课件：补体的检测及应用 (2).ppt

补体的检测及应用,一.概述：(复习基础免疫学相关知识） （一）补体的定义及性质： complement：补体是存在于人和动物血清中的一组具有酶活性的球蛋白，一般情况下处于未激活状态。 补体的特性：稳定性差，各种理化因素都可使之失活：如酸、碱、紫外线照射、剧烈震荡等,实验室灭活补体的条件为： 56C、30； 室温下2-3天补体也可自然失活； 由于补体的稳定性差，容易失活，因此作补体的检测必须用新鲜血清,（二）补体的组成：由三部分组成 1.补体的固有成分：C1-C9, 其中C1又包括C1q、C1r、C1s, 共9种成分11种蛋白分子。其中C9的分子量最小、C3的含量最高； 2.补体的调节蛋白：如C4调节蛋白、C1抑制物、S蛋白等； 3.补体受体；如C1qR、C3aR等；,（三）补体的激活：三条途径 1.经典激活途径：又称C1途径 激活剂：IgG、IgM形成的AgAb复合物 参与成分：C1C9 激活过程：这是一个连锁反应，缺少其中任何一个组分，连锁反应都不能进行下去,2.旁路激活途径：又称C3途径 激活剂：脂多糖、酵母多糖、IgG4和IgA的聚合物(提供接触表面) 参与成分：C3、C5C9、B因子、D因子、P因子 3.甘露糖结合凝集素途径：MBL途径 在感染早期，常采用途径2、3； 产生Ab后，采用途径1,（四）补体的生物学作用：,1.溶菌、溶细胞作用：MAC效应,2.调理作用 (C3b、C4b和iC3b),3.免疫黏附作用 (C3b、C4b),4.炎症介质作用,趋化作用 (C3a、C5a),过敏毒素作用(C3a、C4a、C5a),二.补体的检测： 包括两方面的检测 功能检测：总补体活性的检测、 单一补体活性的检测； 量的测定：单一补体量的测定； 活性的检测多采用溶血试验； 量的测定多采用免疫比浊法或单扩法,溶血试验：绵羊红细胞（Ag）与相应的Ab兔抗绵羊红细胞抗体（溶血素）结合后形成致敏羊红细胞（一对AgAb复合物），在补体存在的情况下，启动经典激活途径，导致羊红细胞的细胞膜穿孔，释放血红蛋白，从而发生溶血。 在溶血反应中，指示系统是 绵羊红细胞和溶血素。 补体的来源是多只豚鼠的混合血清 多只豚鼠血清的混合避免了补体成分的欠缺，使经典途径的连锁反应能顺利进行。,溶血反应,SRBC,+,兔抗SRBC抗体 (溶血素),新鲜血清(提供补体）,溶血,+,启动经典激活途径,（一）总补体活性检测：CH50试验 (Complement Hemolysis 50%) 原理： 组成和功能完整的补体系统能使致敏羊红细胞发生溶血； 羊红细胞的溶血程度与补体的活性成正比； 整个曲线呈倒“S”型，即随着补体量增加，溶血程度也增加,在50溶血附近（3070%之间），稍微改变 补体量，溶血程度变化明显，因此以50溶血率来判定终点较100更为敏感，所以该试验称为50溶血试验（CH50）。,总补体活性的检测方法：见P143 试管号 1:20稀释血清 BB液 溶血素 SRBC 0.1(ml) 1.4(ml) 0.5(ml) 0.5(ml) 0.15 1.35 0.5 0.5 0.20 1.30 0.5 0.5 0.25 1.25 0.5 0.5 0.30 1.20 0.5 0.5 0.35 1.15 0.5 0.5 0.40 1.10 0.5 0.5 0.45 1.05 0.5 0.5 0.50 1.00 0.5 0.5 0.00 1.50 0.5 0.5,上述10支试管经37C、水浴30min反应,离心后与已制备好的50溶血标准管比较，取吸光度值最接近的一管，则 CH50（U/ml）1/血清用量稀释倍数 总补体活性参考范围：50100U/ml,（二）单一补体的测定： 1.单一补体活性的检测：用溶血试验，常用于测C3、C4、C1q、B因子等 原理：将动物或人血清（提供补体）用一些化学试剂特异地灭活某个组分，然后加入致敏羊红细胞，由于补体缺少某一组分，则不能被激活，溶血反应不能发生。当加入待测血清，如其中含有所缺失的补体成分，连锁反应重又发生，即可出现溶血。,此法可诊断： 补体个别组分先天性缺乏：如C3、C4、C1q、B因子； 某一组分有无溶血活性 如：多支豚鼠混合血清+氨水（破坏C4）R4； R4+致敏羊红细胞（抗原抗体复合物） 不溶血+待测血清观察有无溶血 如溶血，说明待测血清有C4，且C4功能正常； 如不溶血，说明无C4，或C4功能差,2.单一补体量的测定：采用免疫比浊法或单扩法，临床上常检测C3。 C3含量：1200-1300 g /ml,（三）补体裂解产物的检测：,C3 C3a+C3b； C3b C3c+C3d 如果血清中出现了C3d，说明补体被激活： 血清中C3， C3d，表明分解； C3， C3d正常，表明合成； C3d含量一般小于1mg/ml 检测方法多采用单扩法或火箭电泳,三.补体检测的临床意义： 1.补体量:多见于急性炎症感染、组织损伤、癌肿； 2.补体量：见于 补体消耗：体内有Ag、Ab 反应，如SLE、RA等； 补体合成：肝脏疾患； 补体先天性缺乏：具有遗传性和家族史,四.补体结合试验： 原理： 补体可与任何一组AgAb复合物结合； 补体一旦与某一AgAb复合物结合后，便不再与 另一复合物结合。 如：已知Ag待测物（Ab？）AgAbC（补体） 致敏羊红细胞不溶血 结果判断： 不溶血为阳性，即待测物中有相应的Ab或Ag； 溶血为阴性，即待测物中无相应的Ab或Ag.,优点： 该试验既可测Ag、又可测Ab； Ag既可以是颗粒性Ag、也可是可溶性Ag、甚至可以是块状物，因此检测Ag的范围广； 可以用于病毒、立克次氏体、细菌等多种病原体的检测（实际上是测Ag）； 比较敏感(0.05g/ml)、特异； 结果判断明显：通过有无溶血来观察，无需特殊仪器检测。