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文档简介
目的与要求,了解病毒的诊断,抗病毒治疗,病毒感染的预防。,第一节 病毒感染的检查方法,病毒感染的检查,检测内容,查病毒,查特异性抗体,病毒颗粒 病毒抗原 病毒核酸 病毒酶类:如逆转录酶,电镜直接观察 光镜检查包涵体 分离培养,一、标本的采集与送检,原则基本与细菌相似,但应注意: 1.标本用“双抗”或两性霉素B处理 2.低温保存,尽快送检 3.血清学诊断采双份血清,二、病毒的分离与鉴定,(一)病毒的分离培养 细胞培养(cell culture) 鸡胚接种(egg inoculation) 动物接种(animal inoculation),1.鸡胚培养 采用孵化914天的鸡胚 绒毛尿囊膜 痘苗病毒、人类疱疹病毒 尿囊腔 接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔 流感病毒的初次分离 卵黄囊 嗜神经病毒,1、鸡胚培养,优点:易管理,不带微生物,成本较低 缺点:操作程序复杂,2.动物接种 应用:尚无敏感细胞的病毒培养 动物:兔、鼠、黑猩猩、猴等 优点:结果易观察,可建立动物模型 缺点:有饲养条件要求,费用高,动物 体内常带有潜伏病毒,病毒的分离培养 3.细胞培养 单层细胞培养(monolayer cell culture) 分类 悬浮细胞培养(suspended cell culture) 原代细胞(primary cell) 细胞种类 二倍体细胞(diploid cell) 传代细胞系(continuous cell line),病毒的细胞培养,细胞培养瓶,单层细胞,1病毒增殖鉴定 (1)细胞病变效应(cytopathic effect, CPE ) 细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等(多数病毒); 形成多核巨细胞或称融合细胞(麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等); 在培养细胞中形成包涵体(狂犬病病毒、麻疹病毒等)。,(二)病毒的鉴定,细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落,2019/8/7,15,可编辑,麻疹病毒感染细胞,呼吸道合胞病毒感染细胞,形成多核巨细胞或称融合细胞,(1)细胞病变效应(cytopathic effect, CPE),形成包涵体(inclusion body),(1)细胞病变效应(cytopathic effect, CPE),腮腺炎病毒感染细胞,(2)红细胞吸附(hemadsorption),病毒囊膜表面血凝素(HA) 红细胞表面HA受体,(3)干扰现象(interference),风疹病毒人胚肾细胞 病毒增殖,CPE(),埃可病毒人胚肾细胞 病毒增殖,CPE(),人胚肾细胞,风疹病毒? 埃可病毒,CPE(-)风疹病毒(+) 埃可病毒(-) CPE(+)风疹病毒(-) 埃可病毒(+),2. 病毒数量与感染性测定,1.蚀斑形成试验 (plaque formation test) 2.50组织细胞感染量 (50 tissue culture infectious dose, TCID50),感染性病毒量,2.病毒形态学鉴定,电子显微镜:设备、操作复杂,应用受限 光学显微镜:可见大病毒(痘类病毒), 对一般病毒检测意义不大,3.病毒血清学鉴定,用已知的抗体,鉴定病毒种、型、亚型 (1)血凝抑制试验-正粘病毒型与亚型鉴定 病毒鸡红细胞凝集(血凝试验) 病毒特异性抗体鸡红细胞不凝集 (血凝抑制试验),(2)免疫标记法(FIA、EIA、RIA) 多种病毒鉴定,三、病毒分子生物学鉴定,抗原变异病毒基因的鉴定 核酸扩增 核酸杂交 基因芯片 基因测序,四、病毒感染的血清学诊断,应用: 采取标本分离病毒为时已晚 目前尚无分离此病毒的方法或难以分离的病毒 为证实所分离的病毒的临床意义 进行血清流行病学调查等,1.中和试验(neutralizing test),病毒中和抗体 病毒失去感染性 特点:特异性高,抗体维持时间长 应用:人群免疫情况的调查 临床诊断少用,五、病毒感染的快速诊断,数小时内出结果 病毒颗粒 病毒成分(抗原或核酸) 早期抗体检测(IgM),病毒的快速诊断,光镜-包涵体,电镜,免疫荧光,ELISA,分子生物学技术,杂交,Southern blot,PCR,Northern blot,第二节 病毒感染的防治原则,灭活疫苗(inactivated vaccine) 活疫苗(living vaccine) 重组载体疫苗(recombinant carrier vaccine) 亚单位疫苗(subunit vaccine)
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