 份， 按上述方法处理、进样，进行相对、绝对回收率的测定。 结果本法分析血浆样品的日内、日间精密度( R 肋) 分 别为3 8 6 6 0 2 和5 7 5 一1 1 2 2 ，绝对 回收率7 6 7 3 8 7 6 9 ，相对回收率9 2 4 4 一 1 0 3 1 2 ，符合生物样本测定的要求。 2 4 稳定性实验选用1 ，2 0 ，2 0 0n g m L 1 甘草次酸 的标准血样，对其在一4 0 0 、反复冻融及预处理以 后室温条件的稳定性分别进行考察。结果表明，低、 中、高3 种浓度标准血样在一4 0 O 、反复冻融及预 处理以后在2 5 室温条件下1 2h 内基本稳定。 2 5 受试者受试情况受试者服用参比制剂或受试 制剂后，定时进行体温、呼吸、脉搏、心率、血压的测量 均未发现异常情况。2 0 例受试者在服用参比制剂或 试验制剂5 0h 内均无不适主诉，亦未观察到不良事 件，且都按要求完成试验。 2 6 相对生物利用度与生物等效性评价2 0 例健康 志愿者分别单剂量口服甘草酸二铵受试制剂或参比制 剂1 5 0m g 后，测得的血浆中其活性代谢产物甘草次酸 血药浓度平均药一时曲线见图1 。血浆甘草次酸浓度 数据采用D A s2 o 程序进行处理，其主要药动学参数 见表1 。 甘草酸二铵单剂量给药后，以各受试者A u 乳。计 算，受试制剂与参比制剂比较的平均相对生物利用度 ( F ) 为( 1 0 3 5 1 2 7 ) 。甘草酸二铵两种制剂的药 动学参数A 和C 。，经对数转换后进行交叉试验的 方差分析和双单侧t 检验，其9 0 可信区问均落在要 求范围内；4 嬲和c 。，经对数转换后进行多因素方差 分析结果显示：受试制剂与参比制剂间差异无显著性。 t 一经非参数检验( 秩和检验) ，差异无显著性( P o 0 5 ) 。结果表明，受试制剂与参比制剂具生物等效 性。 3 讨论 甘草次酸血样的测定方法有内标法( 以熊果酸为 医药导报2 0 0 8 年8 月第2 7 卷第8 期 9 1 7 内标) o 和外标法旧1 。笔者在本实验过程中，经过反 复调整色谱一质谱条件，最后选用了以熊果酸为内标的 内标法，使结果准确度更高。在血样处理方法上，有的 采用乙酸乙酯萃取法，有的采用三氯甲烷热回流萃 取法【2J ，在比较两者萃取过程及L c M s 结果后，最后 选用了操作更方便容易的乙酸乙酯作为萃取试剂。在 筛选流动相时，比较了应用乙腈和甲醇的L C M s 结 果，发现以甲醇：水= 9 0 ：l O 为流动相，在调整p H 值后，也能够很好地分离样品与杂质，得到良好的色谱 峰。 图l2 0 例受试者单次口服甘草酸二铵胶囊后体内甘草次酸 的平均浓度- 时间曲线 一一受试制剂；一一参比制剂 表1 加例受试者单剂量口服甘草酸二铵胶囊1 5 0m g 后主要药动学参数 i s 竺竺。竺：垒，。竺墨，。墨尘兰兰i 篮：翌坠：垒2i 篮：坐垦：堕2i 篮：里垦)b堕 试验制剂 l6 4 8 4 9 2 3 0 5 5l7 2 6 9 2 2 3 5 5 3 9 5 9 7 1 4 9 9 1 2 0 0 1 3 08 9 3 1 9 7 参比制剂 l6 0 9 2 7 2 6 5 5 916 8 6 7 9 2 6 6 8 19 3 0 5 1 7 9 11 1 8 0 1 4 48 8 3 2 7 9 受试者在服用甘草酸二铵胶囊后，甘草酸在体内 的活性代谢产物甘草次酸的达峰时间t 一约为1 2 0 0 h ，f ，门约为8 9 3h ，均与文献报道相近。 甘草酸二铵受试胶囊与参比胶囊之间 i n ( A + 。) 、i n ( A 。) 、i n ( C 一) 的方差分析表明，制 剂问及周期间差异无显著性( P O 0 5 ) ，而个体间具 有一定的差异性，提示临床用药要注意个体化。2 0 例 受试者先后单次服2 种制剂，未观察到不良反应，表明 临床使用较安全。 参考文献】 1 D I N GL ，H u A N Gx ，Y A N GJ ，以耐D e t e 姗i n a t i o fg l y - c y 圩h e t i ca c i di nh u m np l 鹊m ab yL c E s I - M s J ，P 胁帆 曰幻A 抛Z ，2 0 0 6 ，4 0 ( 5 ) ：7 5 8 7 6 2 2 吴琳华，吴伟航，刘红梅，等高效液相色谱法测定人血 浆中甘草次酸浓度 J 中国中医药信息杂志，2 0 0 5 ，l O ( 6 ) ：9 1 1 克林霉素致行走困难2 例 操银针 ( 武汉市汉口医院药剂科，4 3 0 0 1 0 ) 关键词克林霉素；不良反应 中图分类号】R 9 7 8 1 2 ；R 7 4 4 8 文献标识码 B 文章编号