血型血清学若干问题PPT课件.ppt

血型血清学若干问题,南方医科大学.南方医院 兰炯采,.,一、标本,1、标本采集 (1)采错被检者（换床、同名检测未错,输血错) (2)护士送检途中“掉包” (3)大量输液处采样 (4)抗凝管未混匀,只采干管凝块血红细胞有凝集,2、被检者特殊情况 (1)新生儿(Ag不成熟,ABO抗体来自母亲/IgG);老年(Ag）；输异型血/成份血/血浆置换； 疾病：白血病，淋巴病：Ag感染多/全凝集；类B真红，多发性骨髓瘤：串钱状AIHA（自身免疫性溶血性贫血）干扰正/反定型 冷凝集 血浆蛋白紊乱,低丙球血症； 造血干细胞移植后 罕见先天性无ABO抗体 ABO亚型 ABO外抗体,二、定型试剂,失效; 使用不当（AHG最适稀释度）; 效价（抗A128，抗B64），亲合力（3min1mm2），特异性（A2B不漏检，抗体筛选，冷凝集素）; 染色（抗A，B红，抗-A兰，抗-B蓝），未染色者标签脱落； 试剂红细胞3-5%；溶血洗 3-5个混合； 阴/阳对照（酶，聚凝胺）。,三、操作,1、血清1-2滴（50-100u），滴管450倾斜； 2、先加血清，后加细胞！ 3、室温/血清（血浆） 4、离心条件/玻片清洁 抗-A（256）0.01ml+NS0.49ml取0.1ml +(3-5%)RBC0.1ml1000rpm 秒 10 15 20 30 1+ 1+ 2+ 2+ 取离心时间为15秒 5、结果观察（凝块大小，游离细胞mf，真、假凝集，镜下膜完整）,ABO定型,正定 反定 吸收 分 抗A 抗A1 抗B 抗AB 抗H A1 A2 B O 放散 泌 A1 + + - + - - - + - A A,H Aint + W+ - + W+ - - + - A A,H A2 + - - + + -/+1% - + - A A,H A3 Mf - - Mf + -/+20% - + - A A,H Abountu Mf - - Mf + + - + - A H Abend -/+ - - W+ + - - + - A H Ael - - - - + - - + - A H Ax -/w+ - - + + + -/+ + - A A,H Am -/w+ - - -/W+ + - - + - A A,H B - - + + - + + - - B B,H B5 - - MF Mf + + + - - B B,H Bx - - VW+ W+ + + + - - B H Bm - - - VW+ + + + - - B B,H O - - - - + + + + - H H Oh - - - - - + + + + ? -,ABO定型考虑的问题,1、正反定型不以谁为准？-找出原因 标本错误（细胞/血清不一个人） 输液处采样 输异型血 新生儿/老年 疾病 移植 ABO外抗体 亚型（A2产生抗-A1） 试剂 2、抗-AB（W+而抗-A，亚型？） 3、mf：亚型？输异型血？,4、OC（+）： 买？ABO外抗体 5、抗-A/抗-B：W+吸收放散证实 6、唾液/分泌型 唾液隔水煮沸15离心上清（倍比稀释）加量抗血清修正液（1：8？）室温静置1hr加对应红细胞离心结果（后留稀释管阳性） 修正液：倍比稀释，4+最后一管稀释度 7、抗-H参考价值 必须同时作AB，A，B，O对照比较 8、B2？ 中国报道B2，对应A2，产生抗-B1，抗BW+，H弱于O强于B， 1961，Jacobowic：一个家系母及2 均B，但B抗原弱，类似A1与A2，称BK,1976，Bryant:提出B2 ，未被公认：Mollison(Blood +ransfusion in clinical medicine),Mohn(Human blood groups),Zmijawsk;C Blood banking sciences),Lawrence Cclinical practices of transfusion medicine),肖星甫（输血技术手册），李昌林（免疫血液学）均未承认有B2。 9、A2抗A1严重溶血性输血反应 10、亚型与输血 理论：29个血型系统，400多种血型抗原； （一个人）有什么Ag，不产生什么Ab，缺什么Ag，（接受该Ag）可能产生什么Ab。 原则：供者Ag只能比受者少，不能比受者多。 亚型病人：接受O型血 亚型献血员：当A/B型血用,ABO定型与疾病,1、白血病血型变异 血型终生不变；基因未变，抗原减弱；“阶段性”，可恢复；只变“少”，不变“多”（A/BO，ABA/B；不会反过来！） 2、血浆蛋白紊乱 凝集 肝脏病，传染病（TB，黑热病），多发性骨髓病球蛋白 心肌梗塞，感染，外伤，肿瘤纤维蛋白 办法：加盐水散开 洗涤红细胞至散开定型 例：顾，正定型时而B，时而AB，反定型抗-A 分析：正定型抗-AB，抗-A，抗-B均小凝块，加盐水减弱，镜下串钱状，红细胞洗涤后正定型为B，血球蛋白紊乱引起B型。 例：薛，TB，正定似AB，但抗-A50%凝集，镜下串钱状，加盐水串钱状不完全消失。 分析：洗涤3次红细胞抗-A（-），抗-B（+），B型。,3、类B G-杆菌感染，A“AB” O“B” 感染控制，“B”消失 血清中 抗-B 唾液无B物质 可吸收抗-B，吸收后抗-B效价不降低，放散出抗B（比正常B细胞）多（类B与抗B结合疏 ） 加AB血清不凝集（与全/多凝集正别） 例：韩，52y，胆道手术，正定型B，但血清合抗-B，与A型血 血主/次侧均凝集，与O配血次侧凝集。 分析：抗-AB（+），抗-B（+， 离细胞多），抗-A（-）。血清中抗-B效价8，抗-A效价512，唾液中 H，红细胞上H似O型。，吸收抗-B效价只降 1高度，放散点抗B64。 O型，产生类B,4、多/全凝集 细菌污染RBC T活化，出生6个月后产生抗-T 多凝集：与部份（？/10）AB型血清凝集 全凝集：与“全部”（10份）AB型血清凝集 真凝集，洗涤细胞不能去除 （血清中抗T已被自己RBC吸收）无自身凝集 感染史/血污染 控制感染后消失 mf 凝集4强，37弱 全/多凝集, 正定型吸收/放散，“全/多凝集RBC”吸收抗-A/抗-BRBC吸/放：ABO抗体+抗-T试剂（ABO RBC CT未溶化）避开抗T干扰，测定ABO抗体吸收情况判定全/多凝集RBC ABO血型，对照：反定型，唾液血型物质制定ABO血型。 例：苏，女，8M，肺炎，正定型AB，但配血血清凝集AB红细胞。 分析：正定型抗-AB，抗-A，抗-B均凝集，游离C50%；10份AB型血清（+），室温强，37消失；RBC不吸收抗-A，抗-B；反定型AC（+），BC（+），自身（-）。 O型，全凝集，输O RBC，或O RBC+代血浆（无抗体）,5、冷凝集素 AIHA，肺炎冷凝集素，甚至30凝集自身/他人RBC。 递增温度（37-45）盐水洗RBC 例：赵，贫血，正定型“AB”，洗涤RBC后定“O”；与O型配血全侧轻凝集。 分析：37盐水洗2次，正定型O型；血清中冷凝集寿效价64，宜37配血，并作自身对照。,6、AIHA，LE RBC 粘自身抗体干扰正定型（蛋白介质ABO抗血清中非特异凝集）；血清中自身抗体干扰反定型。 递增温度盐水（223745），反复洗涤RBC正定型 氯喹放散法正定型：（兰炯采，中华血液学杂志 1988；9（10）：624：二磷酸氯喹以NS配20%，加20%AB血清，PH6.0；压积RBC0.2ml+20%氯喹液0.8ml37震荡5分钟洗3次定型），自身吸收（氯喹放散）反定型，O.C吸收反定型（同种抗体漏检？）,例：兰炯采，中华医学检验杂志1990；13（5）311：6/21AIHA ABO正反定型不合 直抗 间抗 放散前 放散后 正 反 正 反 + 4 AB B B B + 4 AB B B B + 16 AB B B B + 4 AB ？ B B + 16 AB O O O + - AB O O O,例：韩，1y，Hb2g%，正定型：RBC盐水洗涤A；反定型：OC（+），AC（+），BC（+），37(试管)法：OC(-)，AC(-)，BC（+） 朱，34y，LE,正定型：A，反定型：6，20凝集AC，37减弱，37（试管）法：AC（-） 张，伊文氏综合症 正定型：抗-A（+），抗-B（+），自身（+），盐 水洗涤不消失。 反定型：OC（+），AC（+），BC（+），45盐水洗3次，定O型；与O型血主侧凝集，选择凝集不强于自身对照者输血，无反应。,ABO亚型,常规用抗-AB！ 例：张，胆囊炎，初定O，配血次侧（与O型献血员血清）凝集，主侧（与O型RBC）不凝集。 复查：抗-A，B（+），抗-A（-），抗-B（-）（初定血型未用抗-AB而误定O），RBC吸收放散抗-A，唾液有H，无A物质，血清有抗-B，不凝集A2 AX 例：王，抗-A（-），抗-B（-）初定O，作O型献血，配血凝集。 7份O型人血清+EC，3份15份凝，4份30分凝；王清+AC（+），BC（-）。唾液有H，无A，B物质，王C吸收抗-B，排除（血袋）污染。 BX（？）,新生/婴儿ABO定型,胡利亚、兰炯采，中华医学检验杂志，1992；15（4）：231 27例6月婴儿：正、反定型不一致22例，低离子法正反定型一致，且输血无反应。 方法：测定管中加2滴低离子溶液（NaCl75g,甘氨酸18g 加PBS20ml加 H2O至1000ML侗 PH6.7,ABO外抗体影响ABO定型,IgM抗体常见于：ABO，P，NM，Lewis 例：张，女，宫外孕，初定AB型，与AB型血配血，主侧凝集。 分析：正定型抗-AB（+），抗-A（+），抗-B（+），抗-A1（-）A2B 反定型：OC（-），AIC（），A2C（-），BC（-）合抗- A1 A2B，合抗- A1，输B或O RBC+AB血浆,例：杨，B型，杨血清凝集2/4例BC，混合OC（+/-？） 分析：杨N，P2型，血清介（IgM）抗P，凡P（+）BC、P（+）OC均凝集。 注意：混合OC作抗体筛选细胞缺陷，如3个OC均P2型，便漏检。,操作技术影响ABO定型,1、责任心：标本弄错；试剂弄错/过期/污染；采血不规范；操作未正规培训（先加血清后加细胞）。 2、RBC悬液过浓/过稀。 3、反应温度过低/过高。 4、离心条件 强调：责任心；正定型：抗-AB；反定型：OC；正、反定型2人分开做；正、反定型不合找原因。,RH 定型,1、国产试剂无统一标准； 2、常规RHD定型的争论； 3、初筛RHD（-） 复检： 弱D：AHG法； 部分D：McAb/不同批号（真/假？）抗-D； 报弱D：氯仿/三氯乙烯吸收放散，RBC+抗-D3730分洗+等体积盐水+等体积氯仿/三氯乙烯混合物摇10秒测量1分敞口37水浴5分，混匀1000rpm5分取上层液+O.D（+）RBCAHG 凡直抗（+）RBC，作Rh（聚凝胺，酶，AHG）均产生假阳性。,解释：RhD（-）RBCI gG（自身抗体）不凝集+抗-D（并未粘上RBC）“搭桥”剂凝集（搭的“自身抗体桥”）误制Rh血型！ 原则： 血型有29个血型系统，400多种Ag，一个人有全部血型系统，但无全部血型Ag； 有什么Ag，不会产生什么Ab，缺什么Ag，可能产生什么Ab受者Ag只能比供者少！ 弱D，部分D，报弱D： 供者作Rh（+）血用 受者当作Rh（-）受血,自身抗体血型特异性,胡利亚、兰炯采，河南医科大学学报1990；25（2）209 7例AIHA，RBC乙醚放散： 放散液 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:28 分析 CCDee 1+ - - - - - 抗 ccDEE 3+ 3+ 3+ 2+ 2+ 1+ - -E ccdee 1+ - - - - - CCDee 3+ 2+ 1+ 1+ - - - 抗 ccDEE 3+ 1+ - - - - - -C ccdee 1+ - - - - -,自身抗体掩盖 同种（Rh）抗体,自身抗体凝集它人OC干扰抗体筛选同种抗体（常为Rh）漏检，随机OC（如D+）吸收自身抗体（+抗-D），同种抗体（抗-D）可能也被吸收而漏检。 自身RBC放散（自身Ab）吸收（血清中自身Ab）放散吸收至吸完自身Ab（直抗-），抗体筛选/鉴定自身RBC不会吸收同种Ab；（有什么Ag，不会产生什么Ab；无什么Ag，才可能产生什么Ab）。,胡利亚，兰炯采，河南医科大学学报1992；27（2）：178 21例AIHA：自身RBC/氯奎放散法吸收自身Ab抗-E2例，抗-cE1例。 自身抗体直抗（+）干扰： 血型（Rh）；抗筛；交叉合血。 解决方法： 1、热盐水反复洗直抗（-）； 2、放散（氯奎法，45热盐水，甘氨酸法）直抗（-）； 3、选择凝集不强于自身对照的血液； 4、自身抗体血型特异性选择合血。,影响血型鉴定的方法问题,抗血清：IgM-盐水法 IgG-“搭桥”（酶，AHG，聚凝胺，低离子，白蛋白） “搭桥法”，没有一种100%可靠。 酶：易出假，+/-，可发现“酶型Rh抗体”，方便 聚凝胺：假+/- AHG：可靠，但操作麻烦，试剂标准化（最近稀释度/前带、后节现象；单价/多价？） 配血卡：（原理为AHG）假+/-,重要技术吸收放散,原理：1、Ag-Ab结合系可逆反应（条件？/） 2、弱抗原吸收能力不弱，放散强； 方法：热放散，氯仿/三氯乙烯，氯喹，乙醚，二甲苯，泽比盐皂甙，超声波，酒精 用途：1、证实弱抗原； 2、证实全/多凝集血型； 3、分离抗体； 4、特殊配血（AIHA RBC放散液配血避开自身Ab血型特异性。 注意：选择最适合的放散方法,疑难血型鉴定的参考步骤,1、吸收放散； 2、血型物质测定； 3、家系分析； 4、DNA（参考） 对照实验 凡“搭桥法”应设阴/阳/自身对照。科学设计对照实验，逐一检查反应体系中每个因素。,抗体筛选,1、ABO外抗体多为IgG（“搭桥法”检测）； 2、每个人都有IgM ABO抗体（盐水凝集）； 3、用抗原A/B RBC）查抗体5%RB悬液（盐水介质）+血清（IgM ABO Ab+IgG ABO以外Ab）IgM ABO Ab凝集RBC 无法（用“搭桥法”）检测有无IgG ABO外Ab。 用OC（IgM ABO Ab不凝集）查ABO外Ab； OC要含有“全部”血型Ag（1个人不具备全部Ag，用几个人混合）。,查出OC各种Ag分布，选择2-3个OC，各种血型Ag“互补”，组合具有“全部”Ag。 D C E c e P M N 1 + - + - + + + - 2 - + - + + + - + 组成“筛选细胞” 购买注意：是否含“全部”血型Ag，是否每种Ag均“互补”。,简易方法： 随机3-5个OC混合，“假设”组合具有“全部”血型Ag。 太少可能某Ag均阴性； 太多某抗原呈阳性，但被“稀释”（如：10个细胞，9个Fyb(-),1个Fyb(+)，抗- Fyb会漏检。 3-5个OC，各洗3次，混合，3-5%被检血清（抗-A+抗-D）+筛选C（O，D+）（盐水）不凝集（因无H抗原）聚凝胺/酶/AHG凝集（抗-D凝集D+红细胞） 如果盐水凝集：含IgM ABO以外抗体（P.MN.Lewis） 如果：被检血清（抗-A+抗-D）+A，D+RBC凝集：只能认定血清合体，不能判定有无抗-D。,抗体筛选阳性抗体鉴定“谱细胞”选用10份已知各种血型Ag O型RBC 要求：每种Ag有+/-，合理搭配，被检血清分别与10份细胞反应（10管） D C E c e JKa JKb 盐水 AHG 1 + + + + + - - - + 2 - + - + + - + - - 3 + + - - + + + - + 4 + - + + - + + - + 5 - - - + - + + - - 6 - - + + + + + - - 7 - + - + + - - - - 8 + + + + + + - - + 9 + + + - + + + - + 10 + + - - + + + - + 阴性排阳性！不能阳性排阴性！,购买谱细胞注意,1、是否包含“全部/常见”血型Ag； 2、每种Ag搭配是否合理，+/-比例，3-7/7-3 如某Ag+9，-1;或 +1，-9均属不合理。 3、无2个Ag格局一样 被检血清反应 谱细胞某Ag 合计 + - + A B A+B - C D C+D 合计 A+C B+D N=A+B+C+D,(A+B)!(C+D)!(A+C)!(B+D) P= A!B!C!D!N! P95%;P1/20,可靠性95%,例:某谱细胞格局中E+9个,E-1个,被除检样本“阴性挑阳性”后，余下抗-E不能排除，制定样本含抗-E，可靠吗？ 血清 E + - + 9 0 9 - 0 1 1 9 1 9+1=10 9!9!1! P= =1/101/20,可信度95%， 9!0!0!1!0! 结果不可靠。,没有完美无缺的谱细胞,有时“阴性挑阳性”后余下2种以上抗体不能排除。 进一步分析：确有2种抗体，还是只有1种抗体（另一种是假阳性）？ 方法：1、换一套谱细胞；2、查对应的Ag（血型）；3、吸收放散 查对应的Ag：“有什么Ag，不产生什么Ab”排除其中一种Ab。 例：抗体鉴定，余下抗-D，抗-Fya，2种不能排除。 如果被检样本/患者的血型为D（-），Fya（+）。 分析：血清中只含抗-D；无抗- Fya（因为患者有Fya抗原，不会产生抗- Fya）。,吸收放散法,用D（-），Fya（+）红细胞吸收放散 +D(-),Fya（+）红细胞 分析：结果（+），有抗- Fya；结果（-），无抗- Fya 注意：Rh抗体有“联合抗体”，如抗CE，抗-ce用吸收放散法，能证明“二者不可分”， 例：抗体鉴定余下抗-c，抗-E2种，用c(-),E(+)红细胞吸收放散凝集c(-),E(+) 不凝集c(+),E(-)含抗-E，凝集c(+),E(-)含联合抗体抗-c，不凝集c(-),E(+)无抗E。,抗体鉴定几种情况分析,1、抗体筛选(+)，鉴定(-)实验差错（商业筛选细胞系谱细胞中排出）； 2、盐水(+),“搭桥”(-)实验差错（盐水如真凝集，再加搭桥剂如何会散开？）； 3、谱细胞全阳性高频率抗原的抗体/实验有误/全凝集。,临床输血中其它与血型有关的问题,1、OC，AB浆是“通用血”（理由：患者可接受比自己Ag/Ab少的血！）； 2、Rh阴性病人如无抗-D，接受Rh阳性血产生抗-D占80%或者1/3后果：再次必须输Rh阴性血；女性HDN Rh(-)含抗-D：必须输Rh(-)血；Rh(-)无抗-D，尽量输Rh(-)血，抢救生命时输Rh(+)血，但讲明后果，领导/患者同意生命第一！ 3、输血前试验“三保险”：血型、抗体筛选、交叉配血,方法 相合% 随机 64 ABO定型 99.4 Rh 99.8 抗体筛选 99.94 交叉合血 99.95 自身输血 100,安全输血 三保险（血型、抗体筛选、交叉合血）切无掉以轻心！ 交叉合血是关键的关键！ 标本弄错，一切全完蛋！ 结果判定： 配血“从严”！，HDN“从宽”！；受者Ag“从少”，供者Ag“从多”； “自创”“改良”方法未列入，文件切勿用于常规。,4、Rh“唯酶抗体”临床意义？ 5、没有一种合血技术“十全十美”或100%保险！建立多种技术。 6、既能免疫（妊娠、输血、血制品）Ab交叉合血漏检迟发性溶血反应。 7、血型难定，紧急输血几种方法交叉合血“硬配”十抗体筛选。 8、输400ml全血或分离的红细胞Hb升高1-1.5g Hb升高不到预期值，除外失血（注意隐性失血）追究“血到哪儿去了？）,9、注意因血型不合引起的输血反应； 急性溶血；迟发性溶血（输血后3-5天，Hb明显，不能用原发病解释）；单纯Hb不升高。 10、发生输血反应，千万别忘收集制定血型不合所致的“证据”。血袋血；立即采血：直抗(+)，Mf；第一次尿：Hb。,血型血清学实验若干问题,已知Ag检测Ab；已知Ab检测Ag；Ag、Ab均未知棋盘法分析。 凝集制定 凝集 积分 4+ 12 一大块 3+ 10 几大块，少量游离细胞 2+ 8 小块，游离细胞占1/2 1+ 5 小块，游离细胞1/2 颗粒粗，镜下制定 W+ 2 VW+ - 0 无凝集 mf 少数大块，大量游离细胞,AHG RBC+IgMAb凝集 RBC+IgGAb不凝集+AHG（搭桥）凝集 多价与单价AHG的应用 酶 RBC被“消化” IgGAb凝集（破坏M，N，S，Fya,Fyb） +/-;现用现配/冰冻保存 一期法：RBC+抗血清+酶3715分 二期法：RBC+酶3715分洗涤加抗血清3715分, 聚凝胺 假凝集+拘椽酸三纳散开 RBC+聚凝胺 真凝集+拘椽酸三纳不散开 配血卡 低离子，牛白蛋白,AHG 直抗：RBC“充分”洗涤+AHG 前滞现象 抗查“Ig”（无“特异性”） 抗IgG 抗C3d 交价 IgG IgM 药物Ab 药物Ab 间抗：RBC“充分”洗涤+血清3730-60分“充分”洗涤控干水分+AHG RBC（体内）已粘Ig（无论是否血型Ab）间抗均“+”；被检RBC定血型，血清定Ab,血型物质：ABH抗原存在于体液中游离的ABH抗原 意义/用途：分析ABO血型，中和（ABO）天然抗体（混合血浆中）中和ABO抗体。 抗体：,天然 免疫性 产生原因 ？ 妊娠，输血 Ig IgM IgG 通过胎盘 不能 能 血型物质 中和 （一定效价）不中和 2-ME 裂解19SIgM为7S 无影响 最适反应温度 0-25 37,凝集反应操作,RBC洗涤2-5%悬液 磁砖法 试管法：矫正离心条件。 抗-A（效价256）0.1ml+NS0.49ml1000转/分离心 秒 10 15 20 30 凝块 1+ 1+ 2+ 2+ 以15秒（1000转计时），转速矫正 效价-倍比稀释，相差2个高