课件：革兰阳性需氧和兼性厌氧杆菌鉴定.pptx

第九章 革兰阳性需氧 和兼性厌氧杆菌鉴定,返回总目录,-,本 章 内 容,-,学习目标及重点,学习目标： 1掌握：白喉棒状杆菌、炭疽芽胞杆菌和产单核李斯特菌的生物学特性及临床意义。 2熟悉：白喉棒状杆菌异染颗粒的染色方法和鉴定；炭疽芽胞杆菌与蜡样芽胞杆菌的鉴别。 3了解：红斑丹毒丝菌的特点，与其他细菌的区别。 本章重点： 白喉棒状杆菌鉴定要点。 炭疽芽胞杆菌的致病特点及鉴定要点 产单核李斯特菌的生物学特性,-,第一节 革兰阳性无芽胞杆菌,革兰阳性无芽胞杆菌 主要包括棒状杆菌属（Corynebacterium）中的白喉棒状杆菌，李斯特菌属（Listeria）中产单核李斯特菌，丹毒丝菌属（Erysipelothrix）中红斑丹毒丝菌,-,一、白喉棒状杆菌 （一）生物学特性 1.形态与染色：G+，菌体细长弯曲 ，栅栏状，异染颗粒 2.培养特性 含有凝固血清的吕氏培养基（Loeffler medium）：细小、灰白色湿润、圆形突起的菌落 含有亚碲酸钾血琼脂平板：黑色菌落,亚碲酸盐血平板上菌落,第一节 革兰阳性无芽胞杆菌,常见于白喉棒状杆菌等，在细胞质内呈颗粒状，主要成分为RNA及嗜碱性的多偏磷酸盐，因亚甲蓝染色时不同于菌体着色，呈紫色而得名，或称迂回体。由于常见于白喉棒状杆菌，位于菌体两端，故又称极体，有助于鉴定。,-,一、白喉棒状杆菌 3.变异： 白喉棒状杆菌形态、菌落和毒性均可发生变异 4.生化反应,5.抵抗力：对干燥、寒冷和日光的抵抗力较其他无芽胞细菌强。在衣物、床单、儿童玩具等各种物品中生存数日至数周。在干燥的假膜中能存在3个月以上。,第一节 革兰阳性无芽胞杆菌,（原噬菌体Tox基因编码外毒素）,噬菌体分为烈性噬菌体和溶原性噬菌体，在感染于寄主细菌细胞时，前者往往在菌体内增殖并将菌体裂解；后者则不使细菌裂解，而成为与细胞同步增殖的遗传因子原噬菌体。原噬菌体可随细菌染色体的复制而复制，并通过细菌的分裂传给下一代，不引起细菌裂解，这种带有原噬菌体的细菌称为溶原性细菌。,-,一、白喉棒状杆菌 (二) 微生物学检验 1. 检验程序,第一节 革兰阳性无芽胞杆菌,-,一、白喉棒状杆菌 2. 标本：咽拭子取分泌物。不能及时检验时，可将标本浸于生理盐水或15甘油盐水中保存 3.鉴定 （1）标本直接涂片 革兰染色：观察形态、染色性 异染颗粒染色：观察异染颗粒 （2）分离培养 吕氏斜面：生长迅速，涂片镜检异染颗粒明显 亚碲酸钾血平板：黑色菌落,第一节 革兰阳性无芽胞杆菌,-,* 分离培养：,标本,接种,吕氏血清斜面,37,612 h,直接涂片镜检,接 种,亚碲酸钾琼脂平板,培养,黑色菌落,1218 h,灰白色小菌落,（快速诊断）,9,-,一、白喉棒状杆菌 （3）毒力测定 1）体外法：可用Eleks琼脂扩散法、SPA协同凝集、对流电泳等检测外毒素 2）体内法：用实验动物(豚鼠、家兔)体内毒力测定（毒素抗毒素中和试验）,Elek平板,第一节 革兰阳性无芽胞杆菌,-,白喉杆菌的有毒菌株可产生白喉外毒素，白喉抗毒素可与其特异性结合，中和白喉外毒素的毒性，可用细菌培养法和动物试验予以证实。 【原理】 Elek平板毒力试验是一种体外的毒力测定方法。通过观察白喉抗毒素与白喉外毒素的双向琼脂扩散现象，判断所培养的白喉杆菌的产毒性。 【材料】 1产毒素的白喉杆菌、类白喉杆菌及待测的白喉杆菌吕氏血清斜面24h培养物。 2Elek琼脂蛋白胨培养基。 3白喉抗毒素(1000u/m1)、马或兔血清(无菌)、无菌滤纸条(6.01.5cm)、无菌5ml刻度吸管、无菌平皿及镊子等。,11,Elek平板试验,-,1将Elek琼脂蛋白胨培养基10ml加热融化，待冷至5055时，加入无菌的马或兔血清2ml，立刻混匀，并倾注平板。 2趁琼脂未凝固前，用无菌镊子将浸有白喉抗毒素(1000u/ml)的滤纸条(尽量使滤纸条上的抗毒素流尽)贴于平板中央，待琼脂凝固后将平板置37温箱内12h (平板面朝下)，使培养基略干燥。 3接种细菌，以接种环取产毒素白喉杆菌、类白喉杆菌和待检的白喉杆菌分别以与滤纸条成垂直的方向划线接种，接种线须密且集中，接种的菌量宜多。若用此法测未知标本需设阳性对照(产毒株)及阴性对照(无毒株)，一般每个平板可接种56个标本。置37培养24、48、72h观察结果。,12,【方法】,-,注意观察在接种线两侧距滤纸条约1cm处有无与接种线呈45角的白色沉淀线出现。 有沉淀者，白喉杆菌毒力试验阳性，该菌株产生白喉外毒素；无沉淀线者，白喉杆菌毒力试验阴性，该菌株不产生白喉外毒素。,13,【结果】,-,白喉杆菌菌苔,沉淀线(阳性),含白喉抗毒素滤纸片,Elek毒力实验结果,14,-,一、白喉棒状杆菌 (三) 临床意义 1. 致病因子：外毒素 2. 所致疾病：白喉，急性呼吸道传染病，乙类传染病,3.治疗：可选用青霉素等,白喉病人,第一节 革兰阳性无芽胞杆菌,-,CASE,患儿，男，6岁，咽痛、声嘶、咳嗽、发热3天； 体温37 ，心率96/分，白细胞升高；亚碲酸钾培养+ 病史：百白破疫苗出生后三个月打了第一针，加强免疫因经济困难而未接种（家属说舍不得花钱，一针要40多元；孩子的父亲右手残疾） 问题：什么病？ 患者和密切接触者需如何处理？,16,-,17,白喉棒状杆菌 异染颗粒菌棒槌 碲盐菌落呈黑灰 咽喉假膜身中毒 窒息心炎两高危 急防需要抗毒素 远防类毒要加追,记忆口诀,-,二、产单核李斯特菌 李斯特菌属包括 产单核李斯特菌(L.monocytogenes) 此菌对人致病 绵羊李斯特菌(L.ivanovii) 英诺克李斯特菌(L.innocua) 威尔斯李斯特菌(L.welshimeri) 西尔李斯特菌(L.seeligeri) 格氏李斯特菌(L.grayi) 默氏李斯特菌(L.murrayi),第一节 革兰阳性无芽胞杆菌,-,二、产单核李斯特菌 (一) 生物学特性 1.形态与染色 G+球杆菌, 2025形成周鞭毛，37时鞭毛很少或无；无芽胞 2.培养特性 兼性厌氧菌、345均能生长（4冷增菌），最适3037 营养要求不高，在含血液、血清、腹水的培养基生长更好。耐盐（200g/LNaCl）。 血琼脂平板：形成较小、圆形、光滑而有狭窄溶血环的菌落,产单核李斯特菌,血平板上菌落,第一节 革兰阳性无芽胞杆菌,-,2025形成周鞭毛，有动力；37时鞭毛很少或无 细菌接种半固体培养基，置室温，由于动力强，细菌自穿刺线向四周弥漫生长，在离琼脂表面数毫米处出现一个倒伞形的生长，是本菌特征之一,-,二、产单核李斯特菌 3. 生化反应：触酶试验（+）、氧化酶（-）、CAMP（+）、葡萄糖（+） 、麦芽糖（+） 、果糖（+）；VP （+）、MR （+）、七叶苷（+） 4.抵抗力：耐盐、耐碱、耐冷、不耐酸；对氨苄青霉素，青霉素、链霉素、红霉素等敏感，对杆菌肽、多黏菌素耐药,第一节 革兰阳性无芽胞杆菌,-,二、产单核李斯特菌 (二)微生物学检验 1.标本：血液、脑脊液、分泌物及病变组织 2.染色：G+球杆菌（细胞内、外） 3.分离培养：血液琼脂、5%-10%CO2 、35 4 .诊断要点：G+球杆菌、（湿片）翻筋斗样运动、触酶阳性、七叶苷阳性、葡萄糖（+）、MR （+）、 VP（+）,第一节 革兰阳性无芽胞杆菌,-,二、产单核李斯特菌 (三) 临床意义 1.传播途径：粪-口传播；垂直感染 2.致病物质：溶血素O、磷脂酰肌醇-特异性磷脂酶C（PI-PLC） 3.所致疾病：可引起食物中毒，病死率高达30 70 该病的临床表现，健康成人个体出现轻微类似流感症状，新生儿、孕妇、免疫缺陷患者表现为呼吸急促、呕吐、出血性皮疹、化脓性结膜炎、发热、抽搐、昏迷、自然流产、脑膜炎、败血症直至死亡,第一节 革兰阳性无芽胞杆菌,-,三、红斑丹毒丝菌 丹毒丝菌属代表菌种 红斑丹毒丝菌(E. rhusiopathiae 产单核丹毒丝菌（E. monocytogenes） 扁桃体丹毒丝菌（E. tonsillarum） 1.形态与染色：革兰阳性短小杆菌，无鞭毛，无芽胞，无荚膜 2.培养：厌氧或微需氧，血平板上形成两种菌落：S菌落：细小、圆形、凸起有光泽（较小，毒力强）；R菌落：较大，颗粒状、扁平、边缘不齐（较大，毒力弱）,红斑丹毒丝菌形态,血平板上菌落,第一节 革兰阳性无芽胞杆菌,-,三、红斑丹毒丝菌 3.生化反应 触酶阴性；分解乳糖、葡萄糖、阿拉伯糖 三糖铁培养基上产H2S（突出特点） 4.鉴定：通过形态染色、生化反应，特别是TSI上产生H2S，可初步鉴定是红斑丹毒丝菌，但要与产单核李斯特菌鉴别 5.临床意义：红丹毒丝菌病是一种急性传染病，主要发生在鱼类、家畜、家禽和兔类，人类也因接触引起感染。也可引起败血症和心内膜炎。近年在发达国家因污染奶制品而引起食物中毒。青霉素是治疗该病的首选抗菌药物,返回章内容,第一节 革兰阳性无芽胞杆菌,-,芽胞杆菌属（Bacillus）中5种与医学相关 炭疽芽胞杆菌（B. anthracis） 蜡样芽胞杆菌(B. cereus) 蕈状芽胞杆菌(B. mycoides) 巨大芽胞杆菌(B. megaterium) 苏云金芽胞杆菌(B. thuringiensis),第二节 革兰阳性需氧芽胞杆菌属,-,一、炭疽芽胞杆菌 (一) 生物学特性 1.形态与染色 致病菌中最大的G+粗大杆菌，两端平切、排列呈竹节状、有荚膜，无鞭毛 芽胞在有氧条件下形成，呈椭圆形，位于菌体中央（抵抗力强） 2.培养特性 专性需氧，营养要求不高 普通平板：扁平、粗糙、不透明、灰白色、无光泽，边缘不整齐的菌落(卷发状菌落) 血平板：毛玻璃样，无溶血或微溶血 （24h后）。有毒株形成荚膜，为M型菌落（可有拉丝现象）,炭疽芽胞杆菌,第二节 革兰阳性需氧芽胞杆菌属,-,-,一、炭疽芽胞杆菌 3.生化反应 葡萄糖（+）、麦芽糖（+）、海藻糖（+）、硝酸盐还原（+）、H2S （） 、Indol （） 、C （） 、URE（） 能液化明胶， 371824h表面液化成漏斗状，细菌沿穿刺线向四周呈放射状生长，如倒松树状 4.抵抗力（芽胞）很强 5%石炭酸5天; 干燥土壤、皮毛中存活数年至几十年 对青霉素、红霉素、庆大霉素、氯霉素、环丙沙星等敏感，头孢菌素耐药,第二节 革兰阳性需氧芽胞杆菌属,-,一、炭疽芽胞杆菌 (二) 微生物学检验 1.标本 血液、呕吐物、痰液、脑脊液、动物尸体、肉类、毛皮 注意生物安全防护！严禁在室外剖检病体! 2.鉴定 形态和菌落特征：荚膜、竹节状初步报告 生化试验 串珠试验 核酸检测：核酸杂交,第二节 革兰阳性需氧芽胞杆菌属,-,串珠试验: -接种于含青霉素(0.050.5U/ml)的肉汤中,35 6h 大而均匀成串的圆球状菌体（形态变异） -与青霉素抑制细菌细胞壁合成有关 -类炭疽无此现象,串珠试验 1000,-,串珠试验,-,青霉素抑制试验： 接种于含青霉素5、10、100U/ml琼脂平板，3724h生长受抑制不生长 串珠和青霉素抑制联合试验：,-,炭疽芽胞杆菌检验程序,第二节 革兰阳性需氧芽胞杆菌属,-,Ascoli试验,-,一、炭疽芽胞杆菌 (三) 临床意义 1.传染源：病畜及其制品或被污染物 2.传播途径:接触、消化道、呼吸道 3.致病因子 （1）荚膜：抗吞噬，利于细菌扩散 （2）炭疽毒素：主要致病和死亡原因 （3）保护性抗原、致死因子、水肿因子三种蛋白复合物 损伤微血管内皮细胞，增加血管通透性水肿,第二节 革兰阳性需氧芽胞杆菌属,-,一、炭疽芽胞杆菌 (三) 临床意义 4.所致疾病-炭疽病（Anthrax） 皮肤炭疽：接触感染 肠炭疽：消化道感染 肺炭疽：呼吸道感染 5.防治措施 病畜处理 疫苗 抗生素,皮肤炭疽,第二节 革兰阳性需氧芽胞杆菌属,-,炭疽杆菌 革阳粗杆竹节状 芽孢需氧尸深葬 人畜共患皮肺肠 组织坏疽黑炭样,记忆口诀,-,二、蜡样芽胞杆菌 (一) 生物学特性 1.形态与染 革兰阳性大杆菌，两端钝圆，周鞭毛，无荚膜，形成芽胞 2.培养特性：需氧或兼性厌氧 普通平板：乳白色不透明菌落，形似“白蜡” 血平板：毛玻璃样，有溶血 液体：混浊，有菌膜 血平板上菌落,第二节 革兰阳性需氧芽胞杆菌属,-,卵黄平板生长迅速，培养3h后，虽看不到菌落，但该菌可分解卵磷脂而形成白色的混浊环，称乳光反应或卵黄反应,-,二、蜡样芽胞杆菌 (一) 生物学特性 3.生化反应 葡萄糖（+）、麦芽糖（+） 、海藻糖（+） 、蔗糖（+） 、水杨素（+） 、VP （+） 、H2S （） 、Indol （） 、C （+） 、URE（） 4.抵抗力： 芽胞耐受10030min、干热12060min才能杀死 对氯霉素、红霉素、庆大霉素敏感 对青霉素、磺胺、呋喃类耐药,第二节 革兰阳性需氧芽胞杆菌属,-,二、蜡样芽胞杆菌 (二) 微生物学检验 1.标本 食物、呕吐物、剩余食物、腹泻粪便 2.鉴定 （1）涂片染色 （2）分离培养 （3）活菌计数,第二节 革兰阳性需氧芽胞杆菌属,-,二、蜡样芽胞杆菌 (三) 临床意义 1.食物中毒:含菌量达105/g以上 呕吐型 腹泻型 2.全眼球炎（外伤后） 3.心内膜炎、败血症和脑膜炎,返回章内容,第二节 革兰阳性需氧芽胞杆菌属,-,夏、秋季多见 食物有