血栓与止血试验.ppt

血栓与止血检验,临床血液学教研室,第一节 血栓与止血的筛选检验,一、一期止血缺陷的筛选检验 二、二期止血缺陷的筛选检验 三、纤溶活性增强的的筛选检验 四、 抗凝物质检验,出血时间测定 血小板计数 束臂试验（毛细血管脆性实验） 血块收缩试验 毛细血管抵抗力试验,第一节 一期止血筛查试验,出血时间测定(bleeding time，BT),一、原理： 测定在皮肤受特定条件外伤后，出血自然停止所需的时间即为出血时间。此过程反映了毛细血管与血小板的相互作 用，包括内皮下组织与血小板粘附（通过vWF 的作用）、血小板的聚集和释放等反应，以 及PGI2与TXA2的动态平衡。,二、方法 Duke法、 Ivy法、出血时间测定器法（TBT法） （卫生部推荐方法） 三、试剂与器材： 1、血压计，秒表，干净滤纸 2、出血时间测定器,四、操作： 1、血压计袖带缚于测定上肢的上臂，加压并维 持在40mmHg,儿童减半。 2、在肘前窝下5cm处的尺侧做局部消毒后，将测定器垂 直贴于皮肤表面，按下按钮，同时启动秒表，移开测 定器。 3、每隔30s,用干净滤纸吸去流出的血液，直至流血自然停止，并记录秒表读数。,五、参考值 ： 2.3-9.5 min 六、临床意义： 延长： 1、 血小板数量异常，如ITP、TTP 2、血小板功能异常，如plt无力症、巨大plt综合征、 储存池病 3、 血管壁异常血管性血友病、遗传性毛细血管扩张症 4、某些严重的凝血因子缺乏 缩短：高凝状态和血栓性疾病,七、质量控制 1、注意影响BT测定的因素 2、滤纸吸去血液时，避免与伤口接触 3、注意药物的影响（抗凝剂、Apc）,血小板检验,一、血小板计数 二、血小板生存时间检测 三、血小板相关抗体检测 四、血小板粘附试验 五、血小板聚集试验 六、血小板第3因子有效性检测 七、血小板膜糖蛋白检测 八、血小板活化指标检测（血浆-TG、PF4、血 小板P选择素检测）,正常值：（100300）109/L,危险,血 小 板 粘 附 试 验 ( platelet adhension test,PAdT),原理： 受检者血液一定速度通过一定量玻璃珠的塑料管，测定通过玻璃珠前后血液中血小板数的差值，即为粘附于玻珠和塑料管的血小板数，由此可计算出其占血小板总数的百分比，即为血小板粘附率。 方法：玻球法、玻璃滤器法、玻珠法,临床意义： 血管性血友病、巨大血小板综合症、血小板无力症、肝硬化、MDS、急性白血病、服用抗血小板药物等 血栓前状态和血栓性疾病、妊高症、口服避孕药等,粘附率减低,粘附率增高,诱聚剂,PPP,PRP,血 小 板 聚 集 试 验 platelet aggregation tset，PAgT,比浊法：以PPP设最低浊度，PRP设最高浊度，在血浆中加入诱聚剂，测定血浆浊度的变化，绘制血小板聚集曲线。,临床意义： 血小板无力症、血管性血友病、巨大血小板综合症、血小板贮存池病、低（无）纤维蛋白原血症、肝硬化、使用血小板抑制剂等。 高凝状态、血栓形成性疾病、动脉粥样硬化、糖尿病、口服避孕药、人工瓣膜移植术后、吸烟等。,聚集率减低,聚集率增高,质量控制： 1.采血要顺利，避免组织液混入，抗凝剂使用合理（不用EDTA抗凝） 2.采集后3h内室温下完成 3.试验前十天停用一切抑制血小板聚集的药物；试验前禁食高脂类食物 4.注意 PRP：1000r/min离心10min PLT(100300)109/L PPP ：3000r/min离心20min PLT20109/L,全血凝固时间测定（CT） 活化部分凝血活酶时间测定（APTT） 血浆凝血酶原时间测定（PT）,第二节 二期止血缺陷筛查检验,全血凝 固时间测定(coagulation time, CT),原理 观察血液自离体后，到玻璃试管中凝固所需时间,血液,从血管中 抽出,与带负电荷表面接触,内源性凝血途径启动,纤维蛋白形成（血液凝固）,XII XIIa,临床意义 1. 因子VIII、IX、XI活性减低；严重的因子、和纤维蛋白原缺乏 2. 原发性纤溶亢进；血循环中存在抗凝物质 高凝状态和血栓性疾病,CT延长,CT缩短,肝素治疗用量检测指标,活 化 部 分 凝 血 活 酶 时 间 测 定 (activated partial thromboplastin time，APTT),一、原理,APTT,Ca2+ 脑磷脂,白陶土,Ca2+ 脑磷脂,部分凝血活酶,二、操作 （一）APTT手工法(试管法） 血浆0.1mlAPTT试剂各0.1ml +CaCl20.1ml （混匀计时） 结果观察：缓慢倾斜试管，观察液体流动状态，流动 停止停止计时 参考值 2545s (二）仪器法,37温浴,APTT,延长,缩短,因子VIII、IX、XI活性减低,高凝状态,三、临床意义,肝素抗凝监测,APTT纠正试验,于患者血浆中分别加入1/4 的正常新鲜血浆、硫酸钡吸附血浆、正常血清，再作APTT试验。 硫酸钡吸附血浆 VIII、XI、XII （不含IX） 正常血清 IX、XI、XII（不含VIII） 新鲜血浆 VIII、IX、XI、XII,血友病甲,血友病乙,F缺乏,正常血浆,硫酸钡吸附血浆 （缺）,正常血清(缺),APTT纠正试验-血友病,纠正,不纠正,纠正,纠正,纠正,纠正,不纠正,患者血浆,纠正,纠正,凝血酶原时间测定 Prothrombin time ，PT 一、原理,Ca2+ 脑磷脂,PT,组织因子,Ca2+ 脑磷脂,二、报告方式 1. 直接报告患者及正常对照的PT秒数 2. 报告凝血酶原时间比值（PTR） PTR=受检者PT（秒）/正常对照PT（秒） 3. 报告国际标准化比值（INR） INR=PTRISI,组织凝血活酶的国际敏感指数（internation sensetivity index,ISI）是用组织凝血活酶试剂与ISI已知的国际参比品或经其标定过的参比品之间敏感度相比较的一个参数。 测定方法： 用多份凝血因子水平不同的血浆（包括正常人和口服抗凝剂患者的血浆），用参比品测得它们的PT的对数（lgPT），再用待标定的组织凝血活酶测得它们的lgPT，以前者为纵坐标，后者为横坐标作图，经回归求得直线斜率。 待标定的组织凝血活酶的ISI=已知的ISI斜率,PT,延长,缩短,因子VII、 II、V、X、Fg活性减低,高凝状态,三、临床意义,口服双香豆素类抗凝药物监测,要保证止凝血检验的质量 必须做好以下十点：,1. 采血须顺利，尽量用大号针头，动作要轻柔； 2. 标本用加盖有刻度标记的塑料试管或硅化管收 集 ； 3. 抗凝剂用109mmol/L的枸橼酸钠，抗凝剂与 血液的比例为1:9。,当Hct 增高55% 或25% 时，务必对抗凝剂用量 或浓度进行调整： 抗凝剂用量(ml)=0.185全血量(ml)1-Hct(%),4. 标本采集至检验时间PT4小时，APTT2 小时，一些因子活性检测要求即刻试验； 5.使用仪器推荐或配套的试剂，使用时严格按照说 明书，注意有效期和稳定性； 6. 反应温度控制在（371）； 7. 手工操作必须做正常对照，复管检测； 8. 正确使用正常对照血浆及参比血浆； 9. 每天坚持室内质控，积极参加室间质评； 10.建立本实验室的参考范围。,血清纤维蛋白（原）降解产物检测 血浆D-二聚体检测 血浆硫酸鱼精蛋白副凝固试验,第三节 纤溶活性筛查检验,血浆纤维蛋白（原）降解产物测定 （fibrin/fibrinogen product，FDP）,一、原理： 胶乳凝集法：在受检血浆中加入特异性抗纤维蛋白（原）D、E片段抗体标记的胶乳颗粒悬液，如果血浆中含有纤维蛋白（原）降解产物（FDP），特别是D、E片段，即可发生抗原抗体反应，导致胶乳颗粒凝集。,二、参考值： 血清10mg/L，血浆5mg/L 三、临床意义： 1. 血清FDP轻度增高10-40mg/L，见于深静脉血栓、急性心梗、严重肺 炎、大手术后、恶性肿瘤、休克等。 2. 血清FDP明显增高40mg/L，见于原发性纤溶症、DIC、M3、应用链激酶等溶栓治疗时。,血浆D-二聚体测定,一、原理： 1. 胶乳凝集法 2. ELISA法 二、参考值：0.5mg/L有临床意义 三、临床意义： 1. DIC时呈阳性或明显增高，另见深静脉血栓、心梗、肺栓塞、重症肝炎等 2. 可作为原发纤溶和继发纤溶鉴别的重要依据。,血浆硫酸鱼精蛋白副凝试验 （plasma protamine paracoagulation test, 3P）,结果判断 阴性,血浆硫酸鱼精蛋白副凝固试验 plasma protamin parcoagulation test，3P,四、临床意义 1. 阴性 正常或DIC晚期，原发纤溶 2. 阳性 含细颗粒沉淀，粗颗粒沉淀、纤维蛋白丝网或胶冻样物质，见于DIC早期，中期，静脉血栓、严重创伤，大手术，及久置冰箱的标本,生理性抗凝蛋白检验：,一、抗凝血酶检测 1、血浆抗凝血酶活性检测 2、血浆抗凝血酶抗原检测 二、蛋白C检测 1、血浆蛋白C活性检测 2、血浆蛋白C抗原检测 三、血浆蛋白S抗原检测 四、组织因子途径抑制物检测,第四节 抗凝物质检验,病理性抗凝物质检验：,一、复钙交叉试验 二 、凝血酶时间检测及甲苯胺蓝纠正试验 三、普通肝素和低相对分子质量肝素检测 四、凝血因子抑制物检测 五、狼疮抗凝物质的筛选试验和确诊试验,凝血酶时间测定及甲苯胺蓝纠正试验 thrombin time,TT 一、原理:,凝血酶,TT,二、结果判断： 正常人凝血酶时间一般在16-18s，超过正