革兰阳性菌的鉴定操作.ppt

革兰阳性菌的鉴定操作,阳球G+c ：葡萄球菌属、微球菌属、链球菌属、肠 革兰阳性菌 球菌属等 阳杆G+b ：棒状杆菌属、李斯特氏菌属、丹毒丝菌 属、分支杆菌属、奴卡菌属等,需氧革兰阳性球菌：,挑取单个菌落进行涂片 固定、初染、酶染、脱色、复染 注意：挑取时接种环轻碰菌落边缘即可。,1：涂片,2：染色,根据菌体特征作出初步鉴定 若镜检结果为革兰氏阳性杆菌，则在建议与解释栏 填写“因NCCLS上无相应的药敏标准，请根据临床 症状经验用药，并考虑是否为污染菌。”,3：镜检,革兰阳性球菌,原理：2H2O2 O2 + 2H2O 注意：血琼脂上菌落不宜作此试验。,4：触酶试验,触酶试验（ Catalase ）： 1、触酶阳性，可初步判断为葡萄球菌属和微球菌属; 2、触酶阴性，可初步判断为链球菌属和肠球菌属,5：Staphaurex胶乳凝集试验,Staphaurex胶乳凝集试验是一种鉴定 金葡菌的快速、简便的商品化直接凝集 试验。 基本原理是在纸板或玻片上滴加包被有纤维蛋白原和IgG抗体的聚苯乙烯胶乳，然后用接种环挑取待鉴定的新鲜培养物加入混匀出现凝集块现象为阳性。 本法不仅可以检测金葡菌的凝固酶而还可通过IgG抗体的FC段与金葡菌的A蛋白有特殊的亲和力而检测之。,中等大小、黄或灰白，溶血或不溶血的菌落，则做Staphaurex胶乳凝集试验： 阳性、24h溶血，则判断为金黄色葡萄球菌；不溶血，则API或上机。 阴性 报告凝固阴性葡萄球菌或API STARPH、上机,5.API板条试验,5.葡萄糖发酵试验,5.溶血菌落,小、黄色菌落；镜下呈四联、八叠排列细菌，则做葡萄糖发酵试验： 阳性 则转为上一个步骤试验； 阴性 报微球菌属,6.杆菌肽试验,6.CAMP试验,6.Optochin试验,6.七叶苷NaCl试验,七叶苷试验（阴性或阳性）6.5Nacl试验阴性： 1.溶血，做Optochin试验：敏感且G+矛头状双球菌、脐窝状菌落，则判断为肺炎链球菌（Optochin试验抑菌圈的直径14mm为阳性） 2.溶血：2.1.杆菌肽试验敏感，则判断为A群链球菌 2.2.乳胶凝集或CAMP阳性，则判断为B群链球菌 2.3.其它上机 3.溶血 则上机,6.阿拉伯糖、山梨醇,七叶苷试验阳性6.5Nacl试验阳性， 则判断为肠球菌属： 1.阿拉伯糖阴性、山梨醇阳性则判断为粪肠球菌 2.阿拉伯糖阳性、山梨醇阴性则判断为屎肠球菌,葡萄球菌属,葡萄球菌属概述,葡萄球菌属（Staphylococcus）是一类触酶试验阳性的革兰氏阳性球菌，包括金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、中间型葡萄球菌属、施氏葡萄球菌、路邓葡萄球菌等32个种。因常堆聚成葡萄串状，故名。 葡萄球菌在自然界中分布广泛，存在于空气、水、尘埃及人体皮肤表面、鼻、咽等。多数为非致病菌。少数可导致疾病。,形态与染色,球形或稍呈椭圆形，直径0.4-1.2um，排列成葡萄球状。葡萄球菌无鞭毛、不能运动，无芽孢，除少数菌株外一般不形成荚膜。 革兰染色为阳性，其衰老、死亡或被白细胞吞噬后某些菌株可被染成革兰阴性。,金黄色葡萄球菌,表皮葡萄球菌,腐生葡萄球菌,菌落特征：光滑、完整微隆起、半透明，-溶血，奶黄色、橙黄色、柠檬色、白色（ 脂溶性色素）,菌落特征：菌落相对较小，2.56.0mm，取决于不同菌株，通常不产生色素，某些菌株产生黏液性常黏附在琼脂表面,菌落特征：菌落58mm大小，完整，有光泽，不透明、光滑，比前面提到菌种菌落较凸起，约一半菌株产色素，奶油、黄-橙色。,培养特性,头葡萄球菌,孔氏葡萄,木糖葡萄,金黄色葡萄球菌,链球菌属,链球菌属概述,链球菌属（Streptococcus）是一群触酶实验阴性、呈链状排列的革兰氏阳性球菌，广泛存在于自然界和人及动物粪便和健康人鼻咽部，可引起各种化脓性炎症、猩红热、丹毒、新生儿败血症、脑膜炎、产褥热以及链球菌变态反应性疾病等 该菌属种类繁多，目前临床上仍沿用Lancefield血清学方法分为A、B、C、D、E、F、G群，或根据其在血平板上的溶血现象进行分类（溶血或完全溶血、溶血或草绿色溶血、溶血或不溶血）,根据溶血现象分类, 型溶血性链球菌 菌落周围有不透明溶血环。多为条件性致病菌。 型溶血性链球菌 菌落周围形成完全透明的无色的溶血环。致病力强。 型链球菌 不产生溶血素，菌落周围无溶血环，也称为不溶血性链球菌。无致病性，常存在于乳类和粪便中，偶尔引起感染。,形态与染色,球形或卵圆形，直径0.6-1.0um，呈链状排列，短者2-8个细菌组成，长者有20-30个细菌组成。部分幼龄培养物可见到透明质酸形成的荚膜。 无芽孢，无鞭毛，革兰染色阳性。,肺炎链球菌,菌落特征： 生长在血琼脂平板或哥伦比亚血平板上的菌落圆形，表面光滑、灰白色、边缘整齐、半透明，开始扁平以后中心塌陷，呈脐窝状，具体呈矛头状成双排列。该菌Optochin敏感，胆汁溶菌试验阳性。,脐窝状菌落,粘液状菌落,原理：Optochin（乙基氢化去甲奎宁的商品名） 可干扰肺炎链球菌叶酸的生物合成， 抑制该菌的生长 故肺炎链球菌对其敏感，而其他链球菌 对其耐药。 Optochin试验抑菌圈的直径14mm为阳性,Optochin敏感试验,临床标本培养后混杂在口腔正常菌群中的化脓链球菌,化脓性链球菌,杆菌肽（Bacitracin）试验,操作：K-B法贴杆菌肽纸片（直径6mm，0.04U/片），常规培养18-24h 结果判读：抑菌圈10mm 敏感。,无乳链球菌,金葡菌,原理：细菌具有“CAMP”因子，能促进葡萄球菌溶血素的活性，使两种细菌在划线处呈现箭头形透明溶血区。 操作：血平板上待测菌与金葡菌垂直划线，划线之间留出 0.5-1cm ,不能相接。,CAMP试验,马链球菌 溶血,无乳链球菌,血清分群诊断： A、B、C、D、F、G,链球菌属,肠球菌属,肠球菌属概述,肠球菌属是一组主要存在于人类或动物肠道、具有共同生化特征的革兰阳性球菌，归属俩球菌科。主要包括：粪肠球菌、屎肠球菌、鸟肠球菌、铅黄肠球菌等。通常为Lancefield血清D群。1989年，依据Facklam和Collins的分类，肠球菌属内包括十二种及一个变异种。 它们是：粪肠球菌（E.faecalis） 屎肠球菌（E.faecium) 鸟肠球菌(E.avium) 酪黄肠球菌(E.casseliflavus) 坚忍肠球菌(E.durans) 鸡肠球菌E.galinarum) 芒地肠球菌(E.mundii) 恶臭肠球菌(E.maladoratum)希拉肠球菌(E.hirae) 孤立肠球菌（E.solitarius） 棉子糖肠球菌(E.raffinosus) 假鸟肠球菌(E.pseudoavium) 粪肠球变异株(E.faecalis var)。,形态与染色,肠球菌属的细菌为革兰氏阳性球菌，多数菌种成双或呈短链状排列；一般无芽孢，无荚膜