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星花凤梨的组织培养和快速繁殖 郑淑萍,徐建新,丁 峰,顾敏燕 (江苏省张家港市农业试验站,江苏张家港215616) 摘要:用星花凤梨短缩茎作外植体培养,成功建立了几种星花凤梨类的快速繁殖程序,切取茎尖与嫩叶分别 接种在MS培养基上诱导侧芽萌发;侧芽在MS +6 - BA 3 mg/L +NAA 0. 1 mg/L培养基上继代增殖效果较好;不 定芽在MS +NAA 0. 5 mg/L + I BA 0. 5 mg/L培养基上容易生根。 关键词:凤梨;组织培养;快繁技术 中图分类号: S68213 文献标识码: B 文章编号: 1002 - 1302(2005) 03 - 0094 - 02 收稿日期: 2005 - 01 - 24 作者简介:郑淑萍(1959 ) , 女,江苏张家港人,助理农艺师,主要从 事植物组织培养研究。Tel: (0512) 58478270。 星花凤梨属凤梨科子蔓属植物,植株莲座状,叶 宽带状,叶色呈绿色或粉色,叶丛呈筒状。穗状花序 由叶筒中央抽出,色彩多变,姿态各异,是一种室内 观叶观花花卉,花期达半年之久,深受大众喜爱,市 场需求量较大。为实现观赏凤梨种苗的国产化生 产,对该花进行了组织培养和快速繁殖研究。 1 材料与方法 1. 1 材料来源 试验材料取自张家港市港美园艺有限公司星花 类凤梨侧芽。试验在张家港市农业试验站组培室 进行。 1. 2 试验方法 从凤梨母株上分取当年生侧芽后,用清水冲净 外面的赃物,流水下边冲洗边剥去外面老的叶鞘,取 其短缩茎,保留12 cm幼嫩叶鞘,用70%酒精浸 泡15 s,然后用0. 1%升汞消毒液浸泡12 min,无菌 水冲洗68次,吸干其表面的水分,剥去短缩茎外 面的叶片,取里面一部分下部的嫩叶,然后再剥取茎 尖,分别接种到MS基本培养基上进行诱导,经过数 天培养可获得丛生芽,以后用丛生芽不断切分继代使 芽大量增殖。再用不定芽生根培养即可获得完整植 株。待植株长至5 cm时,出瓶移栽到育苗盘中育苗。 1. 3 培养条件 以MS培养基为基本培养基,附加3%蔗糖、 0. 75%琼脂及不同种类和浓度的激素, pH值调至 5. 56. 0。在培养过程中温度25 左右,每日光照 13 h,光照强度2 000 lx左右。 2 结果与分析 2. 1 芽的诱导 将消毒好的叶片与茎尖分别接种到诱导培养基 上,先暗培养10 d (暗培养有助于减少褐化现象 ) , 然后在设计的光照下进行培养。40 d后茎尖基部 开始膨大, 60 d后可形成含有1015个以上的不定 芽,等芽长至12 cm时切下转入分化培养基。叶 片诱导芽,同样在培养40 d后,发现叶片边缘开始 膨大,到58 d后已开始形成愈伤组织,形成的愈伤 组织为淡黄绿色,较疏松,然后将形成的愈伤组织切 成小块转接于诱导培养基上,形成丛生芽。经试验, 诱导培养基以不加任何激素的MS培养基效果较 好,所产生的芽生长迅速且粗壮。 2. 2 芽的增殖 将诱导出的丛生芽在相同成分的培养基上不断 切分继代,即可获得大量不定芽。本试验所筛选出 的最佳分化及继代培养基为MS + 6 - BA 3 mg/L + NAA 0. 1 mg/L,连续继代培养4次,平均增殖系数 为5。对粉叶红穗凤梨不定芽的形成及增殖效果都 很好(表 1) 。本试验中,星花凤梨类中的紫心花与黄 表1 不同培养基对粉叶红穗凤梨丛生芽分化及增殖的影响 培养基 6 - BA (mg/L) NAA (mg/L) 外植 体数 (个) 平均 芽数 (个) 芽的形态效果 MS1. 00. 41202. 6黄绿色芽弱差 MS1. 50. 51203. 5淡绿色芽弱差 MS2. 00. 51203. 8淡绿色芽偏弱一般 MS2. 01. 01204. 1褐绿色芽粗壮一般 MS3. 00. 11208. 5嫩绿色芽略壮好 注:分化培养45 d后观察的结果。 49江苏农业科学 2005年第3期 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. 心花凤梨的诱导和增殖方法与其他星花凤梨类品种 的研究结果有明显差异,其原因有待于进一步研究。 2. 3 生根培养 不定芽长至3 cm左右时,将不定芽由芽丛单个 切下,转入生根培养基培养1520 d开始生根,培 养约3040 d,小苗高5 cm左右时即可移栽。生根 培养基在本试验中以MS基本培养基加入不同浓度 的I BA和NAA两种生长素构成若干种不同组合的 培养基,对粉叶红穗凤梨不定芽进行壮苗生根培养 (表 2) 。 表2 不同I BA和NAA浓度对凤梨壮苗生根培养的影响 培养基 NAA (mg/L) I BA (mg/L) 平均叶数 (张/株) 平均根数 (条/株) 平均根长 (cm) MS00. 14. 03. 00. 5 1/2MS0. 504. 53. 50. 5 MS0. 304. 03. 80. 8 1/2MS0. 103. 12. 50. 7 MS0. 50. 55. 04. 51. 0 注:生根壮苗培养35 d后观察的结果。 结果表明,MS + I BA 0. 5 mg/L +NAA 0. 5 mg/L 是较好的生根培养基,生根效果比其他组合要好,根 系比较粗壮,平均根数为4. 5条,平均根长为1. 0 cm。健壮的瓶苗是移栽成活的基础。 2. 4 移栽 将生根良好的瓶苗打开瓶盖,在室内炼苗3 d 左右,取出小苗,洗清培养基后移栽到育苗盘中。具 体育苗技术还待进一步研究完善。 3 讨论 对星花凤梨类中几个品种的离体培养进行了一 些探索,初步建立了数种凤梨品种的快繁技术体系, 也就是利用外植体进行诱导、 增殖、 生根等。无菌苗 快繁体系的关键是 : (1) 外植体的选择和消毒。应 选用当年生侧芽作外殖体,这样既保证了母株的生 存,又容易消毒。(2)由于所取的外殖体生长发育 情况和生理状态不同,会导致接种后不同程度褐化 及萌动速度不一。所以一般以取较小的侧芽作为外 殖体材料,所切取的茎段可明显减轻褐化现象,诱导 效果也较好。(3)接种后先要暗培养一段时间,暗 培养可有效减少外殖体的褐化现象。 江苏省农业科学院举办水稻条纹病毒免疫检测技术培训班 继去年成功举办第一期水稻条纹病毒免疫检测 技术培训班后,江苏省农科院植物保护研究所于 2005年4月4日、6日再次在南京举办第二、 第三期 水稻条纹病毒免疫检测技术培训班。共有来自江 苏、 上海、 安徽和浙江四省市的32名中青年农业技 术骨干参加了培训。 水稻条纹叶枯病是当前华东地区水稻生产上最 为重要的病害之一,是由灰飞虱传播的一种病毒病 害,病害严重发生时往往导致田块绝收,仅江苏省 2004年发生面积就达2 300万亩,造成了巨大的损 失。传毒介体灰飞虱的带毒率是病害发生流行的重 要指标,也是病害预测预报工作中必须进行的内容 之一。在本培训班举办之前,这一测报工作仅能在 有条件的实验室进行,极大地限制了对水稻条纹叶 枯病开展预测预报工作的进行。江苏省农科院植物 保护研究所植物病毒实验室通过多年的技术攻关, 研制出水稻条纹病毒的特异性抗体,并建立了一套 灰飞虱带毒率斑点免疫检测(Dot - EL ISA)技术体 系。该方法除具有快速、 灵敏、 经济等特点外,还经 过优化、 简化检测技术方法,降低了试验条件和设备 的要求,非常适合于在基层单位推广应用。 培训期间由主讲人周益军研究员详细讲解植物 病毒免疫检测的原理和水稻条纹病毒的斑点免疫检 测方法,研究小组的多位专业技术人员进行了现场 技术指导。参加培训人员从华东地区各病区采集了 当地灰飞虱,于现场进行了检测并获得成功,检测结 果显示江苏、 上海、 安徽和浙江各地灰飞虱带毒率为 2%58% ,平均达28. 1%。结合今年灰飞虱虫量 基本与去年同期持平或有所增加的现状, 2005年将 是继2004年后的又一个水稻条纹叶枯病大发生年, 病害的防治形势将异常严峻。 水稻条纹叶枯病的防治是华东地区特别是江苏 省内水稻病害防治上的头等大事,病害预测预报的 准确性和防治的有效性有赖于我们对灰飞虱带毒情 况认识的超前性和精确性。水稻条纹病毒免疫检测 技术在基层农技推广人员中的迅速普及