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甲型肝炎与甲肝减毒活疫苗,浙江普康生物技术股份有限公司 重庆智飞生物制品有限公司,浙江普康生物技术股份有限公司位于美丽的西子湖畔，是以浙江省医学科学院为技术依托建立起来的高科技企业。公司创立于1991年。生产甲型肝炎减毒活疫苗(H2减毒株)冻干粉针剂。,甲型肝炎减毒活疫苗（H2毒株)发明者、 中科院院士、公司董事长毛江森研究员,国际先进水平的生产、检验设备,一 概述：,.甲型肝炎是由甲型肝炎病毒HAV（hepatitis A virus）引起的急性传染性疾病。 甲型肝炎世界各地都有发病，年发病数200万。 经济欠发达国家，特别是热带、亚热带地区，幼儿期普遍受感染。 我国是甲肝高发的国家，不少地区甲肝年发病率100/10万。90年代以前全国年发病60 100万例。 青少年 及儿童是主要的发病对象。近几年，成年人的发病率也呈上升趋势。,流行特征（1）：,甲肝每5-10年为一个流行周期，冬春季是高发季节。甲肝的流行与社会经济的发达和环境卫生水平密切相关。 甲肝病毒感染率，发展中国家高，发达国家低。我国沿海地区、北方地区高，南方地区低。 免疫水平低者，当水、食物等被病毒污染时，就比较容易引起流行。,流行特征（2）：,潜伏期和发病后几天内的粪便和血液有传染性。甲肝病毒从粪便中排出起始于发病前1-2周，发病时达高峰。 甲肝的流行通常发生在人口密集的群体。如幼托机构，学校，部队，厂矿等。 病毒可通过人直接接触或通过被病毒污染的食物、饮水和饮料等传播；多次发现生吃贝壳类食物而引发流行。,全球最严重的一次甲肝暴发流行：,1988年上海甲肝暴发，集中发病32万例，发病率4082.6/10万。 波及江苏、浙江等省。 20-39岁年龄占发病总数的83.5%。 生食被HAV污染的毛蚶所传播。,二、甲肝疫苗的种类,1.甲肝灭活疫苗：Merck（默沙东）的Vaqta；GSK（葛兰素史克）的Havrix；Baster（巴斯德）的Bavition。 甲醛灭活（有效的灭活方法）；可诱导产生高水平的血清抗体和阳转率；但无法阻止HAV在消化道内的一级繁殖；增加HAV的阴性感染。 2.甲肝减毒活疫苗：普康的H2 strain(H2毒株）,长春的 L-A1 strain（L-A1毒株）。 安全性好，无毒力返祖；免疫反应全面，保护作用持久；可阻止HAV在消化道内的一级繁殖。,二、甲肝疫苗的种类,3.联合疫苗：HA-Hb疫苗； HA-Typhoid（甲肝-伤寒）疫苗；毒粒HA疫苗。 4.研制中的HA分子疫苗： 亚单位疫苗：重组DNA技术，Vp1, Vp3的载体表达 合成肽疫苗：Vp1, Vp2, Vp3 存在构象依赖性 HAV空壳疫苗：用重组痘苗病毒表达的核壳多聚蛋白量较少。,甲肝减毒活疫苗的研究,甲肝灭活疫苗的研究,甲肝减毒活疫苗的优点,活病毒增殖与死抗原刺激的综合作用 活疫苗不但能产生体液免疫（抗体），还能诱导产生细胞免疫. 活疫苗有很强的免疫回忆反应。 活疫苗保护作用持久。（实际观察已达15年以上）,三、甲肝活疫苗的安全性,基因序列的改变 H2株与野毒株的生物学特征不同 疫苗株口服感染能力的减弱与丧失 无毒力返祖。 局部接种反应轻微，无明显不良反应 无疫苗接种相关病例，已观察15年以上,甲型肝炎病毒（Hepatitis A Virus ) 颗粒 由60个衣壳蛋白组成20面立体对称结构,60个衣壳蛋白,小核糖核酸病毒,无细胞壁二十面体,单个衣壳蛋白结构,单股RNA,1、H2疫苗株的减毒基因表现,2、疫苗病毒的遗传稳定性 -核苷酸序列测定,3、 甲肝病毒野毒株与H2疫苗株的特性比较,接种H2株疫苗感染途径改变， 口服感染能力减弱或消失,4、疫苗株毒力返祖试验,在人二倍体细胞中于36 0C传5代; 37 0C传8代; 35 0C传11代; 猴体内传3代; 疫苗接种者排出病毒; 疫苗接触者排出病毒,疫苗株毒力返祖试验,样品来源 接种猴体毒力测定 症状 血清肝功能 肝脏病理改变 疫苗接种者排出 - - - KMB17细胞传代: - - - 36 0C传5代 - - - 37 0C传8代 - - - 35 0C传11代 - - - 猴体内传3代 - - -,疫苗株毒力返祖试验,结果: 无发病和明显肝功能改变 无肝脏病理变化 无毒力返祖现象 结论: 疫苗对人对环境无害,H2株甲肝活疫苗在中国使用15年，接种人群大于1亿，没有发现任何类甲肝病例， 流行病学证明，没有因接种甲肝活疫苗而发生甲肝病例。,举例如下： 1、大规模人体安全性观察(九五研究) 接种观察26万人，未有全身及局部副反应 2、接种一亿人份，无明显不良反应 3、浙江省嵊泗县、椒江市约14万人，接种15年追踪观察，没有发现甲肝疫苗接种相关病例。,四、甲肝减毒活疫苗 先进的生产工艺,人二倍体细胞生产（KMB17 Cell Line) 提取和纯化，纯化的活疫苗 疫苗保护剂不含人血白蛋白（国家专利，避免来自血液制品的安全风险）,甲肝活疫苗后处理工艺,纯化的必要性：细胞内增殖。 纯化的方法：物理+化学。 纯化的结果：牛血清白蛋白低于规程标准； 杂蛋白大幅减少； 灭活可能存在的其它病原体。,甲肝活疫苗（H2株）2002 2003年牛血清蛋白含量 (本结果为中国生物制品检定所抽检结果）,五、甲肝减毒活疫苗的有效性,抗体阳转率 免疫效果 疫苗接种率与甲肝发病率的关系 免疫回忆反应,甲肝疫苗H2株接种后抗HAV-IgG阳转率,浙江省绍兴县前瞻性研究4年观察结果 （1991-1994）,大规模人群考核 （国家九五攻关课题）,疫苗：H2株，浙医科院普康，滴度10 7.0 TCID50 研究现场：上海、河北省八个县、石家庄市等地 方法：个体随机分组研究： 非筛选研究13.5万人； 筛选易感者研究1.6万人。 整群随机分组研究： 接种组19.1万人；对照组16.8万人。 共约50万人的大现场流行病学考核。,甲肝活疫苗保护效果,甲肝疫苗接种率与发病率之间的相关性 ( 浙江省，嵊泗县， 1-15岁儿童组 ),甲肝疫苗接种率与甲肝发病率的相关性 -1 -15岁儿童，椒江区,甲肝活疫苗免疫回忆反应,免疫回忆反应对于免疫保护的持久性和有效性来说是非常重要的，记忆性B细胞的存在和IgG抗体的特异性，确保了再次暴露于同一种抗原的二次反应比第一次反应更快速和有效。,七、关于活疫苗的免疫持久性,在免疫学机理上，接种活疫苗可持久免疫 甲肝活疫苗实际观察免疫保护作用15年以上。 甲肝活疫苗与灭活疫苗的对比研究中，更具优越性,甲肝活疫苗与灭活疫苗的对比研究,活疫苗与灭活疫苗均有较好的免疫效果, 二者几何平均滴度(GMT) 水平相当 甲肝活疫苗免后2周抗体阳转率及GMT显著高于灭活疫苗 甲肝活疫苗远期保护效果好, 免后24月抗体滴度无明显下降. 活疫苗细胞免疫功能持久而明显 (免后2月淋巴细胞转化率高, 下降缓慢) 在甲肝流行期间, 活疫苗具有更好的应急保护效果 *文献（北京CDC):甲肝灭活疫苗与减毒活疫苗对不同人群免疫效果的研究. 中国计划免疫, 2002, 8(5):254-257.),甲肝减毒活疫苗加强免疫能诱导很好的免疫回忆反应, 其免疫学效果与史克灭活疫苗相当. 中华医学杂志, 2000, Vol.80, No.6.,冻干甲肝疫苗的应用,冻干甲肝减毒活疫苗是在液体甲肝减毒活疫苗基础研究, 临床考核及大规模流行病学考核取得显著的免疫保护效果的基础上, 研制成功的新剂型疫苗.,冻干甲肝减毒活疫苗H2株,生产工艺获国家专利, 达到国际先进水平 进口的疫苗生产线 国内第一个向世界卫生组织申报的甲肝疫苗 第一个在国外（印度）完成注册，成功出口 的疫苗,冻干疫苗的优点,提高了疫苗的稳定性 血清阳转率可达100% GMT 水平: 从 127-212 mIU/ml 到 280-1607 mIU/ml 保持有效期: 从5个月提高到18个月 减少反复冻融对活疫苗感染性滴度的影响. 利于储运,便于大规模推广使用. 使用方便，只需注射一针就可获得持久保护。,冻干疫苗的安全性,基因结构的稳定性: 基因组稳定,同源性高达99.5% 抗原决定簇不变, 只有基因亚型的改变 基因序列分析：基因发生变异，不同于野毒株. 使用经过纯化,传代的二倍体细胞, 符合WHO的要求 稳定剂不含任何污染因子 动物及猴体试验：无肝细胞损伤。 人体接种观察表明，无明显不良副反应, 未有全身及局部副反应。,冻干甲肝活疫苗 (H2株)人体接种反应观察,结果表明：冻干甲肝减毒活疫苗（H2株）不引起人体接种部位局部反应和其他不良的全身反应。 * 2例为一过性体温37.7C0, 随后正常.,冻干甲肝减毒活疫苗(H2株） 人体接种反应观察,结果表明：冻干甲肝减毒活疫苗（H2株）免后二个月 血清ALT无异常，抗体反应良好。,冻干疫苗接种后肝功能SGPT检测,Examine objects:检测对象；Abnormal objects:出现不正常者,免疫原性强,冻干甲型肝炎减毒活疫苗（H2株）具有高度免疫原性，注射一针血清阳转率为100%。,冻干甲肝减毒活疫苗（H2株） 免后抗体水平测定,注: (1) * 示数据引自中检所对批号G990225冻干苗（H2株）临床研究报告。 (2) *血清标本同时由中检所和浙江医科院病毒所同时检测 。,结果表明,1. 冻干苗一针免疫程序，免后二个月抗体反 应达到高峰值，免后13个月该高峰值仍然 保 持不变。 2. 与液体剂型苗对照组相比，冻干剂型苗抗 体滴度高于液体剂型苗数倍。,几种甲肝疫苗免后抗体水平的比较,稳定性好,冻干甲肝减毒活疫苗, 具有良好的稳定性。在4-8条件下存放21个月疫苗病毒CCID50/ml不变.,四个批号冻干甲肝减毒活疫苗 4-8 保存稳定性测定,冻干甲肝减毒活疫苗37保存 热稳定性试验,5个不同批号的冻干甲肝减毒活疫苗，放置37 恒温箱7天, 4冰箱存放苗作为原始滴度对照苗，检测甲肝病毒细胞感染性滴度。(见下表),冻干甲肝减毒活疫苗37保存稳定性测定,结果表明：冻干甲肝减毒活疫苗37放置7天，细胞感染性滴度平均下降为0.38CCID50/ml。 (国家标准1.0 CCID50/ml),接种方法,临用前用1.0ml灭菌注射用水溶解, 上臂外侧三角肌附着处，皮肤消毒待 干后，皮下一次注射。,贮存、运输及有效期,于8以下避光保存和运输 有效期18个月,接种时注意的问题,局部红、肿、热、痛一般72小时内自行缓解 注射时不要使消毒剂接触疫苗 （待酒精挥发干） 接种疫苗时避免空腹,特殊人群的免疫,