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1.2 基因工程的基本操作程序 1关于目的基因获取过程的叙述中,不正确的是()A人工合成法可合成未知序列的任意大小的DNA片段B真核生物与原核生物的目的基因均可从基因文库中提取C原核生物的目的基因一般不从cDNA文库中提取D若可设计出特定引物,利用PCR方法也可获取目的基因答案A解析人工合成双链DNA分子,所能合成的长度范围为50 bp12 kb,且需已知序列,A错误;原核生物的基因不含内含子,因此不需从cDNA基因文库中提取,C正确。2不属于目的基因与载体结合过程的是()A用一定的限制酶切割质粒,露出黏性末端B用同种限制酶切割目的基因,露出黏性末端C将切下的目的基因插入到质粒的切口处D将重组DNA引入到受体细胞中进行扩增答案D解析目的基因与载体结合过程中,首先用相同的限制酶切割目的基因两端和载体(通常是质粒),使它们具有相同的黏性末端,再把目的基因连接到质粒的切口处,通过DNA连接酶将其连接,故只有D项不属于,D项属于将目的基因导入受体细胞的过程。3基因工程的基本原理是让目的基因在受体细胞中稳定存在并高效地表达。下列关于基因工程的基本操作中,错误的是()A用化学方法合成目的基因的条件是知道目的基因的核苷酸序列B目的基因与载体DNA连接必须利用的工具酶是DNA聚合酶C若用大肠杆菌作为受体细胞,通常用氯化钙处理大肠杆菌,目的是使重组质粒顺利进入D筛选含目的基因的受体细胞,必须根据载体DNA上的特定基因来确定培养基答案B解析利用化学合成法合成目的基因主要适用于已知核苷酸序列的、分子量较小的目的基因的制备,A正确;目的基因与载体连接必须利用的工具酶是DNA连接酶,B错误;用氯化钙处理大肠杆菌,增大了细胞膜的通透性,使细胞处于感受态,以促进重组质粒顺利进入细胞,C正确;根据质粒上的标记基因来检测目的基因是否进入受体细胞,D正确。4下列关于目的基因导入受体细胞的描述不正确的是()A基因枪法导入植物体细胞的方法比较经济有效B显微注射法是转基因动物中采用最多的方法C大肠杆菌最常用的转化方法是使细胞的生理状态发生改变D农杆菌转化法是将目的基因导入植物细胞最常用的方法答案A解析目的基因导入植物细胞最常用的方法是农杆菌转化法,该方法比较经济有效,此外还有基因枪法和花粉管通道法,基因枪法是单子叶植物中常用的一种基因转化方法,但成本较高,A错误,D正确;目的基因导入动物细胞最常用的方法是显微注射法,B正确;大肠杆菌细胞最常用的转化方法就是用钙离子处理细胞,使细胞的生理状态发生改变(使细胞处于感受态),完成转化过程,C正确。5下列关于目的基因的检测与鉴定的叙述,错误的是()A目的基因在真核细胞中能否稳定遗传的关键是目的基因是否插入质粒DNA中B检测受体细胞是否含有目的基因及其是否成功转录的方法都是分子杂交法C目的基因的鉴定有时需要在个体水平上进行D如在受体细胞内检测到目的基因表达的蛋白质,可确定目的基因首端含有启动子答案A解析真核细胞的主要遗传物质都保存在细胞核中,因此目的基因在真核细胞中能否稳定遗传的关键在于目的基因是否插入染色体中随之进行复制,而非质粒DNA,A错误;检测受体细胞是否含有目的基因需要用DNA分子与基因组DNA杂交,检测其是否转录则需要用DNA分子与mRNA杂交,两者均属于分子杂交法,B正确;鉴定目的基因产物时,有时需要进行个体生物学水平的鉴定,比如需要进行活性比较、接种实验等鉴定,C正确;目的基因成功表达意味着转录过程成功进行,而启动子是目的基因转录过程开始的关键因素,D正确。6草甘膦是一种可以杀灭多种植物(包括农作物)的除草剂。草甘膦杀死植物的原理在于能够破坏植物叶绿体或质体中的EPSPS合成酶。通过转基因的方法,让农作物产生更多的EPSPS酶,就能抵抗草甘膦,从而让农作物不被草甘膦杀死。下列有关抗草甘膦转基因大豆的培育分析正确的是()A可通过喷洒草甘膦来检验转基因大豆是否培育成功B只能以大豆受精卵细胞作为基因工程的受体细胞C在转基因操作过程中一定要用同一种限制性核酸内切酶D只要EPSPS合成酶基因进入大豆细胞,大豆就会表现出抗草甘膦性状答案A解析可通过喷洒草甘膦来检验转基因大豆是否培育成功,A正确;转基因植物可用植物体细胞作为受体细胞,B错误;转基因操作时不一定要用同一种限制酶,C错误;基因成功转入后,不一定能够成功表达,还需要进一步检测,D错误。7(2018东北三校联考)抗冻蛋白是一类抑制冰晶生长的蛋白质,能降低水溶液的冰点,从而导致水溶液的熔点和冰点出现差值,这个温度差称为热滞值。昆虫抗冻蛋白的热滞值最高,为36 ,鱼的热滞值为0.71.5 ,因此,昆虫抗冻蛋白在实际应用上具有更大的潜力。为了扩展一些植物的生存范围,科学家利用昆虫抗冻蛋白(AFPS)的异源表达,现已成功地提高了烟草的抗冻能力。请分析回答相关问题:(1)基因工程的核心步骤是_,这一过程需要的酶是_。将AFPS基因导入烟草细胞中,常用_法,这是因为烟草属于_(填“单”或“双”)子叶植物,当植物体受到损伤时,伤口处的细胞会分泌大量的_,此操作过程中使用的载体是_。(2)若检测AFPS基因是否整合到烟草的染色体上,一般采用_技术,若检测是否产生抗冻蛋白,一般采用_方法检测杂交带;还可以从_生物学水平进行抗冻鉴定。答案(1)基因表达载体的构建限制酶和DNA连接酶农杆菌转化双酚类化合物Ti质粒(2)DNA分子杂交抗原抗体杂交个体解析(1)基因表达载体的构建是基因工程的核心步骤,在此过程中应用同种限制酶切割载体和含有目的基因的DNA分子,再用DNA连接酶连接成重组DNA分子,因为受体烟草细胞是双子叶植物细胞,所以将AFPS基因导入植物细胞的最常用的方法是农杆菌转化法,当植物体受到损伤时,伤口处会分泌大量的酚类化合物,吸引农杆菌移向这些细胞,此过程常用的载体是Ti质粒。(2)若检测AFPS基因是否整合到烟草的染色体上,一般用DNA分子杂交技术;若检测是否产生抗冻蛋白,一般采用抗原抗体方法检测杂交带,还可以从个体生物学水平进行抗冻鉴定。8请回答下列有关基因工程的问题:(1)如果用某种生物发育的某个时期的mRNA反转录产生的多种_片段,与载体连接后储存在一个受体菌群中,这个受体菌群体就叫做这种生物的_。(2)一个基因表达载体的组成成分,除了有目的基因,还必须有_、_以及_等。(3)目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程,称为_。将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是_法。将目的基因导入动物细胞采用最多、也最有效的方法是_。大肠杆菌最常用的转化方法是首先用_处理细胞,使细胞处于一种_的生理状态,这种状态的细胞被称作感受态细胞。答案(1)互补DNA(cDNA)cDNA文库(部分基因文库)(2)启动子终止子标记基因(3)转化农杆菌转化显微注射法Ca2能吸收周围环境中DNA分子解析(1)基因工程用mRNA反转录形成互补DNA(cDNA)片段,题中受体菌内含有某种
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