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第 28 卷增刊 1农 业 工 程 学 报Vol.28Supp.1 2012 年5 月Transactions of the Chinese Society of Agricultural EngineeringMay 2012345 苹果渣多酚提取工艺的优化 魏 颖,籍保平 ,周 峰,张 迪,刘翼翔 (中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京 100083) 摘要:为优化苹果渣中多酚提取工艺,并得到提取工艺和多酚组成之间的关系,利用微波辅助提取法设计了由物料颗 粒、液料比、乙醇浓度、微波功率和微波提取时间 5 个因素构成的多酚提取优化试验流程,构建了涵盖黄酮、原花青素 2 种典型多酚物质和抗氧化能力的提取工艺评价指标体系。采用证据理论对不同工艺在评价指标下的焦元进行识别,并 基于信度函数和似真函数得到了不同提取工艺的效用区间和优化方案。优化结果为:物料颗粒 60 目,液料比 30 mL/g, 乙醇体积分数 60%,微波功率 600 W,提取时间 70 s,此条件下苹果渣多酚的提取量为 213.83 mg/100g,黄酮提取量为 83.21 mg/100g,原花青素提取量为 52.79 mg/100g,抗氧化的 EC50值为 3.71 mg/100mL,验证了采用证据理论进行苹果渣 多酚提取工艺优化的有效性。 关键词:提取,优化,工艺,多酚,苹果渣,证据理论 doi:10.3969/j.issn.1002-6819.2012.z1.058 中图分类号:X705文献标志码:A文章编号:1002-6819(2012)-Supp.1-0345-06 魏颖,籍保平,周峰,等. 苹果渣多酚提取工艺优化方法J. 农业工程学报,2012,28(增刊 1):345350. Wei Ying, Ji Baoping, Zhou Feng, et al. Technology optimization of polyphenols extraction from apple pomaceJ. Transactions of the Chinese Society of Agricultural Engineering (Transactions of the CSAE), 2012, 28(Supp.1): 345350. (in Chinese with English abstract) 0引言 多酚是分布最广、最具有生物多样性的天然物质, 具有抗氧化和预防心血管疾病等多种生理功能作用。多 酚的提取主要有机溶剂萃取法、超临界 CO2萃取法和复 合酶提取法等1- 2。在苹果多酚提取方面,传统的提取工 艺复杂,提取时间长,多酚易氧化,导致苹果多酚得率 低;采用高压液相技术提取苹果渣多酚,虽然大大提高 了提取效率,但难以实现连续工业化生产。近年来,随 着微波技术的发展,已广泛采用微波提取药用植物活性 成分,该方法具有高效、快速、节能等优点,已经取代 传统回流提取法和超声波提取法,成为应用最为广泛的 一种方法3- 4。 在采用微波法的苹果渣多酚提取工艺研究中,传统 方法多采用响应面法、主成分分析法或统计方法得到不 同因素对提取工艺的影响,考核指标往往是多酚含量最 高,因此仅能给出某种工艺方案对多酚提取率的影响, 难以通过综合评价给出考虑多种营养成分的优化提取工 艺5- 6。证据理论是概率论的推广,具有比概率论更弱的 公理体系和更严谨的推理过程,能够更加客观地反映事 物的不确定性,已在生物制药、食品安全和工业制造等 收稿日期:2011- 06- 01修订日期:2012- 04- 20 基金项目: 863 计划 “食品高效分离制备技术与设备”(2008BAD05A06- Z01) 作者简介:魏颖(1981) ,女,北京人,博士生,主要从事食品加工和 功能食品研究。北京中国农业大学食品科学与营养工程学院,100083。 Email:。 通信作者:籍保平(1954) ,男,河北人,教授,博士生导师,主要研 究方向: 功能食品。 北京中国农业大学食品科学与营养工程学院, 100083。 Email: 领域得到广泛应用7- 9。本文开展基于证据理论的苹果果 渣营养成分评价研究,综合考虑不同工艺从苹果渣提取 的多酚、黄酮、原花青素含量和抗氧化能力指标,将层 次分析法和证据理论相结合,借鉴证据理论的证据合成 法则得到各个提取工艺的信度函数、似真函数效用区间, 然后通过不同工艺效用区间的比较得到其优劣排序和最 终优化工艺,从而为苹果渣多酚成分提取工艺优化和工 业生产提供了新的解决途径。 1试验方案设计 苹果渣多酚提取工艺优化问题,首先确定待选提取工 艺方案,构建衡量多酚提取优劣的评价指标,通过多次试 验测量得到各种提取工艺获得的多酚评价指标含量。 1.1提取工艺及指标测量方法 苹果渣工艺流程为:烘干粉碎、过筛加入提取 溶剂微波提取离心测定。开展优化时,每次准确 称取干燥苹果渣 5.00 g,粉碎过筛后,放入 250 mL 三角 瓶中,用正己烷浸泡 24 h 后,避光自然晾干,收集干果 渣,定量,加入一定浓度的乙醇溶液,微波提取,真空 抽滤,收集苹果渣多酚提取液,测定多酚含量。为衡量 不同提取工艺优劣,在测定多酚含量过程中,选取多酚、 黄酮、原花青素含量和提取物综合抗氧化能力作为评价 指标。 1)物料颗粒:将苹果渣粉碎过 20、40、60、80、100 目筛,按液料比 10 mL/g 加入体积分数为 60%乙醇水溶 液,在微波功率 400 W 的条件下,提取 60 s,测定多酚 含量等指标,证据合成计算得到物料颗粒优化工艺。 2)液料比:选择物料颗粒优化结果,按液料比 10、 农业工程学报2012 年 346 20、30、40 和 50 mL/g,加入体积分数为 60%乙醇水溶 液, 微波功率 400 W, 提取时间 60 s, 测定多酚指标含量, 证据合成计算得到液料比优化工艺。 3)乙醇体积分数:选择物料颗粒、液料比优化结果, 分别加入体积分数为 20%、40%、60%、80%和 100%的 乙醇溶液,微波功率 400 W,提取时间 60 s,测定多酚含 量等指标,证据合成计算得到乙醇体积分数优化工艺。 4)微波功率:选择物料颗粒、液料比、乙醇体积分 数优化结果,微波功率分别为 200、300、400、500 和 600 W,微波提取 60 s,测定多酚含量等指标,证据合成 计算得到微波功率优化工艺。 5)微波提取时间:选择物料颗粒、液料比、乙醇体 积分数、微波功率优化结果,微波提取时间分别为 40、 50、60、70 和 80 s,测定多酚含量等指标,证据合成计 算得到微波提取时间优化工艺。 试验过程中,多酚测定采用福林- 肖卡法10- 11,以没 食子酸为标准计算多酚含量;黄酮和原花青素测定分别 依据 wolfe12和 Sun13的方法,分别以芦丁和表儿茶素为 标准得到黄酮和原花青素的浓度;抗氧化能力的测定采 用二苯代苦味肼基自由基(2,2- diphenyl- 1- picrylhydrazyl, DPPH)分光测定法,即 DPPH 法14,以 EC50(Median Effective Concentration),即将 DPPH 溶液浓度减至 50% 时所需的样品浓度)表示抗氧化能力。 1.2工艺优化流程及评价体系构建 在苹果渣多酚提取工艺优化中,每次试验完毕后, 根据证据理论的 D- S 合成法则(Dempster- Shafer),得到不 同方案的证据理论信度函数、似真函数,从而得到各个 工艺的效用区间,然后比较各工艺的效用区间得到其优 劣排序,工艺优化流程如图 1 所示。 图 1苹果渣多酚提取工艺优化流程 Fig.1Flow chart of technology optimization of extracting polyphenols from apple pomace 2优化方法 2.1证据理论优化原理 通过变化乙醇浓度、微波功率和提取时间等因素, 得到多种提取工艺集合为 A=a1,a2, ,an;以多酚、 黄酮等含量和抗氧化指标为参考,得到评价指标集合为 U=u1,u2, ,us,其中n为工艺数量,s为评价指 标数量。通过多次试验后,工艺集 A 与评价指标集 U 构 成评价矩阵为 R=rijn s,其中 rij为采用工艺 ai获得的指 标 uj值,i 和 j 分别为工艺和指标标识。 根据证据理论,称 =A=a1,a2, ,an为多种 提取工艺方案评价的一个辨识框架。辨识框架的元素称 为基本命题,辨识框架包含了所有有限的基本命题,类 似于概率论中的有限样本空间。定义辨识框架的幂集 2 为集合 所有子集的集合, 具体表示为 2= a1 , an,a1,a2 a1,an, 。根据证据理论 定义:如果集合函数 m: 2 0,1,且满足 m()=0 和 ()1 X m X ,则称函数 m 为 上基本概率指派(basic probability assignment,BPA),X ,m(X)称为 c 基本概率指派函数,m(X)表示证据对命题 X 发生的支持 程度。对命题 X 的基本概率指派相当于概率论中事件 X 出现的概率, 若 X 且 m(X)0, 则称 X 为证据的焦元。 证据理论对多个工艺方案评估及优化的基本策略是 利用多个不相关的证据分别对识别框架进行独立判断, 识别出每个评价指标的证据焦元,进而给出各焦元的基 本效用偏好值,然后用证据组合法则,将多个证据判断 结果组合起来得到各提取工艺的总评结果。 2.2证据理论的效用区间模型 根据不同提取工艺及其指标值,识别出每个评价指 标 uj下的证据焦元为(1,2, ;2 ) jn k Akt t,t 为焦元数 量, k 为焦元标识。 需要指出的是, 对于任意 2 个工艺 ad, ae,如果有 rdj=rej,那么 ad和 ae属于同一焦元。 将工艺优化评价指标 uj划分为 L 个层次用以区分不 同工艺的优劣,若某提取工艺 ai获得指标值为 rij,如果 1 , ll ijjj rgg ,1,2,1lL,有指标归一化模型为 11 11 ( ) ( ) llll jijjijjj llll jijijjjj G rgrgg Grrggg (1) 式中, l j g和 1l j g 分别为 l 个评价层次的低限值和高限值, ( ) l jij G r和 1( )l jij Gr 即为指标值 rij属于等级 l j G和 1l j G 的隶 属程度,评价等级( ) 1 jij G r、( ) L jij Gr分别是对工艺 ai在指 标 uj下的最低、最高评价等级。 采用层次分析法15计算指标 uj的权重 wj,如果工艺 j ik aA,将() j kj ij p Aw r看作是对焦元 j k A的效用偏好程 度。设评价矩阵中的指标值为 rij,评价等级 l j G的效用为 () l j M G,焦元 j k A的效用偏好程度为 11 ()( )()( )() jllll kjjijkjijk p AwG r M GGr M G (2) 对于2 j k A , 如焦元 j k A的效用偏好程度为() j k p A, 则加权计算后焦元的基本效用偏好值为 ()()() jjj kkk k m Ap Ap A (3) 增刊 1魏颖等:苹果渣多酚提取工艺优化方法 347 对每个焦元的基本效用偏好值进行证据理论合成, 得到不同工艺的效用区间为Bel(ai),Pls(ai)。 根据证据理论中信度函数、 似真函数的定义, 确定工艺 i a 的信度函数 Bel(ai)和似真函数 Pls(ai)为 Bel()( ), Pls()( )(1,2, ) i i i Ea i aE am E am Ein (4) 在评价工艺的效用区间中,信度函数 Bel(ai)反 映了证据支持工艺 ai的精确信度总和, 似真函数 Pls( ai ) 反映了证据不否定工艺 ai的信度总和,它们是从不同方 面对同一命题的不同表述。 2.3提取工艺的评价及排序模型 在各工艺效用区间计算基础上,运用证据理论的证 据结构进行工艺优劣评价和排序。对于任意 2 个工艺 , ij aa ,如果 Bel(ai)Bel(aj), Pls(ai)Pls(aj),说明工艺 ai优于工艺 aj;如果 Pls(ai)=Pls(aj),Pls(ai)=Pls(aj),说明工 艺 ai与工艺 aj没有差别;如果不满足上述条件,若工艺 ai、工艺 aj的效用区间分别为Bel(ai), Pls(ai), Bel(aj),Pls(aj),则工艺 ai优于 aj的程度为 max 0,Pls()Bel() Pls()Bel()Pls()Bel() max 0,Bel()Pls() Pls()Bel()Pls()Bel() ij ij iijj ij iijj aa P aaaa aa aaaa (5) 以上通过证据理论的各工艺、指标的焦元选择以及 效用区间的评价工艺排序,建立了基于证据理论的苹果 渣多酚提取工艺评价方法,计算流程如图 2 所示。 图 2提取工艺的优劣排序算法 Fig.2Rank algorithm of extraction technologies 3结果与分析 根据试验设计及优化方法,首先分析物料颗粒变化 对苹果渣多酚提取的影响。在苹果渣粉碎后分别过 20、 40、60、80、100 目筛的情况下,得到 a1a55 种试验方 案的多酚、黄酮、原花青素含量和抗氧化能力结果如表 1 所示。选定评价指标 l j G(l=1,2, 5)的评价等级表示为 1 j G 劣, 2 j G 差, 3 j G 中, 4 j G 良, 5 j G 优,确定各 个指标下等价于定性评价指标 l j G的定量值。 表 1 不同物料颗粒对苹果渣多酚提取结果的影响 Table 1Effects of ratio of apple pomace on Extraction rate of polyphenols 试验方案物料颗粒(目数)多酚提取量/mg (100g)- 1黄酮提取量/mg (100g)- 1原花青素提取量/mg (100g)- 1抗氧化(EC50值) a120162.13 2.6062.31 0.5642.35 0.975.21 0.09 a240193.14 3.1983.36 1.2452.64 1.094.72 0.05 a360208.32 2.9176.59 0.7845.03 0.504.50 0.07 a480173.27 2.1271.22 1.0538.55 0.864.93 0.09 a5100158.26 1.5563.21 0.8336.61 0.705.14 0.08 注:液料比为 10 mL/g;乙醇体积分数为 60%;微波功率为 400 W;微波提取时间为 60 s。EC50 值:将二苯代苦味肼基自由基(DPPH)溶液浓度减至 50% 时所需的样品浓度。 根据苹果渣多酚提取的相关研究成果16- 18,设多酚 含量评价指标为 G1=100,150,200,250,300,黄 酮含量评价指标为 G2=20,60,100,140,180,原 花青素含量评价指标为 G3=20,40,60,80,100, 抗氧化能力评价指标为 G4=8.0,6.5,5.0,3.5,2.0。 通过归一化计算得到转化后的评价矩阵,对评价矩 阵的指标值进行识别,得到每个评价指标下的所有焦元。 其中,多酚含量、黄酮含量、原花青素含量、抗氧化能 力等指标的焦元构成均为a1, a2, a3, a4, a5 , , 采用层次分析法得各指标的权重为w 0.370, 0.247,0.178,0.205,根据评价矩阵各指标数据及其权 重,得到每个评价指标下不同提取工艺的所有焦元基本 效用偏好值如表 2 所示。 将各个指标下所有焦元的基本效用偏好值进行合 成, 计算各提取工艺的试验方案 ai(i=1,2, 5)的 Bel( ai ) 和 Pls( ai ), 得到不同试验方案的效用区间Bel( ai ), Pls(ai)如下:方案 a1为0.312,0.439;方案 a2 为0.373,0.529;方案 a3为0.414,0.612;方案 a4为0.357,0.464;方案 a5为0.191,0.267。根 据排序规则,对物料目数优化 5 种试验方案的效用区间 进行比较,得 5 种提取工艺优劣排序为 a3a2a4a1 a5。 第 28 卷增刊 1农 业 工 程 学 报Vol.28Supp.1 2012 年5 月Transactions of the Chinese Society of Agricultural EngineeringMay 2012348 表 2各指标焦元构成及其基本效用计算结果 Table 2Focal element of each index and its basic utility results 评价指标各指标焦元及不同试验方案的基本效用偏好值 多酚m1a1=0.143; m1a2=0.257; m1a3=0.263; m1a4=0.177; m1a5=0.117; m1=0.043 黄酮m2a1=0.166; m2a2=0.198; m2a3=0.134; m2a4=0.159; m2a5=0.187; m2=0.156 原花青素m3a1=0.203; m3a2=0.205; m3a3=0.234; m3a4=0.182; m3a5=0.211; m3=0.035 抗氧化m4a1=0.156; m4a2=0.263; m4a3=0.185; m4a4=0.198; m4a5=0.179; m4=0.019 与物料颗粒优化过程相同,分析液料比、乙醇体积 分数、微波功率和提取时间 4 种影响因素变化对苹果渣 多酚提取的影响。针对每种影响因素分别做 5 组试验, 并根据上一组优化工艺确定下一组试验工艺的初始条 件,得到不同提取试验方案下的苹果多酚含量评价效用 区间如图 3 所示。由图 3 可知,随着液料比增加,苹果 渣多酚提取效果更高, 超过 30 mL/g 后, 苹果渣多酚提取 效率明显降低; 在乙醇体积分数为 50%60%情况下, 多 酚提取率较高,随着乙醇体积分数升高,多酚提取效率 降低;随着微波功率提高,苹果渣多酚提取率提高,当 功率 600 W 时多酚提取率达到最高;微波提取时间 70 s 时,多酚提取率最高,但总体而言,提取时间对多酚提 取的影响不大。 图 3不同提取工艺的效用区间 Fig.3Utility interval number of different extraction technology 以总酚、黄酮、原花青素和抗氧化等多酚提取的证 据理论效用区间为择优排序指标,对所进行的 25 次试 验方案进行综合排序计算,计算出第 24 次试验工艺的 综合证据理论效用区间为0.861,0.874,明显高于其 他试验,可判定为苹果渣多酚提取的优化工艺,如图 4 所示。 优化工艺条件为:物 料颗粒 60 目,液料比 30 mL/g,乙醇体积分数 60%,微波功率 600 W,提取 时间 70 s,在此条件下,苹果渣多酚的提取率为 213.83 mg/100g,黄酮含量为 83.21 mg/100g,原花青 素 含 量 为52.79 mg/100g , 抗 氧 化 的EC50值 为 3.71 mg/100mL。 图 4苹果渣多酚提取综合效用区间值的优化过程 Fig.4Optimization of polyphenols extracted from apple pomace based on utility interval number 不同试验方案条件下, 从苹果渣中提取的多酚、 黄酮、 原花青素含量和抗氧化能力变化如图 5 所示。 由图 5 可知, 随着提取工艺的逐步改进,苹果渣中多酚、黄酮的含量逐 渐增加。多酚含量最高可达 224.69 mg/100g,黄酮含量最 高可达 87.4 mg/100g,但原花青素含量基本没有变化,抗 氧化的 EC50值基本呈下降趋势。在微波功率 600 W,提取 时间 60 s 试验条件下,EC50值下降到 3.51 mg/100mL,可 见优化后提取的苹果渣多酚具有较强的抗氧化活性。由此 可以得出,苹果渣多酚的抗氧化能力并不是单纯与其含量 呈依赖关系,还与多酚的种类有关。 图 5苹果渣多酚含量随工艺优化的变化过程 Fig.5Polyphenols extracted from apple pomace according to technology optimization 由试验结果(110 次)及变化趋势还可知,物料颗 增刊 1魏颖等:苹果渣多酚提取工艺优化方法 349 粒、液料比变化对苹果渣总酚和黄酮的提取影响较大。 随着微波功率、提取时间的增加,有效成分的浸出量随 工艺优化提升明显,但最终基本趋向一稳定值(1525 次)。分析原因,这可能是由于提取溶剂升温越快,固 液扩散速度越快,细胞破裂加剧造成的;原花青素含量 随工艺优化变化不明显,这与乙醇水溶液的极性变化和 微波局部升温对其破坏分解有关;提取物 EC50值也达到 了一个较低值,说明工艺优化后的多酚提取物具有较强 抗氧化能力。由优化过程可以看出,随着工艺的优化, 多酚和黄酮含量的增加,原花青素的含量几乎没有变化, 推测苹果渣多酚的主要抗氧化物质为黄酮类化合物。 4结论 本文采用证据理论进行苹果渣多酚提取的工艺评价 及优化研究,构建了衡量多酚提取率的评价指标体系, 考虑了多酚中黄酮和原花青素含量,以及抗氧化能力等 多种表现特征。根据优化结果,在物料颗粒 60 目,液料 比 30 mL/g,乙醇体积分数 60%,微波功率 600 W,提取 时间 70 s 条件下, 苹果渣多酚的提取量为 213.8 mg/100g, 黄酮提 取量为 83.21 mg/100g,原花 青素提 取量 为 52.79 mg/100g,抗氧化的 EC50值为 3.71 mg/100mL。与 传统工艺相比,优化目标考虑因素更全面,同时考虑了 指标的不确定性,优化工艺生产效率更高、更符合实际 情况。同时,本文苹果渣多酚提取方法只增加了提取工 艺的证据理论算法,明确了多酚提取的工艺条件,并未 对提取的工业生产设备提出更高要求,因此仍适合多酚 提取的工业化、大规模生产。 基于证据理论优化多酚提取工艺也有其缺点,一是 采用传统 D- S 规则对基本概率指派进行组合所需数据量 大,计算较为复杂;二是只能对选定的试验方案进行相 对择优,难以根据证据组合结果预测提取工艺的优化趋 势,这些尚有待于对多酚提取技术或证据理论的基本概 率指派组合进行改进,从而大幅度提高苹果渣多酚提取 的工艺水平。 参考文献 1Maria G A, Sonia P T. 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