尼妥珠单抗不同给药时间对人肺腺癌A549、Calu6细胞放射增.ppt

尼妥珠单抗不同给药时间对人肺腺癌A549、Calu-6细胞放射增敏作用的研究,第一作者：刘晓斌 指导教师：袁智勇 天津医科大学附属肿瘤医院 放疗科/肺癌诊治中心,研究背景,肺癌发病率高 ，非小细胞肺癌占80%， 总5年存活率低。 放疗疗效仍不理想 。 放射增敏剂可以提高放疗疗效。分子 靶向药物：低毒、高效，表皮生长因 子受体（EGFR）成为治疗肺癌靶点。,存在问题,？EGFR抑制剂联合放疗的最佳给药时 间尚不明确。 ？ EGFR抑制剂联合放疗治疗相同类型 肿瘤时，疗效差别较大，具体原因不明， 尚缺乏预测放射增敏疗效的相关指标。,研究对象和目的,对象 细胞系：人肺腺癌A549、Calu-6细胞系 主要试剂：尼妥珠单抗 主要仪器：医科达直线加速器 目的 明确尼妥珠单抗联合放疗的最佳给药时间。 两种细胞采用相同实验方案，观察结果是否相同，并探讨产生差异的原因。,实验设计,放疗,细胞克隆 形成实验,SER,流式细胞术,Western blot,细胞周期 细胞凋亡,Akt pAkt,Bax BCL-2,P21,p-DNA-PK,放射损伤,下游通路,凋亡指标,关卡蛋白,原因,MTT实验计算 A549、Calu-6各自的IC20 /IC50值,同时加药,24h后加药,24h前加药,Western blot检测A549、Calu-6EGFR表达,实验结果,WESTERN BIOT检测两种细胞EGFR表达,A:A549或者Calu-6细胞 B:阳性对照 C:阴性对照,MTT检测尼妥珠单抗对两种细胞的增殖抑制作用,24hIC20,克隆形成曲线,A549,Calu-6,克隆形成结果,O N R,NR NR RN,A549细胞周期图,O N R,NR NR RN,NR NR RN,NR NR RN,A549细胞周期结果,*表示与相同时相其它实验组比较P值均0.05,Calu-6细胞周期图,O N R,NR NR RN,Calu-6细胞周期结果,*表示与相同时相其它实验组比较P值均0.05,O N R,NR NR RN,A549细胞各组凋亡图,NR NR RN,Calu-6细胞各组凋亡图,O N R,NR NR RN,A549、 Calu-6细胞凋亡结果,*表示与相同细胞系其它实验组比较P值均0.05,WESTERN BLOT,各组Akt、pAkt灰度值,*与各个实验组比较，p0.05,小结,相同的结果 两种细胞NR组的SER最高。 两种细胞NR组的G2/M期比例和凋亡率最高 。 两种细胞NR组的Bax、 P21达最高值，Bcl-2 、phospho-DNA-PK达最低值。各组Akt表达无差异。 pAkt表达在NR组表达减至最低 。 上述改变表明两种不同的细胞系，尼妥珠单抗放疗协同效应最佳顺序均为放疗前24h给药。,小结,不同的结果 尼妥珠单抗对A549细胞的抑制作用更强。 尼妥珠单抗无论何时给药均对A549细胞产生放射增敏作用，而Calu-6细胞仅见于放疗前给药。 Calu-6细胞N组的G0/G1期阻滞不明显， NR组、R N 组未见G2/M期比例和凋亡率升高。 A549细胞EGFR表达较高，而Calu-6细胞Akt、 pAkt表达较高。,讨论,A549、Calu-6细胞实验结果不同的潜在原因： EGFR单抗的放射增敏作用与肿瘤细胞表面的EGFR表达水平密切关系。 Akt、 pAkt可能是抗EGFR疗法中的耐药因子。 推测Calu-6细胞系若要进一步增强放射增敏效应，是否应加大药量或是延长作用时间。 尼妥珠单抗对A549、Cal